Name: N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的兴奋毒性下视网膜神经节细胞解剖特征的检查 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: 了解利用基因定向碱性磷酸酶标记法研究小鼠视网膜神经节细胞在NMDA诱导兴奋毒性下的退行性变化。该方法可揭示细胞死亡过程中的新型表型特征，为视网膜疾病治疗提供重要依据。

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本研究获得了美国国立卫生研究院-国立眼科研究所向 C.A.M. 提供的资助（项目编号：EY024376），以及国立眼科研究所视觉核心资助 P30EY028102（德克萨斯大学健康科学中心，UTHealth）的部分支持。我们还感谢 Stephen Lasher 捐赠基金（德克萨斯大学健康科学中心）和 Raye White 捐赠基金（德克萨斯大学健康科学中心）提供的财政支持。

所有动物实验均遵循美国公共卫生服务部关于实验动物人道护理和使用的政策，并经休斯顿德克萨斯大学麦戈文医学院机构动物护理和使用委员会批准。溶液的成分列于材料表中。
1. 他莫昔芬注射
<ol>
	<li>将30 mg他莫昔芬与30 μL乙醇混合。在低于沸点的水中加热1 mL葵花籽油及他莫昔芬/乙醇混合物。</li>
	<li>待他莫昔芬在乙醇中完全溶解后，迅速向该溶液中加入1 mL预热的葵花籽油。用移液器充分混匀。</li>
	<li>选用2至6个月龄、性别不限的小鼠。使用胰岛素注射器，按100 μg/g体重剂量经腹腔注射他莫昔芬溶液。根据小鼠品系确定他莫昔芬注射次数。本方案中，连续四天每日注射一次。 
	注意：由于他莫昔芬溶液与高密度油混合，使用带可拆卸针头的注射器操作较为困难。因此，建议选用针头固定的胰岛素注射器进行他莫昔芬注射。</li>
	<li>将小鼠饲养于独立通风笼具中，每笼不超过5只，直至进行NMDA注射。</li>
</ol>
2. 将NMDA溶液注射到小鼠眼睛中
<ol>
	<li>在无菌1×PBS中配制20 mM的NMDA溶液。使用连接35G针头的纳米注射器，以100%乙醇清洗20次，再用无菌超纯水额外清洗20次。用1 μL NMDA溶液填充纳米注射器。</li>
	<li>通过腹腔注射给予小鼠酮胺/赛拉嗪在1×PBS中的混合溶液（80/10 mg/kg体重），进行麻醉。通过尾部和脚趾夹捏的反射回缩反应评估小鼠是否失去意识。</li>
	<li>将麻醉后的小鼠置于体视显微镜下，使其右眼朝上，鼻部朝向右侧。在右眼球表面滴加一滴0.5%盐酸丙帕卡因溶液，以实现局部麻醉。</li>
	<li>使用无菌30G注射针在7点钟位置刺穿角膜缘，形成一个小孔。在体视显微镜下观察针头的位置和方向。确保注射针的尺寸略大于纳米注射针，以便于顺利插入。</li>
	<li>小心地将注射针从眼球中取出，并妥善处理。在体视显微镜引导下，将纳米注射针以45°角经角膜缘插入玻璃体。</li>
	<li>缓慢向玻璃体内注射1 μL NMDA溶液。注射完成后，将纳米注射针在玻璃体内保留约10秒，以防止注射液外流。</li>
	<li>小心缓慢地将纳米注射针从眼部撤出。在注射眼的角膜上涂抹0.5%红霉素眼膏。</li>
	<li>将小鼠放入垫有加热垫的笼子中。每15分钟监测一次，直至其完全从麻醉中恢复。饲养小鼠一至两周，直至组织采集。</li>
</ol>
3. 组织采集与碱性磷酸酶（AP）染色
<ol>
	<li>采用 CO2&#160; 窒息法处死小鼠，随后进行颈椎脱位。使用 Vanna 剪刀小心剪断连接眼球的肌肉和视神经。</li>
	<li>用镊子夹取眼球并转移至分别标记的 2.0 mL 离心管中。</li>
