Name: 开发来自输卵管上皮细胞的小鼠来源类器官系，用于高级别浆液性卵巢癌建模 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: 学习利用小鼠输卵管上皮细胞建立高级别浆液性卵巢癌类器官模型。该方法通过基因修饰和同源移植，为研究肿瘤发生机制及免疫相互作用提供了重要的实验工具。

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本研究由美国国立卫生研究院资助，资助编号为 R01(CA257507)。图示示意图使用 BioRender 软件绘制。我们感谢 Benjamin Neel 博士在本项目全过程中的支持，感谢 Shuang Zhang 博士开发了原始实验方案，以及 Kiyomi Araki 博士在方案优化过程中提供的帮助。

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<li>Xie, Y., Park, E. -S., Xiang, D., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+organoid+culture+reveals+enrichment+of+organoid-forming+epithelial+cells+in+the+fimbrial+portion+of+mouse+fallopian+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Long-term organoid culture reveals enrichment of organoid-forming epithelial cells in the fimbrial portion of mouse fallopian tube.</a> Stem Cell Res. 32, 51-60 (2018).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2, 94(2022).</li>
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<li>Homology-directed repair using the Alt-R CRISPR-Cas9 System and HDR Donor Oligos. , Integrated DNA Technologies (IDT). 
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<li>Santoro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multiple+facets+of+ovarian+high+grade+serous+carcinoma%3A+A+review+on+morphological%2C+immunohistochemical+and+molecular+features%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oncol+Hematol%22%5BJournal%5D)">The multiple facets of ovarian high grade serous carcinoma: A review on morphological, immunohistochemical and molecular features.</a> Crit Rev Oncol Hematol. 208, 104603(2025).</li>
<li>Lisio, M. -A., Fu, L., Goyeneche, A., Gao, Z., Telleria, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-grade+serous+ovarian+cancer%3A+Basic+sciences%2C+clinical+and+therapeutic+standpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-grade serous ovarian cancer: Basic sciences, clinical and therapeutic standpoints.</a> Int J Mol Sci. 20 (4), 952(2019).</li>
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<li>Claassen, D. A., Desler, M. M., Rizzino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROCK+inhibition+enhances+the+recovery+and+growth+of+cryopreserved+human+embryonic+stem+cells+and+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">ROCK inhibition enhances the recovery and growth of cryopreserved human embryonic stem cells and human induced pluripotent stem cells.</a> Mol Reprod Dev. 76 (8), 722-732 (2009).</li>
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</ol>

作者声明无利益冲突。

尽管肿瘤学研究取得了显著进展，高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）仍然是最侵袭性的妇科恶性肿瘤，也是所有卵巢癌中致死率最高的类型23,24随着妇科肿瘤学研究的发展，其所使用的模型也应不断进步。事实上，许多历史上沿用的卵巢癌模型细胞系已被发现存在多种缺陷，不适合用于该疾病的研究，原因包括基因组相关性不足、细胞来源差异，以及在模拟疾病特征方面的局限性 体内 条件2在这方面，类器官能更准确地模拟组织发育过程 体外 系统以及细胞-基质相互作用，已显示出优于传统的二维细胞培养技术14,15,25. 通过扩展该系统，使用同源小鼠细胞系可将此类模型重新引入具有完整免疫系统的小鼠体内，从而实现衔接 体外 和 体内 本方案重点在于建立野生型...

