Name: 适用于小鼠口腔鳞状细胞癌临床前模型的转化相关肿瘤切除模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: 了解口腔鳞状细胞癌临床前模型中肿瘤切除与复发的研究方法。该方案使用Mach Two细胞系在小鼠颊黏膜建立原位肿瘤并进行次全切除，为评估术后辅助治疗和肿瘤微环境分析提供可重复的平台。

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本工作由1R21DE034543（NIH-NIDCR）资助。我们还感谢德克萨斯大学健康科学中心实验室动物医学与护理中心的行政、兽医和维护人员所提供的支持与照护。

以下操作步骤以及动物饲养与维护工作均在休斯顿德克萨斯大学健康科学中心（UTHealth）实验动物医学与护理中心进行，并与机构动物福利委员会协调实施。相关实验方案已获得机构动物护理与使用委员会（IACUC）批准，符合美国公共卫生署关于实验动物人道护理与使用的政策中所列的原则和伦理准则。在开展以下各节操作前，请确保遵守本地IACUC制定的所有规定，并已具备经IACUC批准的动物使用方案（或同等文件）。所用试剂与设备列于下文 材料表.
1. 建立颊黏膜原位口腔肿瘤
注意：本特定方案中使用 MOC2 细胞建立肿瘤17。然而，也可使用其他细胞系或细胞类型。体内成瘤所需的肿瘤细胞数量取决于细胞系，应在接种手术前进行优化。
<ol>
	<li>当肿瘤细胞培养物达到约80%融合度时，通过吸除并弃去培养基来收获细胞。</li>
	<li>为去除残留血清，用不含镁和钙的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞，加入足够体积的PBS以完全覆盖培养容器（如培养瓶）表面的贴壁细胞。</li>
	<li>向培养瓶中加入0.05%胰蛋白酶，使其充分覆盖瓶底。在37 °C、5% CO2条件下孵育约5分钟，以使细胞脱落。 
	注意：细胞脱落所需的孵育时间（2–15分钟）可能因所用细胞（即细胞系）不同而有所差异。然而，长时间暴露于胰蛋白酶可能对细胞造成损伤。若需要更长时间以实现充分的细胞脱落，应定期并密切观察细胞状态。</li>
	<li>观察到细胞脱落后，使用至少两倍于胰蛋白酶体积的完全培养基进行中和（例如，使用5 mL胰蛋白酶时，加入至少10 mL完全培养基）。</li>
	<li>将细胞悬液在室温下以350 × g 离心5分钟，并吸除上清液。</li>
	<li>用预冷的PBS重悬细胞，取部分用于计数。重复步骤1.5–1.6，再进行一次洗涤以去除任何残留的培养基。</li>
	<li>使用额外的PBS将细胞调整至最佳接种浓度（即每30 µL体积含3 × 104 MOC2细胞）。将细胞悬液置于冰上，直至使用前。</li>
	<li>使用1%–3%异氟烷麻醉小鼠，同时在小型动物麻醉舱中补充1.5 L/min氧气。 
	注意：此阶段无需脱毛，但建议进行脱毛以帮助观察接种部位并提高接种的一致性。若选择在此阶段脱毛，请遵循步骤3.3–3.5中的说明。</li>
	<li>充分混匀细胞悬液以确保细胞均匀分布，并用0.3 mL胰岛素注射器吸取。</li>
	<li>用一只手抓住小鼠后颈部皮肤固定其身体，使小鼠腹侧朝向操作者，头部向上，以便口腔张开且易于接触。</li>
	<li>小心地将注射器插入张开的口中，以向下的角度对准左侧下颌前庭。继续将针头穿过下颊黏膜。</li>
	<li>向该区域注入30 µL细胞悬液，然后小心拔出注射器，保持该位置5秒，再缓慢退出注射器，以避免拔出时带出额外的细胞悬液。</li>
	<li>确保小鼠在接种后处于正常的生理和行为状态。</li>
	<li>分别使用天平和数字卡尺监测小鼠体重和肿瘤生长情况。定期监测肿瘤发育，每周2次或按照指定方案进行。</li>
</ol>
2. 手术材料准备
注意：强烈建议至少另有一名外科医生或手术助手在场，协助整个手术过程中的准备工作和组织协调，以帮助确保无菌状态的维持。
