Name: OnePot PURE 和粗核糖体生产的精细化，用于可重复的无细胞蛋白质合成 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-22T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: 了解OnePOT PURE系统优化方案，通过控制菌株生长、接种量和甘油浓度，提高无细胞蛋白质合成的重复性和产量。该方法采用超速离心制备粗核糖体，降低技术门槛，使更多实验室能够建立稳定的合成生物学研究平台。

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NL、SL、AB 和 NZ 受 NL 的英国研究与创新署未来领袖奖学金（UKRI Future Leaders Fellowship，项目编号 MR/V027107/1）资助。SL 还额外获得 Biophoundry 公司的支持。SY 获得爱丁堡大学达尔文信托博士生奖学金的资助。CW 获得英国生物技术和生物科学研究生理事会（BBSRC Eastbio）博士生奖学金的资助。作者感谢 A. Pompa 在使用超速离心机方面提供的帮助，该设备由惠康基金会隐藏细胞生物学发现研究平台 [226791] 提供资金支持。此外，我们感谢 B. Lavickova 和 S. J. Maerkl 在建立原始 OnePot 方案过程中提供的协助。为了实现开放获取，作者已对本提交所产生的任何作者接受手稿版本应用了知识共享署名（Creative Commons Attribution，CC BY）许可。图 1 部分使用 BioRender 绘制。Laohakunakorn, N. (2025) [https://BioRender.com/wj65i81]。

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<li>Romantseva, E., Alperovich, N., Ross, D., Lund, S. P., Strychalski, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+DNA+template+preparation+on+variability+in+cell-free+protein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of DNA template preparation on variability in cell-free protein production.</a> Synth Biol. 7 (1), 1-17 (2022).</li>
<li>Thornton, E. L., Boyle, J. T., Laohakunakorn, N., Regan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+protein+synthesis+as+a+method+to+rapidly+screen+machine+learning-generated+protease+variants%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell-free protein synthesis as a method to rapidly screen machine learning-generated protease variants.</a> ACS Synth Biol. 14 (5), 1710-1718 (2025).</li>
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<li>Blaha, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+functional+ribosomal+complexes+and+effect+of+buffer+conditions+on+tRNA+positions+observed+by+cryoelectron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Preparation of functional ribosomal complexes and effect of buffer conditions on tRNA positions observed by cryoelectron microscopy.</a> Methods Enzymol. 317, 292-309 (2000).</li>
</ol>

SL 是 Biophoundry 公司的联合创始人兼首席技术官，该公司致力于开发用于噬菌体工程的无细胞技术。

我们介绍了一种详细的实验流程，该流程使我们能够在同一实验室中，由不同批次和不同操作人员获得可重复的PURE系统。要实现这一目标，需要完成若干关键步骤。
第一个重要步骤是确保36种PURE菌株的完整性：除了对所有质粒进行测序外，还必须进行表达试验，以验证所有菌株均能正确过表达，因为丢失其中任意一种菌株都可能导致无细胞蛋白合成（CFPS）活性完全丧失。我们已观察到因突变导致表达丢失的情况，也发现过一种菌种库存中存在多种菌株的污染现象。如果需要构建敲除型ΔPURE系统，则必须排除第二种情况。在今后的研究中，将PURE系统优化为更稳定的质粒和菌株（如Zhang等人10所提出）将具有显著优势：他们的方法可与我们现有的实验方案无缝结合。
我们发现，甘油菌种的标准化以及在特定光密度下收获菌株，可确保所有细胞均处于相同的生长阶段。最初我们发现，直接刮取冻存甘油菌种启动的培养物所制备的PURE体系结果不可重复，原因是不同批次间蛋白质表达存在差异；因此，本方案避免直接使用从甘油菌种刮取获得的起始培养...