高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）仍是一种认知不足且致死率极高的疾病。长期以来，缺乏能够真实反映HGSOC生物学特性及治疗反应的体外（in vitro）和体内（in vivo）模型，严重阻碍了该领域的进展。例如，多项（甚至可能是大多数）研究使用的细胞系并不具备HGSOC的关键基因组/遗传特征，导致其研究结果的相关性受到质疑1,2,3,4。以常用的ID8同源小鼠模型为例，该模型来源于卵巢表面上皮（OSE），且Trp53为野生型5。相比之下，大多数甚至全部HGSOC起源于输卵管上皮（FTE）6，且HGSOC几乎普遍存在TP53突变或失活7。研究人员随后尝试通过在该模型中引入Trp53突变加以修正5，但由于Trp53突变是HGSOC发病过程中的早期事件，这一改造可能在该细胞系的转化过程中介入过晚，因此很可能无法真实模拟HGSOC的正常发生发展过程。
在过去十年中，研究人员尝试通过构建更接近真实的高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）模型来改善这一状况。例如，通过基因工程小鼠模型（GEMMs），在缪勒管谱系细胞中引入相关突变，通常借助 Cre 重组酶系统来调控发病过程，从而在 in vivo8,9,10 条件下更好地模拟疾病。然而，这些模型通常构建复杂，且可能存在 Cre 泄漏、Cre 效应或&#34;旁效应&#34;11,12,13 等其他问题。在此背景下，同源性类器官模型似乎为希望在 in vitro 和 in vivo 条件下更准确模拟该疾病的科研人员提供了一种稳健的折中方案14,15,16,17,18,19。事实上，目前大多数可用且被广泛使用的 HGSOC 模型均为二维模型，但它们无法充分模拟细胞外基质（ECM）的复杂性，而 ECM 是影响细胞生物学行为的关键因素。类器官是由干细胞来源的自组织三维组织，能够在培养皿中重现器官早期的结构与功能复杂性20。其构建通常通过将具有多能性的单个细胞悬浮于基底膜基质（BMM）（如 Matrigel21）中实现。In vitro 条件下，这些模型相较于二维模型能更准确地再现 in vivo 环境。同时，由于其同源性特征，这些模型可被移植至具有完整免疫系统的小鼠体内，从而更真实地重建疾病的发生与发展过程14,15。这一优势明显优于患者来源的异种移植模型（PDX），后者虽然具有最接近真实的肿瘤遗传背景，但必须移植到免疫缺陷小鼠模型中才能实现移植。
在本实验方案中，我们描述了如何建立同基因型高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）类器官模型。该流程包括从小鼠输卵管上皮（FTE）组织中分离并建立原始野生型类器官培养体系，通过基因工程手段构建具有疾病相关基因型的类器官，最终将其移植回卵巢囊腔以生成完全发育的肿瘤。我们还补充了几项常用实验的附加方案，例如免疫荧光（IF）染色 体外 类器官及细胞系的二维转化，用于大规模细胞生产，例如用于注射。本方案面向希望构建具有可控遗传背景的HGSOC同基因型类器官模型的研究人员，旨在更真实地研究HGSOC生物学特性 体外 肿瘤微环境中的条件及其相互作用 体内.