	<li>将眼球置于 10% 中性缓冲福尔马林中，室温固定 10 分钟。随后按以下步骤将视网膜平铺于硝酸纤维素膜滤膜上：
	<ol>
		<li>将眼球转移至含有 1× PBS 的 10 cm 培养皿中。用镊子夹住附着在眼球上的肌肉组织，使用 30G 注射针头在角膜缘处打孔。将 Vanna 剪刀尖端插入孔中，沿锯齿缘剪开一圈。用镊子取出眼杯中的晶状体。</li>
		<li>在眼杯上做 3–4 道切口，用镊子夹住视网膜色素上皮（RPE），轻轻将其从视网膜上剥离。</li>
		<li>剪取一小块硝酸纤维素膜滤膜并浸入 1× PBS 中。将分离的视网膜放置于滤膜上，用细毛笔尖轻推视网膜周边区域，使视网膜边缘贴附于滤膜上。</li>
		<li>夹住滤膜边缘，缓慢将其从 1× PBS 中拉出，确保视网膜保持附着并展平在滤膜上。将视网膜/滤膜置于纸巾上 1 分钟，以帮助固定视网膜与滤膜的结合。</li>
		<li>将视网膜/滤膜重新转移回含有 1× PBS 的培养皿中。尽可能使用镊子和/或细毛笔小心清除视网膜上的碎片、毛发和玻璃体。为区分注射侧与未注射侧视网膜，可将滤膜修剪成不同形状。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将视网膜/滤膜重新转移回培养皿中，加入 10% 中性缓冲福尔马林，室温下轻轻振荡固定 5 分钟。</li>
	<li>准备 65 °C 水浴，将 30 mL 1× PBS 预热于 50 mL 玻璃烧杯中。直接将视网膜/滤膜转移至预热的 1× PBS 中，在 65 °C 下孵育 30 分钟。 
	注意：该热处理步骤可灭活内源性碱性磷酸酶（AP）活性，从而避免视网膜染色背景过强。必须在加热溶液中处理视网膜，以有效消除背景信号。</li>
	<li>热处理后，将视网膜转移至含有 AP 缓冲液（100 mM Tris，pH 9.5，100 mM NaCl，50 mM MgCl2）的 30 mm 培养皿中。</li>
	<li>在室温下轻轻振荡孵育视网膜 5 分钟，以完成缓冲液置换。 
	注意：此步骤将视网膜内的缓冲液由 1× PBS 更换为 AP 缓冲液，防止显色过程中发生化学沉淀。</li>
	<li>弃去 AP 缓冲液，加入显色液（10 mL AP 缓冲液中含 30 μL 10 mg/mL BCIP 和 60 μL 10 mg/mL NBP）。</li>
	<li>将培养皿置于避光盒中，在室温下轻轻振荡孵育 1 至 2 天，直至碱性磷酸酶（AP）染色强度达到成像要求。</li>
	<li>用 1× PBS 在室温下轻轻振荡清洗视网膜两次，每次 5 分钟，以终止反应。</li>
	<li>用 10% 中性缓冲福尔马林在室温下轻轻振荡固定视网膜 10 分钟。</li>
	<li>用 1× PBS 在室温下轻轻振荡清洗视网膜三次，每次 5 分钟。随后在室温下依次用 30% 乙醇和 50% 乙醇各孵育 30 分钟，进行脱水处理。</li>
	<li>使用细毛笔轻轻将视网膜从滤纸上剥离。将无滤膜的视网膜在室温下依次进行 70% 乙醇脱水 30 分钟，再于 100% 乙醇中孵育两次，每次 30 分钟，均轻轻振荡。</li>
	<li>在玻璃培养皿中使用苯甲酸苄酯/苯甲醇（2:1, v/v）透明液在室温下轻轻振荡透明 30 分钟至 2 小时。 
	注意：此透明步骤不应过夜进行，因长时间孵育常导致 AP 染色信号丢失。透明液可能溶解塑料，因此操作必须在玻璃容器中进行。</li>
	<li>将载玻片用双面胶带固定，以形成盖玻片和视网膜的支撑平台。将视网膜置于载玻片上，加入透明液填充空间，加盖盖玻片，并用指甲油封片，以固定视网膜和盖玻片。</li>
	<li>使用 Zeiss Apotome 显微镜对 AP 染色的视网膜进行成像。</li>
</ol>

