Name: 黑腹果蝇间接飞行肌的解剖用于显微镜方法的 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: 学习黑腹果蝇间接飞行肌解剖技术，用于显微镜观察肌节形成与蛋白定位。该优化方案支持发育生物学研究，帮助科研人员深入理解肌肉发育的分子机制。

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作者感谢 Gregory Matera 提供 SmnE33 等位基因，并就 Smn 相关研究进行了有益的讨论。作者感谢 Frank Schnorrer、Cornelia Schoenbauer、Manuela Weitkunat 和 Aynur Kaya-Copur 提供的宝贵建议与支持。作者感谢布卢明顿果蝇品系中心（Bloomington stock centre）提供果蝇品系。本研究得到了密苏里大学堪萨斯城分校（UMKC）科学与工程学院生物与生物医学系统系（MLS）、UMKC 卓越研究资助计划（MLS）以及 UMKC 本科生科研与创意奖学金办公室（SF, MLS）的启动资金支持。

伦理声明： 
本方案中的所有实验均使用黑腹果蝇（Drosophila melanogaster），一种完全变态昆虫。在美国，无脊椎动物不受动物福利法规的约束，其使用无需伦理审批。所有操作均遵循标准的机构生物安全和实验室安全指南，并已获得密苏里大学堪萨斯城分校机构生物安全委员会批准，批准编号为21940（22-11）。
1. 成年果蝇间接飞行肌的半胸腔解剖（图1）
<ol>
	<li>准备必要的实验用品，包括两把带有生物尖头的Dumont #5镊子、一把Dumont #3镊子、一对Vannas弹簧剪刀、一支塑料移液管、一把画笔、一个24孔板、无绒擦拭纸、载玻片和冷冻切片机刀片（见材料表）。配制1×PBS、0.05% PBS-T和固定液（见补充文件1）。可在补充图1中查看成年果蝇半胸部分解的流程图概览。</li>
	<li>收集所需基因型和日龄的成虫（例如，刚羽化、1日龄成虫或5日龄成虫）。使用CO2或冰对样品果蝇进行麻醉。 
	注：本方案中使用的果蝇在温度和湿度受控的培养箱中，于12小时光照：12小时黑暗的循环条件下培养。Drosophila通常在25 °C或27 °C下培养，也可在18 °C下培养，后者可将发育周期从10天延长至约20天。</li>
	<li>在体视解剖显微镜下，使用塑料移液管将一滴1×PBS40转移至载玻片上。</li>
	<li>使用画笔或镊子将样品果蝇分小批转移至载玻片上的PBS液滴中（图1A）。使用Vannas弹簧剪刀去除头部（图1B）、翅膀（图1C – D）和腹部（图1E），保留附着的足部（图1F）。</li>
	<li>使用画笔或镊子将胸部分轻轻转移至24孔板中一个孔内的500 µL固定液中。在摇床/旋转摇床上固定所需时间（通常为15–60分钟）。 
	注：本方案适用于多种固定缓冲液，包括多聚甲醛、戊二醛、甲醇、乙二醛溶液等。有关优化固定条件的详细信息，请参见代表性结果和补充文件1。应根据所在机构的危险化学品操作指南，佩戴手套和适当的个人防护装备（PPE）处理固定剂。</li>
	<li>使用200 µL移液器吸除固定液，并在室温下用1 mL 0.05% PBS-T在摇床/旋转摇床上洗涤5分钟。 
	注：固定液应按照所在机构的危险化学品处理指南进行处置。对于大多数抗原，固定后的胸部组织可在4 °C下保存于1 mL 0.05% PBS-T中，最长可达2周，之后再进行切片和染色。在使用前应测试更高浓度的Triton X-100，因为长时间的洗涤剂孵育可能破坏肌节结构。</li>
	<li>使用200 µL移液器吸除缓冲液，并用画笔或镊子将胸部组织转移至体视解剖显微镜下载玻片上的一滴0.05% PBS-T液滴中。</li>
	<li>将胸部组织调整为小盾片朝上，并用一对Dumont #3镊子夹稳固定（图1G–H）。</li>
	<li>将冷冻切片机刀片沿胸部横向滑动，以在小盾片上刻出凹口（图1H、J、L），然后沿中线一次性平稳向下切割（图1I、J、L–N），从而获得暴露间接飞行肌（IFMs）的半胸切面（图1K）。 
	注：在切割IFMs之前，必须先在体壁上&#34;刻出凹口&#34;或使其产生裂纹，以避免因拉伸造成肌节结构的人为损伤。切勿将刀片&#34;来回锯动&#34;，因为这种动作会机械性损伤IFMs，导致肌原纤维散乱。过多的缓冲液会使胸部组织在镊子间不稳定，增加切割难度。其他替代方法包括将胸部组织逐个固定在双面胶带上以辅助切割，或从胸部腹侧进行切割。</li>
	<li>将胸部的两个半部分移动至载玻片上的适当位置，使其保持被缓冲液覆盖以防止干燥，同时不妨碍后续切割操作。重复步骤1.8–1.10，直至所有胸部组织均被切开。</li>
	<li>使用镊子将载玻片上的胸部半切片转移至24孔板中一个孔内的500 µL 0.05% PBS-T中，随后进行封闭和免疫染色（见下文第4节）。</li>
</ol>
2. 晚期蛹期间接飞行肌的半胸腔解剖（约羽化后48小时至96小时）（图2，图3）
<ol>
	<li>将所需基因型和龄期的蛹置于蛹期发育的选定阶段图2）。收集雄性或雌性白色未成熟蛹（图2A，B) 使用湿润的画笔转移，并在60 mm细胞培养皿中湿润的滤纸上孵育。蛹期的分期及从蛹壳中取出的方法此前已有描述20,26. 