<table><tbody><tr><td>不含钙、镁和碳酸氢钠的HBSS中的0.25%胰蛋白酶和0.1% EDTA</td><td>Corning</td><td>25053CI</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Tocris Bioscience</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>12-634-028</td><td></td></tr><tr><td>老龄C57BL/6J（雌性）</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>AllPrep DNA/RNA Mini Kit</td><td>QIAGEN</td><td>80204</td><td>用于DNA/RNA提取</td></tr><tr><td>Alt-R S.p. Cas9-GFP V3</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>10008100</td><td></td></tr><tr><td>抗Ki67抗体</td><td>Abcam</td><td>ab15580</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip系统</td><td>Fine Science Tools</td><td>12020-00</td><td>用于IBI术后伤口闭合</td></tr><tr><td>B-27补充剂（50倍浓度），无血清</td><td>Gibco</td><td>17-504-001</td><td></td></tr><tr><td>盐酸杀稻瘟菌素（10 mg/mL）50 mg</td><td>InvivoGen</td><td>ant-bl-05</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RLT Plus</td><td>QIAGEN</td><td>1053393</td><td>用于DNA/RNA提取前裂解细胞</td></tr><tr><td>细胞回收溶液</td><td>Corning</td><td>354253</td><td></td></tr><tr><td>胶原酶/透明质酸酶</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07912</td><td></td></tr><tr><td>CoraLite 594-鬼笔环肽（红色）</td><td>Proteintech</td><td>PF00003</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片 15CIR-1</td><td>Fisherbrand</td><td>12-545-83</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片 24 mm &amp;acute; 40 mm-1</td><td>Fisherbrand</td><td>12-544-12</td><td></td></tr><tr><td>CTS（细胞治疗系统）N-2补充剂</td><td>Gibco</td><td>A1370701</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Roche</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>来自牛胰腺的脱氧核糖核酸酶I（DNAse I）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>Difco脱脂奶粉</td><td>Becton Dickinson</td><td>232100</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07913</td><td></td></tr><tr><td>含L-谷氨酰胺、4.5 g/L葡萄糖和丙酮酸钠的DMEM</td><td>Corning</td><td>10013CV</td><td></td></tr><tr><td>重组DNase I，无RNase</td><td>Roche</td><td>04716728001</td><td></td></tr><tr><td>杜氏磷酸盐缓冲液</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 - 陶瓷涂层镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-50</td><td>用于输卵管解剖</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Corning</td><td>35-010-CV</td><td>在56 &amp;deg;C下热灭活60分钟</td></tr><tr><td>精细剪刀 - ToughCut</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td>用于输卵管采集和IBI切口</td></tr><tr><td>遗传霉素选择性抗生素（G418硫酸盐）（50 mg/mL）</td><td>Gibco</td><td>10131027</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX补充剂（100倍浓度）</td><td>Gibco</td><td>35-050-061</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗兔IgG（H+L）交叉吸附二抗，Cyanine3</td><td>Invitrogen</td><td>A10520</td><td></td></tr><tr><td>Graefe镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>用于组织操作</td></tr><tr><td>HEPES缓冲液</td><td>Corning</td><td>25060CI</td><td></td></tr><tr><td>人R-Spondin 1重组蛋白</td><td>PeproTech</td><td>120-38</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素注射器，U-100 0.5 mL 0.36 mm（28 G）x 12.7 mm（1/2&quot;）</td><td>BD</td><td>BD329461</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS -G）（100倍浓度）</td><td>Gibco</td><td>41-400-045</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺 200 mM（100倍浓度）</td><td>Gibco</td><td>25-030-081</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel GFR基底膜基质</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>BMM</td></tr><tr><td>小鼠EGF重组蛋白</td><td>PeproTech</td><td>315-09</td><td></td></tr><tr><td>小鼠FGF-basic重组蛋白</td><td>PeproTech</td><td>450-33</td><td></td></tr><tr><td>小鼠Noggin重组蛋白</td><td>PeproTech</td><td>250-38</td><td></td></tr><tr><td>小鼠Wnt-3a重组蛋白</td><td>PeproTech</td><td>315-20</td><td></td></tr><tr><td>N2补充剂</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-乙酰半胱氨酸酰胺</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A0737</td><td></td></tr><tr><td>Neon NxT电穿孔系统</td><td>Invitrogen</td><td>NEON1S</td><td>用于CRISPR-Cas9电穿孔</td></tr><tr><td>Neon NxT电穿孔系统10-&amp;mu;L试剂盒（含单通道电转管）</td><td>Invitrogen</td><td>N1025</td><td>电穿孔耗材，包括基因组编辑缓冲液</td></tr><tr><td>烟酰胺</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N3376</td><td></td></tr><tr><td>正常小鼠血清</td><td>Invitrogen</td><td>10410</td><td></td></tr><tr><td>正常大鼠血清</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>13551</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I减血清培养基</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>PAX8多克隆抗体</td><td>Proteintech</td><td>10336-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素（10,000 U/mL）</td><td>Gibco</td><td>15-140-122</td><td></td></tr><tr><td>嘌呤霉素</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Selectfrost 25 mm &amp;acute; 75 mm &amp;acute; 1.0 mm</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-003</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP151</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express酶（1倍浓度），无酚红</td><td>Gibco</td><td>12-604-013</td><td></td></tr><tr><td>Vannas弹簧剪刀 - 4 mm切割刃</td><td>Fine Science Tools</td><td>15019-10</td><td>用于输卵管解剖</td></tr><tr><td>Y27632</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72304</td><td>Rho激酶（ROCK）抑制剂&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

由小鼠输卵管上皮细胞建立类器官系用于高级别浆液性卵巢癌建模

Development of Mouse-Derived Organoid Lines from Fallopian Tube Epithelial Cells for High Grade Serous Ovarian Carcinoma Modeling

在真实环境中有效模拟疾病对于增进我们对多种病理机制的理解至关重要。在这方面，类器官相较于传统的二维模型能够提供更为逼真的环境 体外同样，同源小鼠模型还允许研究人员研究更完整的肿瘤-宿主相互作用，例如与免疫系统之间的相互作用， 体内在此，我们提供了一项完整的实验方案，用于从小鼠体内分离输卵管上皮细胞——高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）的起源细胞，并将其建立为原代类器官培养物，以及其后续的 体外 培养与维持。随后，我们描述如何利用遗传工程技术，例如慢病毒或逆转录病毒介导的基因过表达，以及CRISPR-Cas9基因敲除，对这些细胞系进行修饰，将其转化为癌前类肿瘤体。我们还报道了如何利用它们进行 体外 验证，通过提取遗传物质和免疫荧光染色进行。最后，我们说明如何将这些肿瘤类器官有效注射至高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）的原位——卵巢囊，以启动肿瘤形成。

生成和验证高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）的工作流程示意图见图1。该过程始于从雌性C57BL/6J野生型小鼠中提取输卵管组织（图2A）。建议起始时取用较大块的组织，以确保充分采集。使用解剖显微镜可精确分离远端输卵管，同时去除周围组织（如脂肪和卵巢）。如图2B所示，卵巢最初被脂肪覆盖，但在清创后，其黄色外观和椭圆形状变得更加清晰。随后小心地解开并修剪输卵管，以分离远端部分，并为后续消化做准备（图2B）。
从小鼠输卵管上皮组织（FTE）制备得到单细胞悬液后，应立即将其接种于BMM培养基中，以促进类器官的形成。我们建议将来自同一只小鼠的两条输卵管中提取的细胞接种至同一个类器官凝胶滴中，以最大化获得的克隆数量。根据操作者的熟练程度，可获得从数个到数百个不等的类器官。细胞收获量过低可能导致培养启动失败，其原因可能包括组织解离速度、修剪精度、剪切程度以及消化...