<ol>
	<li>选择一个干净的手术室，房间应有可关闭的门，并限制人员进出。</li>
	<li>将一个装有清洁、干燥垫料和纸巾窝巢的新笼子部分放置在电加热器上，进行预热。</li>
	<li>将玻璃珠灭菌器加热至工作温度（250–265 °C）。</li>
	<li>设置异氟烷诱导室和便携式麻醉装置，配备合适的鼻罩，并连接异氟烷、氧气及相应的废气清除系统。 
	注意：使用诱导室时，以约 3% 异氟烷浓度麻醉小鼠；使用鼻罩时，以 1%–2% 异氟烷浓度麻醉小鼠。</li>
	<li>打开水循环加热手术垫，设定温度为 38.9 °C，并将异氟烷气源固定在手术垫头部位置。</li>
	<li>使用消毒剂清洁操作台面和手术垫，并在工作区域覆盖清洁的实验台垫。</li>
</ol>
<img alt="包含手套、纱布、手术刀、镊子和缝合针等用于医疗操作的外科器械套装。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68621/68621fig1.jpg" data-altupdatedat="1779768095000" data-alt="图1"> 
图1：肿瘤切除手术选用的外科器械与材料。 (1) 外科手套，(2) 手术洞巾，(3) 纱布垫，(4) 0.3 mL 胰岛素注射器，(5) 毛巾洞巾，(6) 异丙醇消毒棉片，(7) 手术刀片，(8) 无刀片的手术刀柄，(9) 哈特曼止血钳，(10) 蚊式止血钳，(11) 显微解剖剪，(12) 显微解剖镊，(13) 布朗-艾德森镊，(14) 显微解剖镊，(15) 棉签，(16) 修剪器，(17) 4-0 涂层薇乔缝线，(18) 0.25% 布比卡因，以及 (19) 眼科润滑软膏。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68621/68621fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
3. 手术前动物的准备
<ol>
	<li>根据指定方案，在手术前 24 小时称量小鼠体重，以确定合适的麻醉剂和镇痛药物剂量。</li>
	<li>将小鼠置于诱导麻醉室中麻醉约 2 分钟，然后在手术前至少 30 分钟皮下注射镇痛药，注射部位为小鼠颈背部。</li>
	<li>若此前未在接种时进行脱毛，或之前清除的毛发已开始再生，则使用棉签蘸取少量脱毛膏，直接涂抹于肿瘤切除部位的毛发上，脱毛范围应足够宽，以确保手术过程中毛发不会进入切口区域。</li>
	<li>让脱毛膏停留约 10 秒，然后用干燥洁净的纱布擦去毛发。</li>
	<li>用生理盐水或水浸湿的纱布擦净残留的脱毛膏，再用干燥洁净的纱布将该区域擦干。 
	注意：使用电子剃毛器脱毛是可接受但较不推荐的替代方法，因为头颈部周围的皮肤可能较薄且敏感。若使用剃毛器，应避免接触眼睛等敏感区域，并拉紧松弛的皮肤，以防止对小鼠造成意外损伤。</li>
	<li>皮下注射全身性镇痛药，并在切口部位给予局部镇痛药。</li>
	<li>将麻醉后的小鼠仰卧于加热垫上，腹部朝上，鼻部应刚好位于鼻罩内。</li>
	<li>用无菌润滑眼膏在每只小鼠眼睛上涂抹少量（即足以覆盖眼球），以防止手术过程中角膜干燥。</li>
	<li>使用洁净的棉签，先用 70% 异丙醇对切除部位擦拭，再用 10% 碘液擦拭，重复三次，并确保最后一次用 70% 异丙醇将碘液彻底清除。</li>
	<li>穿戴无菌手套及适当的个人防护装备（手术服、头帽），准备至少 18 英寸宽 × 26 英寸长的无菌操作区域，并摆放所有必要的无菌器械和材料（无菌纱布、无菌棉签、无菌生理盐水、异丙醇棉签、手术器械）（图 1）。</li>
	<li>用无菌手术巾覆盖小鼠，并使用无菌剪刀在切除部位正上方剪开一个通路孔。</li>
</ol>
4. 已建立口腔肿瘤的手术切除
注意：在整个操作过程中，外科医生或助手应持续监测小鼠的呼吸和反射，以确保小鼠在麻醉状态下维持适当的氧合。根据兽医指导和机构规定，按需调整异氟烷浓度。