无细胞蛋白质合成（CFPS）技术已发展成熟，广泛应用于生物制造、生物传感与诊断、基因与代谢元件及通路的原型构建、快速蛋白质工程以及教育等领域1,2。采用纯化组分构建的CFPS系统，最初被称为“利用重组元件进行蛋白质合成”（PURE）系统3，相较于基于细胞裂解物的系统具有多项优势。PURE系统具有明确的组分构成，包含36种蛋白质因子、70S E. coli 核糖体，以及包括核苷三磷酸（NTPs）、氨基酸和tRNAs在内的化学底物混合物，这些组分可根据具体应用需求任意调整。因此，该系统非常适用于非天然氨基酸的掺入、机制建模以及生物分子系统和合成细胞的自下而上构建等研究1。尽管PURE系统可从商业供应商处获得，但其成本较高（每1 µL反应约0.34–1.63美元），限制了大规模实验的应用；而自行制备PURE系统的替代策略迄今仍受限于繁琐的实验流程，需平行纯化36种蛋白质和核糖体4，该过程操作复杂，难以稳定且可重复地完成，尤其对缺乏经验的操作者而言更具挑战性。
近期进展推动了PURE系统的自制生产。例如，Wang等人对大肠杆菌（E. coli）菌株进行了基因工程改造，使其翻译机制上带有基因组整合的六组氨酸标签，从而实现单步纯化5。编码所有PURE蛋白的基因已被组装到少数质粒中，同样有助于减少纯化工作量6。Villareal等人则设计了精巧的PURE菌株共培养体系，通过平衡各组分的表达水平，以获得正确比例的蛋白质，同时实现单步纯化7。
Lavickova 等人开发的创新性 OnePot PURE 系统在使用便捷性方面具有巨大潜力8,9。在该系统中，原始的 PURE 菌株被共培养，并通过单一层析步骤进行纯化。尽管无法精确定义所得 PURE 系统的组成，但作者证明了该系统的多个批次具有高度可重复性，并且通过调整每种菌株的接种体积可实现粗略水平的控制。以精确组分控制为代价换取生产便利性的权衡，对于许多用户而言是可接受的，因为 OnePot 系统的整体蛋白质合成产量与商业产品相当。然而，尽管已有详细的 OnePot 系统操作方案，其他实验室在完全重现 Lavickova 等人的结果方面仍面临挑战。例如，已观察到表达载体不稳定、菌株生长缓慢以及蛋白质降解等问题10。
在本研究中，我们介绍了一种详细且经过优化的OnePot PURE方案，该方案通过使用标准化的甘油菌种和培养基调整来控制细胞生长，提供了监测生长及收获时OD值的指导，并对最终纯化步骤中甘油的用量进行了标准化。其次，我们介绍了一种仅采用差速超速离心法优化的粗制核糖体纯化流程，该方法在核糖体活性与更复杂方法所需的成本及操作难度之间实现了平衡。
尽管这使得OnePot方案的步骤有所增加，但如果需要，用户可以更充分地对实验过程进行故障排查，并根据自身需求对其进行修改。我们通过在同一实验室中由多名操作人员完成的多次生物学重复实验，证明了该流程的可重复性。我们发现，对PURE组分和核糖体制备过程的控制对于确保该系统在无细胞蛋白表达（CFPS）中具有高效性能至关重要。
PURE 体系的制备和核糖体的制备分别需要 4 至 5 天，可由一名操作者依次完成，也可由两名操作者同时进行。PURE 体系的制备涉及 4 份 500 mL 液体培养物，每份可获得约 2 g 细胞沉淀，最终得到约 1 mL 浓度约为 15 mg/mL 的 PURE 蛋白。核糖体的制备涉及 4 × 500 mL = 2 L 液体培养物，总共可获得约 3 g 细胞沉淀，最终得到约 1 mL 浓度约为 17 µM 的粗制核糖体。本方案所制备的 PURE 体系在 2 小时的批次反应中，GFP 的合成产量可达约 100 µg/mL，mCherry 可达约 130 µg/mL11，该结果与原始的 OnePot 系统以及商业系统（约 140–160 µg/mL）相比具有良好的竞争力8,12。因此，该体系可作为进一步优化的良好起点，例如通过补充或调节盐离子、分子拥挤剂以及个别蛋白因子等敏感组分来提升性能。