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<li>Kiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+Roles+of+Tbr1+in+the+Formation+and+Maintenance+of+the+Orientation-Selective+J-RGCs+and+a+Group+of+OFF-Sustained+RGCs+in+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Essential Roles of Tbr1 in the Formation and Maintenance of the Orientation-Selective J-RGCs and a Group of OFF-Sustained RGCs in Mouse.</a> Cell Rep. 27 (3), 900-915.e5 (2019).</li>
<li>Kiyama, T., Chen, C. K., Zhang, A., Mao, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Susceptibility+of+Retinal+Neurons+to+the+Loss+of+Mitochondrial+Biogenesis+Factor+Nrf1%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Differential Susceptibility of Retinal Neurons to the Loss of Mitochondrial Biogenesis Factor Nrf1.</a> Cells. 11 (14), 2203(2022).</li>
<li>Badea, T. C., Wang, Y., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+noninvasive+genetic%2Fpharmacologic+strategy+for+visualizing+cell+morphology+and+clonal+relationships+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A noninvasive genetic/pharmacologic strategy for visualizing cell morphology and clonal relationships in the mouse.</a> J Neurosci. 23 (6), 2314-2322 (2003).</li>
<li>Mao, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eomesodermin%2C+a+target+gene+of+Pou4f2%2C+is+required+for+retinal+ganglion+cell+and+optic+nerve+development+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Eomesodermin, a target gene of Pou4f2, is required for retinal ganglion cell and optic nerve development in the mouse.</a> Development. 135 (2), 271-280 (2008).</li>
<li>Shi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+interactions+between+Brn3+transcription+factors+in+retinal+ganglion+cell+type+specification%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genetic interactions between Brn3 transcription factors in retinal ganglion cell type specification.</a> PLoS One. 8 (10), e76347(2013).</li>
<li>Muzyka, V. V., Brooks, M., Badea, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+developmental+dynamics+of+cell+type+specification+genes+in+Brn3a%2FPou4f1+Retinal+Ganglion+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Postnatal developmental dynamics of cell type specification genes in Brn3a/Pou4f1 Retinal Ganglion Cells.</a> Neural Dev. 13 (1), 15(2018).</li>
<li>Liu, S., Aldinger, K. A., Cheng, C. V., Kiyama, T., Dave, M., McNamara, H. K., Zhao, W., Stafford, J. M., Descostes, N., Lee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRF1+association+with+AUTS2-Polycomb+mediates+specific+gene+activation+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">NRF1 association with AUTS2-Polycomb mediates specific gene activation in the brain.</a> Mol Cell. 81 (22), 4663-4676.e8 (2021).</li>
<li>Kiyama, T., Altay, H. Y., Badea, T. C., Mao, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pou4f1-Tbr1+transcriptional+cascade+controls+the+formation+of+Jam2-expressing+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Pou4f1-Tbr1 transcriptional cascade controls the formation of Jam2-expressing retinal ganglion cells.</a> Front Ophthalmol. 3, 1175568(2023).</li>
<li>Park, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoting+axon+regeneration+in+the+adult+CNS+by+modulation+of+the+PTEN%2FmTOR+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway.</a> Science. 322 (5903), 963-966 (2008).</li>
</ol>

作者声明无竞争利益。

在本研究中，我们利用一种基因定向的稀疏AP标记系统，并结合多种基因改造的小鼠品系，检测了NMDA诱导的多种RGC和AC亚型中的退行性事件，发现了若干特征性表型29,31,39。最显著的表型是NMDA注射视网膜中RGCs和ACs数量显著减少（图2A-D），这与以往使用细胞类型特异性报告基因小鼠品系或全RGC标记物进行免疫荧光染色的研究结果一致（图2E-F）。我们先前发现，表达Tbr2的RGC本质上即为ipRGCs34,35,40。尽管许多先前的研究表明ipRGCs对NMDA损伤更具抵抗...