<ol>
	<li>使用新的手术刀，在肿瘤下方沿左侧下颌线做一个颏下切口，切口长度与肿瘤相当（图2A，B）。</li>
	<li>小心使用哈特曼止血钳扩大朝向肿瘤的切口。如有需要，用无菌纱布轻拭血液。</li>
	<li>定位肿瘤，并用镊子固定其位置（图2B）。 
	注意：此时可由助手协助使用镊子以保持对肿瘤部位的暴露（例如，将皮肤拉开）。</li>
	<li>使用手术剪在肿瘤基底部周围剪切，切除所有可见的肿瘤组织（图2C）。将皮肤复位覆盖于切除后的肿瘤部位，并使用4-0长效薇乔缝线进行4至6针间断缝合关闭切口（图2D）。 
	注意：缝合时应注意不要过紧，以免进一步损伤小鼠皮肤，同时避免日后拆线时造成潜在损伤。</li>
	<li>若需继续进行其他手术，每次额外使用前，需用70%异丙醇清洁手术器械表面，并将其置于加热珠灭菌器中灭菌10-15秒。同一套器械可用于最多5只小鼠的手术操作，或根据机构指南和规范执行。 
	注意：切除的肿瘤组织可丢弃，或保留用于后续处理与进一步分析（例如，固定用于组织学和成像；组织解离及免疫染色用于流式细胞术表型分析，具体依据研究实验计划18,19（图2E）。</li>
</ol>
<img alt="Surgical procedure on mouse tumor, experimental setup for tumor injection diagram." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68621/68621fig2.jpg" data-altupdatedat="1779768095000" data-alt="Figure 2"> 
图2通过下颊黏膜经口建立的口腔肿瘤可进行切除 通过 一种无愈合并发症的下颌下入路方法。 (A口腔内已形成的肿瘤（红色箭头）。B下颌下切口暴露肿瘤。C) 切除的肿瘤。 (D使用多根间断薇乔缝线进行伤口缝合。E切除的肿瘤。F经口接种的示意图总结。图片使用 BioRender 制作。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68621/68621fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a>
5. 切除术后护理
<ol>
	<li>缝合切口后，将麻醉气体流量调至0%，仅维持氧气供应2 以1.5 L/min的流速持续通入，直至小鼠开始恢复意识（通常少于5分钟）。若数分钟后小鼠仍保持静止且无反应，请参照机构关于兽医干预的相关规定。</li>
	<li>将小鼠轻轻转移至预热的笼子中。继续监测小鼠术后意识和活动能力。小鼠应在10分钟内恢复完全意识和正常活动能力。</li>
	<li>根据批准的方案和机构政策进行每日术后监测。</li>
	<li>手术后立即为小鼠提供“软质”食物，将浸过水的饲料颗粒放入便于取用的容器（如塑料称量皿）中，并直接置于笼内。若无并发症发生，小鼠可在下一次常规喂食时恢复食用正常的固体食物。</li>
	<li>术后前48小时（2天）内每天监测小鼠两次，之后至少96小时（4天）内每天监测一次。此后恢复正常的监测频率（即每周两次）。</li>
	<li>术后第7天，在麻醉下拆除缝线，注意避免切割或损伤小鼠。</li>
	<li>继续监测小鼠，一旦达到人道终点，应根据批准的实验方案中的安乐死标准及美国兽医协会（AVMA）指南，对动物实施人道安乐死。 
	注意：肿瘤生长动力学和动物生存率的统计分析是本方法学中的相关评估指标。对于Kaplan-Meier生存曲线，采用log-rank/Mantel-Cox检验进行统计分析。 通过 统计分析软件。对于肿瘤生长曲线，采用双向方差分析（two-way ANOVA）结合Šídák多重比较检验来比较未切除组与切除组之间的肿瘤大小。P值小于0.05被认为具有统计学意义。</li>
</ol>