<table><tbody><tr><td>2x YT</td><td>Sigma</td><td>Y2377-250G</td><td></td></tr><tr><td>氨基酸</td><td>Sigma</td><td>LAA21-1KT</td><td></td></tr><tr><td>无RNA酶乙酸铵</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM9070G</td><td></td></tr><tr><td>氯化铵</td><td>Sigma</td><td>09718-1KG</td><td></td></tr><tr><td>氨苄青霉素</td><td>Sigma</td><td>A8351-5G</td><td></td></tr><tr><td>BL21(DE3) 感受态大肠杆菌</td><td>NEB</td><td>C2527H</td><td></td></tr><tr><td>离心瓶（Nalgene）</td><td>Thermo Scientific</td><td>3120-9500</td><td>聚丙烯共聚物瓶</td></tr><tr><td>玻璃瓶（Duran）250 mL、500 mL、1 L、2 L</td><td>VWR</td><td>215-1593, 215-1594, 215-1595, 215-1596</td><td></td></tr><tr><td>Bradford 法快速起始 1x 染色试剂</td><td>Bio-Rad</td><td>5000205</td><td></td></tr><tr><td>离心机</td><td>Thermo Scientific</td><td>Heraeus Megafuge 16R</td><td></td></tr><tr><td>微量离心机</td><td>Eppendorf</td><td>5424R&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>层析柱</td><td>Bio-Rad</td><td>7321010</td><td></td></tr><tr><td>磷酸肌酸</td><td>Sigma</td><td>27920</td><td></td></tr><tr><td>半微量比色皿 1.6 mL</td><td>Fisherbrand</td><td>FB55147</td><td></td></tr><tr><td>二水合磷酸氢二钠</td><td>Fisher Chemical</td><td>S/4450/60</td><td></td></tr><tr><td>透析盒，Slide-A-Lyzer G3，2 kDa 截留分子量，15 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>A52962</td><td></td></tr><tr><td>无水磷酸氢二钾</td><td>Fisher Chemical</td><td>P/5240/60</td><td></td></tr><tr><td>DTT 无称量试剂</td><td>Thermo Scientific</td><td>A39255</td><td></td></tr><tr><td>离心过滤单元，3 kDa 截留分子量 Amicon Ultra 15</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC900324</td><td></td></tr><tr><td>500 mL 锥形瓶</td><td>VWR</td><td>214-1133</td><td></td></tr><tr><td>带挡板 2.5 L 锥形瓶&amp;nbsp;</td><td>Tunair</td><td>SS-5013</td><td></td></tr><tr><td>亚叶酸</td><td>Sigma</td><td>F7878-100MG</td><td></td></tr><tr><td>甘油</td><td>Sigma</td><td>G5516-1L</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Fisherbrand</td><td>H/1200/PB17</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 缓冲液，1 M 溶液，pH 7.3</td><td>Thermo Scientific</td><td>BP299</td><td></td></tr><tr><td>咪唑</td><td>Sigma</td><td>I2399-500G</td><td></td></tr><tr><td>培养箱</td><td>Eppendorf</td><td>New Brunswick Innova&amp;reg; 42</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0392</td><td></td></tr><tr><td>KOH 颗粒</td><td>Thermo Scientific</td><td>P1767-500G</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酸半镁盐四水合物</td><td>Sigma</td><td>49605-250G</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酸单钾盐一水合物</td><td>Sigma</td><td>49601-500G</td><td></td></tr><tr><td>四水合乙酸镁</td><td>Sigma</td><td>M5661-50G</td><td></td></tr><tr><td>氯化镁</td><td>Fluka</td><td>63020-1L</td><td></td></tr><tr><td>磁力搅拌装置</td><td>Stuart</td><td>US152</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>Nanodrop 2000</td><td></td></tr><tr><td>NEBExpress Ni-NTA 磁珠</td><td>NEB</td><td>S1423S</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm 封口膜</td><td>Sigma</td><td>P7543-1EA</td><td></td></tr><tr><td>多通道移液器 Eppendorf Research Plus 30–300 &amp;micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>酶标仪用板粘性密封膜</td><td>ExcelScientific</td><td>STR-SEAL-PLT (无菌)</td><td></td></tr><tr><td>透气性板密封膜</td><td>Starlab</td><td>E2796-3005</td><td></td></tr><tr><td>铝箔板密封膜</td><td>ExcelScientific</td><td>FCS-25</td><td></td></tr><tr><td>酶标仪</td><td>BioTek</td><td>Synergy H1</td><td></td></tr><tr><td>板式振荡器</td><td>Allsheng</td><td>MBI100-4A</td><td></td></tr><tr><td>384 孔板</td><td>Thermo Scientific</td><td>242764</td><td></td></tr><tr><td>96 孔深孔板 1 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>736-0601</td><td></td></tr><tr><td>96 孔深孔板 2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>82.1972.002</td><td></td></tr><tr><td>96 孔 PCR 板</td><td>Sarstedt</td><td>721,978</td><td></td></tr><tr><td>光学 96 孔板</td><td>Thermo Scientific</td><td>10057581</td><td></td></tr><tr><td>氯化钾</td><td>Sigma</td><td>P5405-500G</td><td></td></tr><tr><td>磷酸二氢钾</td><td>Fisher Chemical</td><td>P/4800/53</td><td></td></tr><tr><td>蛋白提取试剂（BugBuster）</td><td>EMD Millipore</td><td>70584-3</td><td></td></tr><tr><td>蛋白纯化树脂（cOmplete）</td><td>Roche</td><td>5893682001</td><td></td></tr><tr><td>旋转振荡器</td><td>Starlab</td><td>RM-Multi 1</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠</td><td>Fisher Chemical</td><td>S/3105/70</td><td></td></tr><tr><td>超声探头，FisherBrand 15–50 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>12931181</td><td></td></tr><tr><td>超声仪</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB120</td><td></td></tr><tr><td>分光光度计</td><td>Jenway</td><td>Genova Plus</td><td></td></tr><tr><td>亚精胺</td><td>Sigma</td><td>S2626-1G</td><td></td></tr><tr><td>TCEP 0.5 M</td><td>Supelco</td><td>646547</td><td></td></tr><tr><td>Tris 缓冲的 Thermo Fisher NTP</td><td>Thermo Scientific</td><td>R1481</td><td></td></tr><tr><td>来自大肠杆菌 MRE600 的 tRNA</td><td>Roche</td><td>10109541001</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白胨</td><td>Formedium</td><td>TRP02</td><td></td></tr><tr><td>0.2 mL PCR 级离心管</td><td>Sarstedt</td><td>72,737,002</td><td></td></tr><tr><td>7 mL 聚苯乙烯 Bijoux 管（Sterilin）</td><td>Thermo Scientific</td><td>129A</td><td></td></tr><tr><td>锥形离心管（Falcon）15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>锥形离心管（Falcon）50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>微量离心管（Eppendorf）1.5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.001</td><td></td></tr><tr><td>微量离心管（Eppendorf）2 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72.695.700</td><td></td></tr><tr><td>S100 离心管&amp;nbsp;</td><td>Beckman-Coulter</td><td>355619</td><td></td></tr><tr><td>S30 离心管&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>3118-0050</td><td></td></tr><tr><td>超速离心机</td><td>Beckman-Coulter</td><td>Optima XPN-100</td><td></td></tr><tr><td>超速离心机转子</td><td>Beckman-Coulter</td><td>70Ti 固定角转子</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 无 DNase/RNase 蒸馏水</td><td>Thermo Scientific</td><td>10977049</td><td></td></tr><tr><td>涡旋振荡器</td><td>VWR</td><td>444-2791</td><td></td></tr><tr><td>酵母提取物</td><td>Oxoid</td><td>LP0021T</td><td></td></tr></tbody></table>