创伤性脑损伤（TBI）是一种导致脑部神经元受损的突发性损伤。在重度TBI中，例如由车祸、运动碰撞或爆炸引起的冲击伤，机械力可能破坏细胞结构，引发炎症、氧化应激、兴奋性毒性，最终导致神经元死亡1,2。
视网膜是中枢神经系统（CNS）中最易接近的部分，已被用作研究兴奋性毒性分子机制以及开发治疗干预策略的创伤性脑损伤（TBI）模型系统3,4,5。用于TBI研究的最相关的视网膜模型包括视神经 crush 模型和N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的视网膜兴奋性毒性模型。在NMDA诱导的兴奋性毒性视网膜模型中，视网膜神经节细胞（RGCs）被确定为最易受损伤的视网膜神经元类型，因为RGCs以谷氨酸作为主要的兴奋性神经递质，并通过多种类型的谷氨酸受体（包括AMPA受体（AMPARs）、KAPA受体（KAPARs）和NMDA受体）来触发动作电位6。除了RGCs外，其他视网膜细胞和神经回路也可能受到NMDA处理的影响7,8,9。玻璃体内注射NMDA会导致NMDA受体持续开放，从而引起过量钙离子内流进入细胞，导致神经元过度兴奋和钙稳态失衡10,11,12,13。
NMDA受体是由三个亚基组成的异源复合物：GluN1、GluN2和GluN314,15,16,17,18。GluN1由Grin1基因编码，由于Grin1的可变剪接，在小鼠中存在八种亚型。GluN2有四种不同的亚基（a-d），分别由四个独立的基因Grin2a-2d编码。GluN3有两种不同的亚基（a和b），分别由Grin3a和Grin3b编码。根据单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据19,20，Grin1在大多数视网膜神经节细胞（RGC）亚型中高表达（图1A），在少数无长突细胞（AC）亚型中呈弱至中等水平表达（图1B）。Grin2a在较少的RGC和AC亚型中富集，而Grin2b在大多数RGC和许多AC亚型中呈中等水平表达（图1A、B）。Grin2c、Grin2d和Grin3b在RGC和AC中的表达水平极低（图1A、B）。Grin3a的表达可见于少数RGC亚型，并在少数AC中呈弱表达（图1A、B）。除了NMDA受体的作用外，通过钙通透性AMPAR介导的钙内流所引发的兴奋性毒性已在多种疾病模型中被报道21。NMDA受体亚基的表达模式可能为解释为何NMDA诱导的兴奋性毒性主要靶向RGC和AC提供线索9,10,14,22,23。
评估NMDA诱导的视网膜表型的传统方法包括使用苏木精和伊红（H&amp;#38;E）染色检测组织学异常、TUNEL法检测细胞死亡，以及利用细胞类型特异性生物标志物进行免疫荧光（IF）染色8,10,24,25,26。在细胞水平上，共聚焦成像和染料填充技术已被用于研究NMDA诱导视网膜模型中视网膜神经节细胞（RGCs）死亡过程的事件序列。这些方法为了解死亡RGCs的亚细胞结构提供了重要见解，并有助于鉴定在NMDA损伤下仍能存活的耐受性RGC类型27,28。
本研究采用基因激活型碱性磷酸酶（AP）染色法，研究NMDA诱导的兴奋性毒性条件下小鼠视网膜神经元的解剖特征和表型29,30,31。选择该方法的原因在于其操作简便、成本低廉，并能够全面展示整个视网膜中各类神经元亚型的解剖学特征，因而非常适合进行宏观评估和大规模比较分析。该方法为不同基因标记的视网膜神经元在整体及亚细胞水平上对NMDA的反应提供了新的见解。我们预计该策略可广泛应用于评估多种影响神经元结构和突触组织的疾病模型中的形态学变化4,26,32,33。