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</ol>

本文介绍了一种在小鼠口腔颊黏膜中建立肿瘤并进行次全切除的简单操作步骤。以往的研究已证实，可通过小鼠舌部、颊黏膜或口底建立肿瘤模型，用于对切除后的肿瘤进行下游分析，并研究术后局部复发以及区域性和远处转移，但这些方法均存在一定局限性12,13。然而，本新建立的方法提供了一种高度可转化的口腔原位肿瘤切除模型，简化了手术建模过程。本模型通过一种无需额外使用Matrigel或类似基底膜基质的口腔癌细胞系（MOC2），在口腔内稳定地建立肿瘤。此外，先前研究已通过观察肿瘤浸润深度，对这些接种部位形成的口腔肿瘤进行了建立和有效性验证。根据已建立的口腔原位接种操作流程，该模型基于一个前提：这些真正具有侵袭性的口腔肿瘤会从口腔内的接种点向外浸润生长11,13。在本操作中，仅切除肉眼可见的肿瘤，未采用显微外科技术。基于此前已证实的此类肿瘤的浸润深度，本研究的前提是：仅切除可见肿瘤意味着部分切除，仍残留病灶。值得注意的是，在实际...

起源于喉部、咽部、下咽部、鼻腔、唾液腺和口腔的恶性肿瘤被归类为头颈部癌症。头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）占此类病例的90%以上，起源于覆盖这些解剖部位的鳞状上皮细胞1。更具体而言，口腔鳞状细胞癌（OSCC）是一种局限于口腔区域的恶性肿瘤。2022年，头颈部癌症在全球范围内是第六大常见癌症，全球约有94.7万例新发病例，每年导致48.2万人死亡2。
外科手术切除通常是头颈部癌症（包括口腔鳞状细胞癌）的一线治疗方式，术后常辅以化疗放疗1,3,4。尽管这些标准治疗手段在局部局限性或早期病例中可能具有治愈潜力，但口腔鳞状细胞癌患者仍存在较高的局部区域复发和远处转移率。事实上，不到三分之二的口腔鳞状细胞癌患者生存期能超过五年，且常伴有显著的不良反应5,6,7。越来越多的证据表明，手术过程中产生的创伤性应激会触发与组织损伤和伤口愈合相关的生理过程8,9。此外，已有研究报道，手术切除可导致免疫功能障碍，进而可能增加复发风险10。
尽管大多数口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者接受手术切除作为一线治疗，但目前仍缺乏相关的OSCC临床前原位切除模型，这些模型需能标准化肿瘤的建立和次全切除过程，并保留与肿瘤复发相关的免疫学机制，从而为该领域的研究提供关键的实验背景11,12,13。既往报道的动物切除模型包括用于研究手术免疫抑制效应的4T1乳腺肿瘤切除模型14。在OSCC研究中，已有报道在小鼠 flank 区建立异位MOC1-OVA肿瘤并进行次全切除的模型15。在原位模型方面，已有研究使用HPV相关的口咽鳞状细胞癌细胞系mEERL95建立颏下肿瘤，用于切除及复发建模，并通过手术将引流淋巴结转移至未处理小鼠以进一步研究16。此外，也有使用免疫缺陷小鼠开展的与原位复发相关的研究报道13。
本文建立了一种新的免疫健全、同系、原位口腔鳞状细胞癌（OSCC）临床前模型，用于标准化治疗下的肿瘤切除生存手术及术后复发研究，可在切除后一周内观察到肿瘤复发。该方法通过无需显微手术即可完成肿瘤切除，并使用小鼠口腔癌肿瘤细胞系（MOC2）——该细胞系建模时无需添加细胞或基底膜基质——进一步简化了现有模型。