该方案详细描述了高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）小鼠模型的建立方法 体外 和 体内从小鼠输卵管类器官的建立，到通过基因改造模拟人类高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）的遗传特征，再到将其移植至同系小鼠卵巢囊腔中 体内 肿瘤的形成

在真实环境中有效建立疾病模型对于增进我们对多种病理机制的理解至关重要。在这方面，类器官提供了一种……

是的，我们目前正在致力于开发高级别浆液性卵巢癌的新型模型，这些模型在所述方案的意义上是同源的。我们从健康小鼠中获取健康的输卵管，然后在培养皿中将其培养成类器官，再引入在人类该疾病典型病例中通常会发现的各种遗传错误或基因修饰。这一点非常有意义，因为一方面，你可以在培养皿中以类器官的形式研究这些肿瘤的各种内在因素，而类器官比传统的二维培养更接近真实情况。但关键在于，由于存在同源性模型，我们可以将这些类器官重新移植回小鼠体内，观察肿瘤的实际发育过程及其与宿主的相互作用。这使我们能够更全面地了解肿瘤及其发生过程的真实情况，我们希望这将为我们提供更有效的工具，更深入地理解该疾病的发病机制，并更好地应对它。首先，获取已实施安乐死的雌性C57黑6J小鼠。取出卵巢和输卵管，转移至含有青霉素-链霉素的无菌培养皿中，其中培养基为DMEM，并置于4摄氏度环境中。使用解剖显微镜、精细镊子和剪刀去除卵巢上的残留脂肪组织。从卵巢和子宫上分离出输卵管，包括漏斗部及远端壶腹部的一部分。现在将清洗后的组织转移至含有完全消化液的离心管中。用精细剪刀将输卵管剪成小于0.5毫米的小块。然后在37°C条件下孵育40至50分钟，再进行类器官培养。为建立小鼠肿瘤模型，准备五次注射，每次注射包含四百万个细胞，这些细胞重悬于未添加补充物的Opti-MEM I和冰冻的基底膜基质中。在配制注射液时，首先使用冷的PBS排出装有28号针头的U-100胰岛素注射器死腔中的气泡，然后缓慢将40微升细胞悬液吸入注射器，并将装有细胞悬液的注射器置于冰上，直至小鼠麻醉完成。准备注射时，将注射器置于加热灯旁，使基底膜基质升温并增加黏度，以利于注射和移植。接着，将小鼠放入预热的笼子中，并置于加热灯下，以准备手术。在麻醉小鼠大腿上方的侧腹部做一小于1厘米的切口。切开表皮和皮下组织，到达囊区域。通过定位附着的脂肪垫，轻柔地拉出卵巢。然后使用已准备好的注射器，将细胞通过脂肪垫和卵巢注入输卵管囊内。小心地将卵巢放回卵巢囊内。使用无编织缝线缝合肌肉层。随后，使用外科缝钉闭合皮肤切口。将小鼠放回预热的笼子中，并使用加热灯维持体温，直至其恢复半清醒状态，通常需要超过15分钟。来源于小鼠输卵管上皮的类器官在培养约5天后呈现界限清晰的球形结构，并在第10至12天左右需要进行传代。通过慢病毒或逆转录病毒介导的基因过表达等基因工程技术，可将野生型类器官转化为癌前类肿瘤结构。源自基因修饰类器官的单克隆细胞系可通过注射至卵巢囊中进一步进行体内研究。肿瘤通常在注射后约60天达到两到三厘米的大小。那么，正如我之前所指出的，我们所说的真正最大的优势，也就是该实验方案的运作方式，当然就是能够构建这些同源性模型，对吧？因此，正如我之前所说，由于这些小鼠是同源性的，你能够充分观察到完整动物个体——也就是完整的小鼠——与其所形成的肿瘤之间的全部相互作用，同时还能对肿瘤的遗传背景实现完全的控制。当然，与其他模型相比，例如试图在培养皿中理解免疫系统的情况，显然在培养皿中模拟整个免疫系统将非常困难。或者以PDX模型为例，即将患者来源的肿瘤样本移植到小鼠体内，为了使这种移植能够成功，小鼠必须缺乏免疫系统，否则就会排斥这些肿瘤，对吧？但由于该模型是同源性的，因此能够充分观察整个宿主与肿瘤之间的相互作用，尤其是与免疫系统之间的相互作用，而目前这正是该领域最热门的研究方向之一。因此，我认为与目前其他可获取的实验方案相比，该方案最重要的优势就在于此。事实上，我们已经利用这些模型开展了一些非常有趣现象的研究。目前我最特别感兴趣的是，根据我们的观察，适应性免疫系统似乎在塑造高级别浆液性卵巢癌的基因组特性（尤其是拷贝数变异）方面起着重要作用。具体而言，如果缺乏免疫系统，这些肿瘤似乎就不会产生如此大规模且复杂的DNA重排。因此，我们正试图弄清楚这一现象的发生机制，并希望最终能够逆转这一过程，从而增强针对此类肿瘤的免疫治疗效果。