<table><tbody><tr><td>0.5% 红霉素眼膏&amp;nbsp;</td><td>Bausch+Lomb</td><td>24208-910-55</td><td></td></tr><tr><td>0.5% 盐酸丙帕他卡因&amp;nbsp;</td><td>Bausch+Lomb</td><td>24208-730-06</td><td></td></tr><tr><td>10% 中性缓冲福尔马林&amp;nbsp;</td><td>VWR</td><td>89370-094</td><td></td></tr><tr><td>10 cm 培养皿</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP399</td><td>用水稀释制备 1x PBS，并进行高压灭菌。&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>2.0 ml 离心管</td><td>VWR</td><td>525-1136</td><td></td></tr><tr><td>30 号注射针头</td><td>EXELINT International</td><td>26437</td><td></td></tr><tr><td>30 mm 培养皿</td><td>Falcon</td><td>35208</td><td></td></tr><tr><td>苯甲醇&amp;nbsp;</td><td>Acros Organics</td><td>447000010</td><td></td></tr><tr><td>苯甲酸苄酯</td><td>Acros Organics</td><td>105860010</td><td></td></tr><tr><td>硝酸纤维素膜滤器</td><td>Cytiva</td><td>7188-002</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72204-01</td><td></td></tr><tr><td>双面胶带</td><td>Scotch</td><td>597020</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td>Decon Labs</td><td>2716</td><td>碱性磷酸酶染色后脱水时避免使用 Fisher Bioreagents（货号：BP2818），该试剂会导致视网膜变形。</td></tr><tr><td>镊子</td><td>TED PELLA</td><td>505</td><td></td></tr><tr><td>加热垫</td><td>Theratherm</td><td>710298-001</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素注射器</td><td>BD</td><td>329424</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>Dechra</td><td>17033010110</td><td></td></tr><tr><td>显微镜</td><td>Zeiss</td><td>Axio Imager 2</td><td></td></tr><tr><td>指甲油</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Nanofil 注射器</td><td>World Precision Instruments</td><td>NANOFIL</td><td></td></tr><tr><td>Nanofil 针头</td><td>World Precision Instruments</td><td>NF25BL</td><td></td></tr><tr><td>NBT/BICP 试剂盒</td><td>Invitrogen</td><td>N6547</td><td></td></tr><tr><td>NMDA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3262</td><td></td></tr><tr><td>画笔</td><td>Kingart</td><td>6650</td><td></td></tr><tr><td>载玻片</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>Motic</td><td>DM143</td><td></td></tr><tr><td>葵花籽油</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5007</td><td></td></tr><tr><td>他莫昔芬</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5648</td><td>将他莫昔芬溶液储存于 4 &amp;deg;C 避光盒中，一周内使用完毕。</td></tr><tr><td>Vanna 剪刀&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>水浴锅</td><td>Lab-Line</td><td>18052</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪</td><td>Dechra</td><td>17033-0099-05</td><td>商品名：Rompun</td></tr></tbody></table>

n-甲基-d-天冬氨酸（nmda）诱导兴奋性毒性条件下视网膜神经节细胞解剖学特征的检测

Examination of Anatomical Features of Retinal Ganglion Cells Under N-methyl-D-aspartic Acid (NMDA)-induced Excitotoxicity

视网膜神经节细胞（RGCs）是视网膜的输出神经元，负责将视觉信息传递至大脑。在成熟的小鼠视网膜中，已根据基因组学、形态学和功能特征鉴定出超过40种RGC类型。RGC的退变是多种致盲性视网膜疾病（如青光眼和外伤性视神经病变）的典型特征。深入理解不同疾病条件下RGC退变、存活及抗损伤能力背后的细胞与分子机制，对于开发有效的治疗干预手段至关重要。&#160;为了研究RGC的退变过程，我们采用了一种简单而强大的技术，该技术此前已广泛应用于视网膜发育研究中，用于分析RGC的形态及其在中枢的投射。本文中，我们将该方法应用于评估NMDA诱导的兴奋性毒性条件下RGC的解剖学表型。该方法能够随时间推移可视化大量退变中的RGC，使我们得以描绘退变事件的发生顺序，识别濒死RGC的标志性表型，并区分对NMDA诱导损伤具有抵抗性的RGC。

向玻璃体注射NMDA可诱导视网膜神经节细胞（RGC）死亡，传统上通过组织学染色或使用RGC标志物的免疫荧光（IF）染色来检测。在本实验条件下，采用针对泛RGC标志物RBPMS的传统IF方法，我们证实，在注射NMDA后1周，RGC数量减少了约65%（图2E-G）。先前的研究发现，表达Tbr2的RGC确实是内在光敏性视网膜神经节细胞（ipRGC）34,35。通过对Tbr2CreER2; RosaiAP小鼠视网膜进行碱性磷酸酶（AP）染色，我们观察到仅少量表达Tbr2的RGC存活，而大多数表达Tbr2的RGC和无长突细胞（ACs）在注射后1周已消失（比较 图2A、B）34,...