<table><tbody><tr><td>0.05% 胰蛋白酶</td><td>Corning</td><td>25-052-Cl</td><td>0.53 mM EDTA，1 × [-] 碳酸氢钠&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>0.25% 盐酸布比卡因注射液</td><td>McKesson</td><td>1077280</td><td>2.5mg/kg–1mg/kg，皮内/皮下注射 20–30μL</td></tr><tr><td>0.9% 氯化钠，USP</td><td>McKesson</td><td>161736</td><td>5 mL/kg，皮下注射，静脉注射 1.5 mL</td></tr><tr><td>23 G 针头</td><td>Becton, Dickinson and Company [McKesson]</td><td>402</td><td></td></tr><tr><td>4-0 涂层薇乔缝线</td><td>McKesson</td><td>100700</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 锥形管</td><td>Thermo Scientific</td><td>33965</td><td></td></tr><tr><td>吸水实验台垫</td><td>VWR</td><td>115-0684</td><td></td></tr><tr><td>70% 异丙醇酒精棉片</td><td>Becton, Dickinson and Company [VWR]</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>自封式高压灭菌袋 5 &amp;frac14;&amp;rdquo; × 10&amp;rdquo;&amp;nbsp;</td><td>McKesson</td><td>960944</td><td></td></tr><tr><td>天平</td><td>Ohaus [VWR]</td><td>30253019</td><td></td></tr><tr><td>Bioclave Mini</td><td>Benchmark Scientific</td><td>B4000-M</td><td></td></tr><tr><td>Brown-Adson 镊子</td><td>ROBOZ [VWR]</td><td>RS-5231</td><td></td></tr><tr><td>无菌棉签 6 英寸</td><td>McKesson</td><td>999736</td><td></td></tr><tr><td>杜氏磷酸盐缓冲液 / 改良型</td><td>Cytiva</td><td>SH30028.02</td><td>[-] 钙，[-] 镁</td></tr><tr><td>Ethiqa XR&amp;Ograve;*</td><td>Fidelis Animal Health</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>3.25 mg/kg 皮下注射</td></tr><tr><td>通用手术铺巾</td><td>McKesson</td><td>68107</td><td></td></tr><tr><td>玻璃珠灭菌器</td><td>VWR</td><td>75999-324</td><td></td></tr><tr><td>玻璃珠</td><td>VWR</td><td>75999-332</td><td></td></tr><tr><td>Hartman 止血钳</td><td>Fine Science Tools [VWR]</td><td>13003-10</td><td></td></tr><tr><td>高品质便携式麻醉设备</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-8915662</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷，USP</td><td>McKesson</td><td>803250</td><td>4–5% 诱导，1–3% 维持</td></tr><tr><td>MedLED&amp;Ograve; Chrome（头灯）</td><td>KLS Martin</td><td>ML-MC7-HT-HK-X21</td><td></td></tr><tr><td>显微解剖镊</td><td>ROBOZ [VWR]</td><td>RS-5174</td><td></td></tr><tr><td>显微解剖剪</td><td>ROBOZ [VWR]</td><td>RS-5914</td><td></td></tr><tr><td>Monoject 胰岛素注射器</td><td>Cardinal Health [McKesson]</td><td>8881600145</td><td></td></tr><tr><td>蚊式止血钳</td><td>ROBOZ [VWR]</td><td>RS-7100</td><td></td></tr><tr><td>Nair 身体脱毛乳霜</td><td>Church &amp;amp; Dwight Co., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>持针器</td><td>ROBOZ [VWR]</td><td>RS-7154</td><td></td></tr><tr><td>PVP 消毒液 10% 聚维酮碘</td><td>McKesson</td><td>911740</td><td></td></tr><tr><td>手术刀</td><td>ROBOZ [VWR]</td><td>RS-9843</td><td></td></tr><tr><td>碳钢手术刀片 10 号</td><td>McKesson</td><td>862685</td><td></td></tr><tr><td>小型动物加热垫</td><td>K&amp;amp;H Pet Products [Amazon]</td><td></td><td>9 × 12 英寸 20 W</td></tr><tr><td>小型小鼠麻醉舱</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-893338</td><td></td></tr><tr><td>小型鼻罩</td><td>Patterson Veterinary</td><td>78909681</td><td></td></tr><tr><td>Steri-Drape</td><td>McKesson</td><td>5713</td><td></td></tr><tr><td>无菌纱布垫 2&amp;rdquo;×2&amp;rdquo; &amp;ndash; 12 层</td><td>Dukal Corporation [Amazon]</td><td>REF: 1212</td><td></td></tr><tr><td>无菌润滑眼膏</td><td>McKesson</td><td>730979</td><td></td></tr><tr><td>外科手套</td><td>McKesson</td><td>20-2070N</td><td></td></tr><tr><td>1 cc 注射器</td><td>McKesson</td><td>1065984</td><td></td></tr><tr><td>Traceable 数字碳纤维卡尺</td><td>Fischer Brand</td><td>15-077-957</td><td></td></tr><tr><td>修剪工具包</td><td>WAHL [Amazon]</td><td></td><td>BravMini</td></tr></tbody></table>