	注意：蛹在发育过程中会经历多种形态学变化，例如头部外翻以及蛹壳、复眼和刚毛的色素沉着。19,41 (图 2C）。这些形态特征可作为粗略判断蛹龄的依据（图 2D-）以及识别未能正常发育的蛹（图 2F然而，为确保准确的分期时间线，建议在较短的时间窗口内收集白色未成熟蛹，例如每30分钟或每2小时进行一次分期。精确的分期时间点对于区分24小时至35小时成蛹后（APF）期间细胞骨架结构和肌纤维长度发生的主要变化至关重要，同时也用于区分35小时、48小时、60小时、72小时、80小时和90小时成蛹后（APF）肌节结构的差异。18,42.</li>
	<li>准备必要的实验用品，包括一把画笔、两把带生物学尖头的杜蒙特 #5 镊子、一对万纳斯弹簧剪刀、双面胶带、载玻片、塑料移液管、24 孔板、吸水纸（Kimwipes）和冷冻切片机刀片（参见 材料表）。配制 1× PBS、0.05% PBS-T 和固定液（参见 补充文件 1）。以下蛹期半胸节解剖的流程图概览可参见（补充图2).</li>
	<li>在预定时间点，使用画笔在体视解剖显微镜（10–20倍放大）下，将蛹从滤纸上转移至粘附在载玻片上的双面胶带上图 3A，B将蛹沿胶带排列整齐，保持同一方向，腹面朝下。</li>
	<li>使用一对 #5 镊子打开第一只蛹的蛹壳前端，轻轻移除头端上方的卵盖（operculum）图3C，D，I).</li>
	<li>使用5号镊子小心地沿蛹壳背部翅膀上方切开，并以1-2 mm的间隔逐步将蛹壳从蛹体上剥离。操作时从腹侧向背侧方向进行，随剥离过程将蛹壳固定于双面胶带上图3E - G，I）。避免触碰蛹体本身，应将镊子尖端插入蛹壳与包围蛹体的基底膜（蛹囊）之间。</li>
	<li>取出病例后，使用镊子以刮取动作从下方抬起图 3H，我）并轻轻将蛹从茧中移出，置于另一张载玻片上的一滴1×PBS中（图3J，K）以避免脱水。重复步骤 2.4–2.6（图 3I直至所有蛹均从蛹壳中移出。</li>
	<li>使用 Vannas 弹簧剪从解剖后的蛹中移除腹部（图 3L). 
	注意：去除腹部以便在后续步骤中使固定剂更好地渗透。为避免损伤胸部，应在腹部直接剪开，保留最多30%的腹部组织附着在胸部。</li>
	<li>轻轻转移带有胸部的蛹头图3M使用毛刷或镊子将样本转移至24孔板的一个孔中，加入500 µL固定液。根据所需时间进行固定（通常为15–60分钟），随后按照步骤1.5–1.6所述，用1 mL含0.05% Tween-20的PBS（PBS-T）洗涤。</li>
	<li>使用200 µL移液器去除缓冲液，并在体视显微镜下（10倍放大）用毛刷或镊子将胸部组织转移至载玻片上的一滴0.05% PBS-T液滴中。</li>
	<li>分离一个样品&#160;从其余部分分离，并将腹侧朝下放置，用一对Dumont #3镊子固定图3N).</li>
	<li>用冷冻切片机刀片沿胸部横向滑动，直至基底膜和角质层被划开，然后沿中线以一次平稳的向下动作切开图3O）以生成暴露出间接飞行肌（IFMs）的胸部半切面（图3P). 
