大鼠后肢膝下截肢模型与即时靶向肌肉再支配

一项研究探讨了与神经损伤和截肢相关的疼痛，以及神经转接如何影响这种疼痛。截肢限制了常规疼痛评估方法的应用。本方案采用经过修改和替代的测试方法来测量截肢后的疼痛行为。

首先，取一只8至10周龄、体重250至300克的Sprague Dawley大鼠。打开加热垫，准备无菌手术区域，并摆放手术所需的所有无菌器械和材料。

使用4%浓度的异氟烷对大鼠进行诱导麻醉，并以1%至2%浓度维持麻醉。从背部下方开始，沿后肢全长剃除毛发。先用聚维酮碘消毒液清洁手术区域，再用酒精消毒棉片擦拭。重复此步骤两次。

使用结核菌素注射器皮下注射每千克体重一毫克的美洛昔康。使用直尺标记膝关节线，并在距膝关节远端两厘米和三厘米处分别再做两个标记。

使用手术刀在膝关节远端三厘米处做一圈环形皮肤切口。采用钝性与锐性分离相结合的方法，将皮肤与下方肌肉组织环形分离，直至皮肤可自由回缩。通过深层肌肉层重复进行皮下分离，逐层解剖至骨面，同时保持组织平面的完整性。

用记号笔在环形切口近端1厘米处标记胫骨和腓骨。使用小型骨剪在标记位置横断胫骨和腓骨。使用电灼止血以控制出血并实现止血。

检查骨端，必要时钝化或修剪锐利边缘。使用4-0可吸收编织缝线将胫骨前方的肌间隔前缘对合，并以4至6针间距均匀的间断缝合固定。将前侧和后侧肌间隔在骨面上对齐并缝合在一起，形成肌肉垫。

用间断的4-0可吸收编织缝线从侧面缝合皮肤，避免在负重残端缝合。沿切口线涂抹皮肤粘合剂。在股骨后方约5毫米处做一道1.5至2厘米长的纵行臀肌分离切口。

采用钝性分离法分离臀肌和腘绳肌，暴露坐骨神经分叉近端。辨认近端的运动支，包括位于尾股肌（CFM）下方的粗大分支及其分支。用镊子抬起CFM并将其切断。

使用精细的显微外科Dumont镊子，通过钝性分离对半膜肌和股二头肌分支进行神经解剖。夹住神经外膜，用精细的弯头弹簧剪沿纵轴切开，然后分离神经分支。

保留尾股分支，并在坐骨神经干附近切断其余分支。将运动支向下弯曲，以利于吻合。使用弯头弹簧剪刀切开神经外膜，并将其分离以实现对坐骨三分叉的神经化。

使用精细镊子轻轻分离神经分支。用镊子夹住距三分叉远端5至10毫米处的三个分支，即腓总神经、胫神经和腓肠神经。在施加张力的同时，分别于远端横断每根神经，并切除5至10毫米的神经节段。

使用10-0尼龙缝线进行吻合，首先将阴部神经总支与半膜肌支连接。每根缝线至少打三个结。确保无张力放置，避免过度收紧导致神经皱褶，并使吻合部位平顺，避免形成锐角弯曲。

然后将胫神经与股二头肌的粗大分支吻合，并将腓肠神经与股二头肌的细小分支吻合。对于不进行靶肌肉再神经支配的截肢术，在暴露坐骨神经分支后，使用5-0丝线缝合线和镊子结扎腓总神经、胫神经和腓肠神经，确保结扎线压紧神经并用四个方结固定。利用结扎线轻轻向近端牵拉每条神经，并在结扎线远端1至2毫米处横断神经。

切除远端神经段10毫米，然后按照先前演示的方法进行截肢。缝合切口后，沿切口线涂抹皮肤粘合剂。根据IACUC指南，每天监测大鼠伤口完整性、感染迹象、疼痛或痛苦情况，持续七天，并在需要时进行干预。

通过Von Frey测试测得的机械缩足阈值较基线显著降低，并在截肢后各个时间点均持续下降。针刺测试显示，与基线相比，有害反应随时间推移呈增加趋势。残肢的冷敏感性显著增强，并在所有时间点均较基线持续维持在高水平。

本方案可在截肢背景下评估不同的神经处理策略。实施本方案时最大的挑战是以无创方式操作宽度小于一毫米的神经。未来的研究可在此基础上进一步扩展，以改进模型并开发出更可靠的方法来研究幻肢痛。