适用于小鼠口腔鳞状细胞癌临床前模型的转化相关性肿瘤切除模型

Translationally-Relevant Tumor Resection Model for Murine Preclinical Models of Oral Squamous Cell Carcinoma

目前，头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中最常见类型——口腔鳞状细胞癌（OSCC）的一线治疗方案是手术切除，随后根据风险调整治疗，例如化疗放疗联合治疗。&#160;然而，尽管现有标准治疗手段不断进步，甚至出现了检查点阻断等新型疗法，晚期和复发性疾病的总体生存率仍然较低，且预计未来几年头颈部癌症的发病率将持续上升。因此，除了开发新型治疗手段外，还需深入研究当前的标准治疗模式，以将具有潜力且前景良好的治疗方案转化为HNSCC患者的临床获益。临床前模型被用于评估潜在治疗干预措施的安全性和有效性。遗憾的是，现有的临床前&#160;模型未能充分模拟大多数患者接受的手术治疗过程，因为它们主要采用非手术治疗方式，如放疗、化疗或免疫治疗。此外，现有的手术模型受限于需要额外试剂以支持原位肿瘤的建立，以及肿瘤切除过程中对显微外科技术的要求。这促使人们亟需建立更优化且简化的临床前模型，以研究治疗手段，并深入了解局部区域肿瘤复发及治疗耐药机制。本文介绍了一种新型的同源性、临床相关的原位小鼠部分切除模型，该模型可重现OSCC的标准治疗流程。该模型简化了现有模型，并在颊黏膜肿瘤手术切除后可产生可测量的复发。使用此模型可能为OSCC患者肿瘤复发和治疗耐药机制提供有价值的见解。该临床前模型的建立为进一步研究OSCC对术后辅助治疗的反应奠定了基础，能够捕捉到患者通常开始后续治疗时具有临床相关性的肿瘤状态窗口期。

MOC2 小鼠颊黏膜的观察结果 
使用 MOC2 细胞系，在小鼠口腔颊黏膜处建立了肿瘤（图 2A-F）。当肿瘤大小达到 25–36 mm2 时，进行原发肿瘤的切除。切除术后，小鼠通常在 5–10 分钟内恢复完全活动能力。术后对小鼠进行监测，以确认伤口愈合与恢复情况，并观察肿瘤是否复发。在此期间，小鼠表现出搔抓缝线及切口周围轻微发红的现象。然而，在术后恢复期间，没有任何小鼠达到根据安乐死标准设定的体重减轻终点（即体重下降 20%）。尽管存在搔抓缝线的情况，但所有切口均保持闭合，所有小鼠外观健康，未见其他伤口或感染迹象。术后 7 天拆除缝线时发现，结扎过紧的缝线难以拆除，增加了拆线过程中对动物造成损伤的风险。切口部位观察到的轻微发红在恢复过程中逐渐消退，可能源于手术操作本身，因为未发现任何感染迹象。
MOC2 小鼠颊黏膜肿瘤的生长动力学及小鼠生存情况 
在肿瘤...

