一种改进的基于气溶胶的经气管博来霉素递送方法，用于建立可重复且微创的小鼠肺纤维化模型

我们旨在建立一种可重复、微创、基于气溶胶给药的肺纤维化诱导模型，以改进临床前药物评价。该模型能够实现稳定可靠的药物递送，同时减少手术创伤，并提高不同实验间的可重复性。我们计划应用此模型来测试我们针对肺纤维化及临床肺损伤的独特疗法。

首先，使用无菌的1毫升注射器抽取3毫升无菌0.9%氯化钠溶液，然后将氯化钠溶液注入含有15单位盐酸博来霉素的西林瓶中。轻轻旋转混匀，直至博来霉素粉末完全溶解，得到浓度为每毫升5单位的储备液。将该储备液分装至无菌的1.5毫升微量离心管中。

然后用无菌生理盐水稀释储备液，配制浓度分别为每毫升3.75单位和每毫升2.5单位的工作液。准备气溶胶递送装置，确保雾化针、雾化注射器和给药柱均齐全。将气溶胶递送注射器浸入无菌生理盐水中。

缓慢吸取液体，暂停八秒钟，然后迅速排出液体。最后一次排出液体后，用无菌生理盐水重新填充注射器。安装雾化针头，并确保连接处充满生理盐水。

然后将完全组装好的针头浸入无菌生理盐水中。为用博来霉素工作液预处理雾化针，需抽吸并排出液体三次，每次循环之间间隔八秒。将博来霉素工作液吸入注射器中。

将一个25微升加样柱插入50微升加样柱顶部，以校准总体积。排出任何多余的溶液。然后将麻醉后的小鼠放置在插管平台上。

将上切牙钩在金属环上，并用胶带固定四肢以稳定小鼠体位。使用弯镊子轻轻拉出舌头。插入小型动物喉镜以观察并暴露声门。

然后将气雾化针头垂直插入暴露的声门，迅速将博来霉素气雾送入气管。之后将小鼠置于加热垫上以维持体温。持续观察小鼠，直至其完全从麻醉中恢复。

通过脚趾夹捏检查反射，确认小鼠存活。苏木精和伊红染色显示，每千克体重五单位博来霉素组出现轻度肺泡壁增厚和局部纤维化。而每千克体重7.5单位组则表现出广泛的肺泡塌陷和严重纤维化病变。

改良Ashcroft评分定量结果显示，与生理盐水对照组相比，博来霉素处理组小鼠的纤维化严重程度呈剂量依赖性增加。Masson三色染色显示，每公斤体重5单位组胶原沉积增加，每公斤体重7.5单位组出现广泛的间质性纤维化。对胶原阳性区域的定量分析证实，博来霉素处理后胶原沉积显著增加，且呈剂量依赖性。

免疫组织化学染色显示，两个博来霉素处理组小鼠肺组织中 Col1A1 蛋白表达均增加，其中 7.5 单位/千克剂量组的染色强度更强、范围更广。经博来霉素处理的两组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量均显著升高，证实肺组织中胶原蛋白积累增加。博来霉素处理组小鼠的静态肺顺应性均显著降低，且呈剂量依赖性。

与生理盐水组相比，仅在每公斤体重7.5单位博来霉素组中，吸气量显著降低。与生理盐水组相比，每公斤体重7.5单位博来霉素组的呼吸系统弹性蛋白显著增加。呼吸系统顺应性仅在每公斤体重7.5单位博来霉素组中显著降低。