优化一次性pure与粗提核糖体的制备以实现可重复的无细胞蛋白质合成

Refinement of OnePot PURE and Crude Ribosome Production for Reproducible Cell-free Protein Synthesis

近期的技术进步使得蛋白质合成使用重组元件（Protein synthesis Using Recombinant Elements, PURE）的无细胞系统能够在各个独立实验室中以较低成本且劳动强度更小的方式制备。然而，构成 PURE 系统的 36 种蛋白质组分及核糖体的制备仍是一项复杂的任务，存在较大的变异和出错空间。本文提供了一种基于最新发表的 OnePot 方案的详细且更新的 PURE 系统制备流程，该流程通过调控多个关键步骤实现，特别是使用光密度（OD）标准化的甘油菌种进行接种、对细胞生长的严密监测，以及对最终甘油浓度的控制。采用该方法，我们报告了来自多个生物学重复及不同操作者的可重复的 PURE 系统制备结果。本方案可作为其他实验室制备和优化自身 PURE 系统的参考与起点，从而推动 PURE 系统在多种应用中的普及化，例如生物分子系统的自下而上构建以及合成细胞的开发。

PURE 体系与核糖体制备的工作流程见图1，推荐的工作时间安排见表1。通常通过检测荧光蛋白（如 GFP 或 mCherry）的生成来监测反应，RFU 读数可通过校准转换为浓度11。然而，无细胞蛋白合成（CFPS）的产量取决于所表达的具体蛋白，因此有必要根据 Thornton 等人所述方法对系统进行优化，以高效表达目标蛋白16。优化的起点是调整“基质溶液”中各组分的含量，该溶液需与能量溶液的其他组分分开配制。这些组分包括 DNA 模板、谷氨酸钾、乙酸镁和 tRNA。我们发现，采用此种方式配制溶液可快速完成反应优化，因为针对特定实验可制备多种基质溶液，而反应体系的其余组分则保持不变。此外，可在反应体系中添加最高达 4% 的聚乙二醇（以 PEG8K 形式），以提高合成产量。
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1...

我们介绍一种改进的“使用重组元件进行蛋白质合成”（PURE）系统及无细胞蛋白合成用粗制核糖体的OnePot制备方案，重点在于通过控制细胞生长来最小化批次间的差异。

优化一次性PURE与粗提核糖体的制备以实现可重复的无细胞蛋白质合成

近期的技术进步使得各个实验室能够自行制备基于重组元件的蛋白质合成（PURE）无细胞系统……

我们优化了OnePOT PURE系统和粗制核糖体的制备方法，以提高其可重复性和可及性，使更多实验室能够构建并调试稳健的无细胞系统，用于合成生物学研究。实验中的挑战包括批次间的差异性、表达载体的不稳定性以及生长缓慢的菌株，这些问题都会影响自主制备PURE系统的可重复性和性能一致性。我们发现，严格控制菌株的生长、接种条件以及甘油浓度，可显著提高不同操作者和生物学重复间OnePOT PURE系统及核糖体制备的可重复性和产量。我们解决了目前缺乏可重复且易于操作的体内纯化PURE系统和核糖体的实验方案的问题，帮助实验室克服采用自我抗性进行合成生物学研究的技术障碍。本方案通过标准化培养条件和甘油使用，提高了实验的可重复性和灵活性，并且仅采用超速离心法简化了核糖体的制备流程，避免了更复杂或成本更高的纯化方法。首先，将冷冻的BL21细胞沉淀置于冰上解冻，并向一个洁净的锥形管中加入50毫升核糖体缓冲液A。使用移液器从锥形管中吸取 100 微升核糖体缓冲液 A，加入至无称量 DTT 小瓶中。轻轻吹吸，直至 DTT 沉淀完全溶解，制成 0.5 摩尔 DTT 储存液。然后，用移液器将 100 微升 0.5 摩尔 DTT 储存液移回 50 毫升锥形管中，并将管子置于冰上。使用涡旋振荡器，按照每克细胞沉淀加入2毫升含DTT的核糖体缓冲液A的比例，重新悬浮每个解冻的细胞沉淀。将重悬后的样品合并至一个锥形管中，并确认总悬液体积为10毫升。随后，将10毫升悬液等分为两份，分别加入已标记的锥形管中，每管5毫升。将锥形管固定在支架上，并在冰水浴中使用冷却的超声探头裂解细胞。将超声仪设置为30%的振幅，以开启20秒、关闭20秒为一个循环，共进行10个循环。超声处理后，用含DTT的核糖体缓冲液A将每个裂解样品补至25毫升，并短暂涡旋混匀。将25毫升裂解后的样品转移至两个预冷的S30离心管中。将离心管放入离心机，在4°C条件下以30,000 G离心1小时。然后，小心吸取每个S30管中最多75%的无沉淀上清液，以避免膜污染。将回收的上清液转移至两个预先冷却的洁净S30离心管中。再次离心30分钟后，收集最多75%的无沉淀上清液，并将其转移至两个洁净的50毫升锥形管中。向每根管中加入含DTT的核糖体缓冲液A，直至体积达到25毫升。将25毫升样品转移至两个洁净的预冷S100超速离心管中。将离心管放入超速离心机，于4°C条件下以100,000 G离心4小时。完成最后一次S100离心后，弃去上清液。使用移液器迅速吸除残留缓冲液，以防止沉淀干燥。然后向每个含有核糖体沉淀的 S100 管中加入 400 µL 冰冷的含 DTT 核糖体缓冲液 C。将试管置于冷室中的冰上过夜孵育，使核糖体沉淀充分浸入缓冲液中。第二天，使用1 mL移液器并轻轻涡旋，将透明晕圈状核糖体沉淀完全重悬于缓冲液中。确保仅溶解透明晕圈部分，避免扰动任