本文描述了一种基于基因定向的碱性磷酸酶（AP）标记方法，用于研究在NMDA诱导的兴奋性毒性下小鼠视网膜的解剖特征和表型变化。结合多种视网膜神经节细胞（RGC）亚型特异性报告基因小鼠品系，我们在整个退变过程中揭示了濒死RGC中新的表型特征。

N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导兴奋性毒性条件下视网膜神经节细胞解剖学特征的检测

视网膜神经节细胞（RGCs）是视网膜的输出神经元，负责将视觉信息传递至大脑。在成年小鼠中……

我们正利用remodel技术研究视网膜神经节细胞的发育、存活及其退化过程。我们使用经过基因改造的小鼠品系来标记特定类型的细胞，以监测这些细胞的退行性变化。通过本方案，我们可在NMDA诱导的兴奋性毒性条件下，研究视网膜神经节细胞的解剖特征和表型。该方法为了解视网膜神经节细胞在整体和亚细胞水平上对NMDA的反应提供了新的见解。首先，在小鼠经安乐死后，取其注射NMDA后的 eyeball，并转移至一个单独标记的2毫升离心管中。将eyeball在室温下用10%中性缓冲甲醛固定10分钟，并准备硝酸纤维素膜用于视网膜平铺。固定后，将eyeball转移至含有10厘米培养皿的

examination-anatomical-features-retinal-ganglion-cells-under-n-methyl

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科研

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Biology

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N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的兴奋毒性下视网膜神经节细胞解剖特征的检查

玻璃体内注射是视觉科学研究中用于眼部疾病或局部治疗直接给药的常用技术。本视频展示了一种使用1...

建立眼病模型的玻璃体腔注射法

本视频展示了三种视网膜形态计量学分析方法，包括测量内核层厚度、定量视网膜神经节细胞（RGCs）数量以及测量RGCs的大小。该技术可为形态计量学分析提供一种简单而科学的平台。...

视网膜切片的形态计量分析

本视频展示了一种利用临床3 T磁共振扫描仪对 naïve 小鼠视觉投射通路进行增强磁共振成像的方法，并可用于对急性视神经 crush 损伤及敲除小鼠（p50KO）中慢性视神经退行性变开展重复性和纵向的 in vivo...

体内小鼠视神经纤维完整性的对比增强MRI成像

免疫组织化学实验方案用于研究特定蛋白质在视网膜中的定位。钙成像技术用于研究视网膜神经节细胞及其轴突中的钙动力学。...

大鼠视网膜全层标本的免疫组织化学与钙成像方法

本方案描述了一种从6-7日龄幼鼠中分离和培养原代小鼠大脑颗粒神经元（CGNs）的简单方法，可高效转导CGNs以进行功能缺失和功能获得研究，并利用同一培养模型模拟NMDA诱导的神经元兴奋性毒性、低钾诱导的细胞死亡、DNA损伤以及氧化应激。...

建立小鼠原代小脑颗粒神经元的神经元死亡与变性模型

本实验方案的目标是促进对NMDA受体（NMDAR）的大规模研究，并允许检测小分子的调节作用及其治疗应用。...

一种高通量钙流检测法，用于研究对甘氨酸/D-丝氨酸和谷氨酸敏感的NMDA受体

活体成像是研究健康与疾病状态下生物学的有力工具。本方案描述了使用标准双光子显微镜对小鼠视网膜进行经瞳孔成像的方法。同时展示了多种活体成像技术，用于对视网膜中多个细胞群体进行荧光标记。...

经瞳孔双光子活体小鼠视网膜成像

本文介绍了一种利用共聚焦活细胞显微镜检测原代海马神经元和皮层神经元基础氧化还原状态差异以及对急性干扰的氧化还原反应差异的实验方案。该方案经少量修改后也可适用于其他细胞类型和显微镜系统。...

利用比率型探针对原代神经元中线粒体谷胱甘肽氧化还原状态进行活体成像

甲醇可作为视网膜铺片制备和长期保存的辅助固定介质，有助于视网膜神经节细胞的研究。...

基于甲醇的视网膜全层制备法用于视网膜神经节细胞的研究

本视频介绍了通过将荧光金（fluoro-gold, FG）施加于上丘（superior colliculus,...

通过在上丘表面施加氟金逆行标记视网膜神经节细胞

了解利用基因定向碱性磷酸酶标记法研究小鼠视网膜神经节细胞在NMDA诱导兴奋毒性下的退行性变化。该方法可揭示细胞死亡过程中的新型表型特征，为视网膜疾病治疗提供重要依据。

N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导兴奋性毒性条件下视网膜神经节细胞解剖学特征的检测

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