小鼠肠系膜淋巴结切除术以选择性阻断特定区域肠道的淋巴通路

我们的研究重点是T细胞对新抗原和外周组织的应答，而这些应答在很大程度上受到启动过程的影响，因此我们主要关注这些启动事件发生的位置。目前，用于阻断淋巴结与组织之间迁移的唯一广泛应用的方法是系统性干预手段，例如S1P受体激动剂和整合素阻断。但这种广泛的抑制使我们无法研究特定局部淋巴结的贡献。

本方案详细描述了在四个主要肠系膜淋巴结区域进行高选择性淋巴结切除术的操作步骤。由于这些淋巴结对其引流的肠道节段具有高度特异性，因此这种耐受性良好的存活手术可实现对肠道淋巴轴特定节段的破坏，同时保留其余部分完整。通过夹捏后肢足部确认麻醉深度适当后，使用无菌手术剪在麻醉小鼠腹部正中做一长度为0.5至1厘米的皮肤切口。用无菌镊子将皮肤与腹壁分离，暴露并识别腹白线。

然后通过腹白线再做一个0.5至1厘米的切口，以进入腹膜腔。使用钝头灌胃针，向腹膜腔内注入1毫升体温的无菌生理盐水。润湿无菌敷料，为肠管定位做准备。

为了切除第一站淋巴结，将外置的肠管置于湿润的敷料上，使盲肠位于下方，近端结肠位于上方，回肠末端朝向术者。辨认沿结肠纵向走行的肠系膜淋巴结链。使用有角度的精细镊子，将闭合的镊子插入结肠系膜淋巴结链与回结肠血管之间，轻轻张开镊子，钝性分离第一站淋巴结与回结肠血管。

为降低邻近淋巴结发生副损伤血流的理论风险，可使用单丝尼龙缝线和尖头镊子，在第一淋巴结站近端1毫米和远端1毫米处，沿淋巴结链进行可选的缝扎结扎，采用间断单缝法。轻柔地向尾侧牵拉该淋巴结站，然后使用精细剪刀，从头侧向尾侧方向切除目标淋巴结站。观察回结肠血管、回肠血管和空肠血管的远端分支，以确认血供保持完整。

为了切除第二淋巴结站，轻柔地将小肠还纳，并将外置的肠管置于湿润的敷料上，使盲肠位于下方，近端结肠位于上方，小肠朝向术者的右侧。接着，辨认沿结肠纵向走行的第二淋巴结站，其起始于回肠与空肠血管的汇合处。使用有角度的精细镊子，钝性分离第二淋巴结站与结肠血管。

为降低邻近淋巴结发生侧支血流的理论风险，可使用单丝尼龙缝线和尖头镊子，在第二淋巴结站近端1毫米和远端1毫米处，沿淋巴结链进行可选的缝扎结扎，采用单个间断缝合。轻柔地向尾侧牵拉第二淋巴结站，然后使用精细剪刀，从头侧向尾侧方向切除该淋巴结站。检查手术区域，确保止血完全。

为了切除第四组淋巴结，轻柔地将整个小肠游离至后方固定点。将肠管置于湿润的敷料上，使盲肠朝下，近端结肠朝上，小肠朝向术者右侧。找到位于降结肠内侧、第三组淋巴结外侧的第四组淋巴结站。

使用斜角精细镊子或超细尖剪刀，钝性分离第四组淋巴结，使其远离肠系膜血管及周围脂肪组织。为降低邻近淋巴结之间潜在的侧支血流风险，可选择性地对每个可识别的淋巴结进行缝扎结扎，通常在距离淋巴结约1毫米处使用单股尼龙缝线和精细镊子进行间断缝合。然后轻柔地将第四组淋巴结向头侧牵拉。

使用精细或超细尖头剪刀，从尾侧向头侧方向切除淋巴结站。对第四淋巴结站中的第二个淋巴结重复此操作。仔细分离该淋巴结，必要时进行缝线结扎，并将其切除。

检查手术区域以确认止血完全。将腹腔内容物还纳至腹膜腔后，向腹腔内注入1毫升体温的无菌生理盐水，以补偿蒸发导致的液体丢失。分两层关闭腹腔：首先缝合腹壁，然后使用6-0单丝聚丙烯缝线连续缝合皮肤。

通过肠系膜淋巴结切除术提取的组织样本 consistently 表现出较低的脂肪含量，这可通过在 PBS 中迅速下沉得到证实。流式细胞术分析证实了肠系膜淋巴结的成功提取，来源于肠系膜淋巴结切除术的样本中超过 95% 的细胞被鉴定为 CD45 阳性，而内脏脂肪组织对照组中仅有 7% 的细胞为 CD45 阳性。