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

OnePot PURE 和粗核糖体生产的精细化，用于可重复的无细胞蛋白质合成

通过传统方法纯化的真核生物核糖体常因共纯化出的核酸酶和蛋白酶污染，从而对后续的生化与结构分析产生不利影响。本研究采用酵母核糖体作为模型系统，使用一种快速且简单的色谱纯化方法来解决这一问题。...

高活性酵母核糖体的层析纯化

本方案详细说明了在4天或更短时间内制备基于大肠杆菌（E. coli）的细胞提取物并实施体外（in...

大肠杆菌基于细胞的无细胞蛋白质合成：一种稳健、灵活且易于获取的平台技术的操作方案

本方案描述了自下而上构建可合成RNA和蛋白质的人工细胞的方法、材料、设备及步骤。人工细胞的内部水相包含S30细菌裂解液，该裂解液通过水包油乳液转移法被封装于脂质双层（即稳定的脂质体）内。...

利用无细胞细菌提取物、脂质体和乳剂转移制备蛋白质合成型人工细胞

我们介绍一种使用标准实验室设备快速且经济高效地制备重组型PURE无细胞转录-翻译系统的方法。...

OnePot PURE 无细胞体系

本研究描述了一种无需克隆或使用活细胞，即可从合成基因片段制备大量（µg至mg级）DNA用于蛋白质筛选实验的方案。该方法首先对最小模板进行酶切消化并环化，随后通过等温滚环扩增进行扩增。扩增产物无需纯化即可直接用于无细胞表达反应。...

快速、基于酶促反应的方法：利用无细胞系统对微量线性模板进行扩增以实现蛋白质原型构建

本研究描述了在24小时内完成大肠杆菌（Escherichia coli (E.

24 小时内利用无细胞自动诱导工作流程从细胞到无细胞蛋白质合成

本方案描述了用于构建合成细胞的无细胞蛋白质合成（CFPS）系统。该方案概述了在不同微区室中的关键步骤及代表性结果，旨在为合成细胞研究领域的各类实验室建立最佳实践，推动合成细胞研发的进展。...

无细胞蛋白质合成系统用于构建合成细胞

已知的单层保护簇（MPCs）是由烷硫醇盐稳定的金胶体，其被合成、表征并组装成薄膜，作为简单氧化还原蛋白如铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的质体蓝素（AZ）和细胞色素c（cyt...

单层保护金纳米颗粒薄膜的合成、组装及表征用于蛋白质单层电化学研究

我们介绍了由分裂内含肽介导的蛋白水凝胶的合成。该水凝胶的构建单元是两种蛋白共聚物，每种共聚物包含一个三聚体蛋白的亚基（作为交联剂）以及一半的分裂内含肽。混合这两种蛋白共聚物可触发内含肽反式剪接反应，生成可自组装形成水凝胶的多肽单元。该水凝胶具有高度的pH和温度稳定性，与有机溶剂相容，并可 facile...

一种由分裂型内含肽介导的人工蛋白质水凝胶的合成

介绍了一种带有可密封飞升级反应腔室的微加工装置。本报告包含一项实验方案，用于在这些腔室内密封无细胞蛋白合成反应物，以研究拥挤效应和空间限域对基因表达作用。...

可密封飞升级微腔阵列用于无细胞生物学

了解OnePOT PURE系统优化方案，通过控制菌株生长、接种量和甘油浓度，提高无细胞蛋白质合成的重复性和产量。该方法采用超速离心制备粗核糖体，降低技术门槛，使更多实验室能够建立稳定的合成生物学研究平台。

优化一次性PURE与粗提核糖体的制备以实现可重复的无细胞蛋白质合成

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