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Research

科研

JoVE Journal

Cancer Research

癌症研究

开发来自输卵管上皮细胞的小鼠来源类器官系，用于高级别浆液性卵巢癌建模

为了研究 体内 肿瘤生长与肿瘤微环境，我们采用免疫功能健全动物中的同源性、原位卵巢癌小鼠模型。我们将小鼠肿瘤细胞系（MOV1）转导表达Katushka荧光蛋白（MOV1）KAT）在此我们展示其在卵巢中的原位移植 体内 成像...

用于免疫健全小鼠的浆液性卵巢癌原位模型 体内 肿瘤成像与肿瘤免疫应答的监测

介绍了一种小鼠输卵管显微解剖方法，该方法可在保持RNA完整性的前提下分离并收集输卵管的各个节段。此外，还描述了一种非酶法的输卵管细胞解离步骤。这些方法适用于对功能不同的输卵管节段以及解离后的输卵管细胞进行后续的基因和蛋白质分析。...

小鼠输卵管的显微解剖与分离：各节段识别及单细胞获取

本方案描述了建立小鼠子宫内膜上皮类器官以进行基因表达和组织学分析的方法。...

从小鼠子宫建立三维子宫内膜类器官

本方案介绍了一种通过差速离心法从原代正常及肿瘤乳腺组织中生成上皮类器官的方法。此外，还包括对包埋类器官进行三维培养以及免疫荧光成像的操作说明。...

无需传代培养的小鼠与人正常及肿瘤乳腺组织上皮类器官的生成与成像

患者来源的类器官（PDO）是一种三维（3D）培养体系，可在体外模拟肿瘤微环境。in vitro。在高级别浆液性卵巢癌中，PDO...

高级别浆液性卵巢癌患者来源类器官的建立与培养

本方案描述了显微注射及 体内...

利用体细胞基因组编辑小鼠模型 体内 显微注射与电穿孔

本方案为从不同疾病阶段建立卵巢癌类器官提供了一个系统性框架，并针对患者个体差异带来的挑战，提高了类器官的得率，实现了稳定且长期的扩增，以满足后续应用需求。方案涵盖了组织处理、接种、培养基条件优化以及免疫荧光染色等详细操作步骤。...

卵巢癌类器官生物样本库构建策略：应对不同组织学亚型及疾病阶段间的患者间异质性

本方案描述了从原代人卵巢表面上皮（hOSE）细胞建立三维（3D）组织类器官的方法。该方案包括从新鲜采集的卵巢组织中分离hOSE细胞、hOSE细胞的扩增培养、冻存与复苏操作，以及类器官的衍生过程。同时包含免疫荧光染色、定量分析，以及作为筛选平台的应用展示。...

人卵巢表面上皮类器官作为研究组织再生的平台

本方案描述了一种从人类输卵管上皮组织中分离上皮细胞的一日法。分离得到的上皮细胞可用于二维（2D）培养，或解离为单细胞悬液，进而应用于后续实验，包括流式细胞术和单细胞RNA测序。...

一种高效提取人输卵管上皮细胞用于单细胞分析的方法

我们描述了从小鼠卵巢的基质富集部分分离小鼠卵巢体细胞的方法，以及采用无支架方法生成小鼠卵巢体细胞类器官的技术。...

探究卵巢微环境：小鼠卵巢体细胞的分离、二维培养及类器官培养方法

学习利用小鼠输卵管上皮细胞建立高级别浆液性卵巢癌类器官模型。该方法通过基因修饰和同源移植，为研究肿瘤发生机制及免疫相互作用提供了重要的实验工具。

由小鼠输卵管上皮细胞建立类器官系用于高级别浆液性卵巢癌建模

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