本文展示了一种针对口腔内建立的口腔鳞状细胞癌肿瘤进行外科切除的独特方法。

目前，头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）最常见类型——口腔鳞状细胞癌（OSCC）的一线治疗方案……

本研究聚焦于口腔癌，建立了一种用于原位肿瘤切除及复发的实用型临床前模型。手术是大多数口腔癌患者的主要治疗方式。本方案使我们能够对此进行深入探究。首先，取一个含有80%融合度的Mach Two口腔癌细胞的培养瓶。移除培养瓶中的培养基。用无镁和无钙的PBS洗涤贴壁细胞，以去除残留的血清。加入足够体积的溶液以完全覆盖含有细胞的容器表面，然后吸除。向培养瓶中加入0.05%胰蛋白酶，使其充分覆盖底部表面。将培养瓶置于37°C、5%二氧化碳条件下孵育约5分钟，以促进细胞脱落。当观察到细胞脱落时，加入至少两倍体积的完全培养基以终止胰酶消化。轻轻混匀以停止酶活性。将细胞悬液转移至离心管中，在室温下以350×g离心5分钟。离心后弃去上清液。用预冷的PBS重悬细胞沉淀。取少量悬液用于细胞计数。使用额外的 PBS 将细胞悬液调整至优化的接种浓度。制备好的细胞悬液在使用前需置于冰上保存。充分混匀细胞悬液以确保细胞分布均匀。将悬液收集到一支0.3毫升的胰岛素注射器中。用一只手抓住麻醉小鼠的后颈部，使小鼠腹侧朝向操作者，头部向上倾斜。保持小鼠口腔处于张开且易于接触的状态。将注射器小心地以向下的角度插入张开的口腔，朝向左侧下颌前庭。将针头穿过下颊黏膜。向目标区域注入30 µL细胞悬液。将注射器保持原位5秒钟，然后缓慢拔出，以防止细胞外漏。确保小鼠在接种后恢复至正常的生理和行为状态。随着肿瘤的形成，每周两次使用天平测量麻醉状态下小鼠的体重，并用数字游标卡尺评估肿瘤生长情况。选择一个干净的手术室，房间应有可关闭的门并限制人员进出。将一个装有清洁干燥垫料和部分纸巾巢的新笼子放置在电加热器上预热。将 bead sterilizer 加热至 250–265 摄氏度的工作温度。开启水浴加热的手术垫，并将其温度设置为约 39 摄氏度。使用棉签蘸取少量脱毛膏，涂抹于已麻醉小鼠的肿瘤切除部位。确保脱毛范围足够大，以避免毛发进入切口区域。10 秒后，使用干燥、洁净的纱布擦去毛发。用沾水的纱布或棉签去除残留的脱毛膏。将麻醉后的小鼠仰卧置于加热垫上，腹部朝上。将鼻部置于鼻锥内侧。现在向每只眼睛涂抹足量的无菌润滑软膏，以防止手术过程中眼睛干涩。使用干净的棉签，先用70%异丙醇擦拭切除部位，再用10%碘液擦拭，重复此步骤三次。最后一次操作后用70%异丙醇去除碘。佩戴无菌手套和适当的个人防护装备，准备一个至少18英寸宽、26英寸长的无菌区域。摆放所有必需的无菌器械和材料。用无菌手术巾覆盖小鼠。使用无菌剪刀在切除部位上方剪出一个操作孔。用一把新的手术刀沿左侧下颌线在肿瘤下方做一颌下切口。使用哈特曼止血钳，轻轻扩大朝向肿瘤的切口。必要时用无菌纱布轻拭血液。找到肿瘤，并用镊子固定其位置。在无菌防护装备的助手可在操作过程中固定小鼠或其皮肤。使用手术剪在肿瘤基部周围剪切，以切除所有可见组织。将皮肤重新覆盖于切除肿瘤的部位，然后使用4/0长效Vicryl缝线进行4-6针间断缝合，关闭切口。缝合切口后，将小鼠轻轻转移至预热的笼子中，并监测其意识和活动能力的恢复情况，直至完全苏醒。立即通过在笼内放置加水软化的饲料颗粒到易于取用的容器中，为小鼠提供软质食物。若无并发症发生，下次常规喂食时即可恢复小鼠的正常固体饮食。利用Mach Two细胞系，在小鼠口腔颊黏膜处建立肿瘤并进行切除。在切除前对肿瘤的生长动力学进行了表征。肿瘤切除后，术后初期观察到肿瘤生长延迟现象，表现为与未切除肿瘤相比，切除后短期内肿瘤面积减小。与未切除对照组相比，切除组小鼠的总体生存期略有延长，但该差异无统计学意义。未切除组小鼠在术后第12天首次达到安乐死标准，而切除组小鼠直至术后第19天才达到安乐死标准。使用本方案时最重要的考虑因素是肿瘤接种与移植的一致性。除了该手术步骤外，我们还可将切除的肿瘤组织用于流式细胞术或免疫组织化学分析。未来的研究可在本工作的基础上，结合其他治疗方法进一步开展。您也可以探究肿瘤免疫微环境与切除及复发之间的关系。

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Research

科研

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Cancer Research

癌症研究

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建立该模型可采用两种技术：将癌细胞悬液注射至盲肠壁，或将皮下肿瘤组织块移植到盲肠。该模型可用于研究结直肠癌的自然进展过程，以及评估针对结直肠癌的新型治疗药物。...

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本文全面概述了构建口腔癌小鼠模型的技术，以及通过多光子显微镜对标记细胞进行舌内肿瘤侵袭的定量监测方法。该系统可作为评估抗侵袭性化合物分子机制及药物疗效的有用平台。...

多光子成像技术在口腔鳞状细胞癌原位小鼠模型中对肿瘤细胞侵袭的观察

在本视频中，我们通过鳞状细胞癌细胞系的黏膜内接种，建立一种头颈部癌症的原位小鼠模型  。该荷瘤小鼠表现出与人类疾病临床相关症状相似的特征，因此可用于研究癌症进展并探索新的治疗策略。...

小鼠模型中癌细胞的黏膜内接种：建立头颈部原位癌小鼠模型的操作步骤

关键词：原位癌模型，头颈部癌，小鼠，黏膜内接种，癌细胞移植

来源：Alomari, S.，等．在啮齿类动物中实施微创脑肿瘤切除以实现高活性组织采集．J. Vis. Exp.

利用微创切除系统在小鼠中进行脑肿瘤切除

目前尚缺乏用于评估靶向乳腺癌转移的辅助治疗的临床前模型。为解决这一问题，我们建立了一种de...

De Novo 乳腺癌转移的临床前小鼠模型的外科手术操作与方法学

在免疫功能健全的小鼠中建立肾细胞癌原位模型，可为研究者提供一种具有临床相关性的实验体系，该体系在同一动物体内同时表现出原发性肾肿瘤和肺转移灶。该模型可用于多种治疗方法的临床前测试。 体内.

一种用于定量和纵向评估临床前疗法的同系小鼠转移性肾细胞癌模型

我们描述了通过将肿瘤细胞或类器官注射到小鼠盲肠中建立原位结直肠肿瘤模型，并从此模型中后续分离循环肿瘤细胞（CTCs）的方法。...

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我们介绍了一种利用生物发光技术量化肿瘤负荷的小鼠原位乳腺癌模型和根治性乳房切除术模型，以模拟人类乳腺癌的进展过程。...

建立小鼠原位转移性乳腺癌模型及实施小鼠根治性乳房切除术

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