	注意：不要 &#34;锯&#34; 前后移动刀片，这种动作会机械性损伤间接飞行肌（IFMs），导致肌原纤维撕裂。缓冲液过多会使镊子间的胸节不稳定，增加切割难度。蛹期胸节可在头部保留的情况下进行切割，头部可朝向左侧或右侧。</li>
	<li>将胸部分成的两半移至载玻片上适当位置，使其保持浸没在缓冲液中以防止干燥，同时不妨碍后续切割操作。重复步骤 2.10–2.12，直至所有胸部组织均完成切割。</li>
	<li>使用镊子将显微镜载玻片上的胸部半切样本转移至24孔板的一个孔中，加入500 µL含0.05% PBS-T的溶液，随后进行封闭和免疫染色（见下文步骤4）。</li>
</ol>
3. 早期蛹期间接飞行肌的摊书式解剖（约出蛹后15小时至48小时）（图4）
<ol>
	<li>按照上述方法（步骤 2.1），将所需基因型和龄期的蛹置于蛹期发育的选定阶段（图 2）。 
	注意：进行敞书式解剖时，应将蛹以每组不超过 8–10 只果蝇的数量进行分组解剖。</li>
	<li>准备必要的实验用品，包括画笔、两把带生物尖头的 Dumont #5 镊子、Vannas 弹簧剪刀、双面胶带、载玻片、塑料移液管、黑色硅胶解剖皿、黑色玻璃染色皿、昆虫针和无尘擦拭纸（见材料表）。配制 1× PBS、0.05% PBS-T 和固定液（见补充文件 1）。后续蛹体敞书式解剖的流程图概览见（补充图 3）。</li>
	<li>在目标时间点，按照步骤 2.3–2.6 所述方法将蛹从蛹壳中取出。取出后立即将蛹转移至盛有 1× PBS 的黑色硅胶解剖皿中（图 4A）。</li>
	<li>待所有蛹均脱离蛹壳后，使用 Dumont #5 镊子克服表面张力，轻柔地将蛹压至硅胶表面。将蛹排列成一行，置于解剖皿中央附近（图 4B）。</li>
	<li>使用 Dumont #5 镊子将两枚昆虫针插入每只蛹的腹部，以固定其位置（图 4C，D）。确保蛹的腹面朝上。</li>
	<li>使用 Vannas 弹簧剪刀剪开每只蛹的基底膜和头部前区（图 4E）。</li>
	<li>将剪刀插入切口，沿每只蛹的左右两侧剪开（图 4F，G，Q）。调整剪刀位置，紧贴发育中的 notum 下方，从后部剪至胸腹部连接处，以连同腹侧部分一并去除腿和翅。确保剪刀水平插入，避免接触胸部背侧部分（图 4Q）。</li>
	<li>使用 Dumont #5 镊子夹住并提起蛹的腹侧部分，再用 Vannas 弹簧剪刀将其完全移除（图 4H，I，Q）。</li>
	<li>使用 Dumont #5 镊子移除脑、腹神经索（VNC）、气管和肠道（图 4J，K，Q）。操作时需小心，避免扰动正在发育的间接飞行肌（IFMs），因其位于气管和腹神经索下方，附着于胸部背侧的表皮上。</li>
	<li>剪去 200 µL 移液枪头的尖端，以形成更宽的开口。使用该改装后的 200 µL 移液枪，轻柔地将 1× PBS 缓冲液冲洗过胸部区域，以去除大部分残留的脂肪体，暴露 IFMs（图 4L，M）。操作应轻柔，避免撕裂连接肌纤维与表皮的肌腱附着点。</li>
	<li>使用 Vannas 弹簧剪刀沿胸部背侧中线剪开，形成两个含有 IFMs 的&#34;叶片&#34;（图 4N）。</li>
	<li>使用剪刀将胸部背侧的叶片从腹部剪下（图 4O，Q），然后用 Dumont #5 镊子将叶片转移至黑色玻璃皿中含 300 µL 固定液的溶液中（图 4P）。镊取时应夹住头部外壳部分，避免损伤 IFM 肌纤维或肌腱。</li>
	<li>根据需要进行固定（通常为 15 分钟）。使用 200 µL 移液枪小心吸除固定液，并加入 500 µL 0.05% PBS-T 进行洗涤。随后进行封闭和免疫染色（见下文步骤 4）。 
	注意：切勿在黑色玻璃皿中对样品进行振荡或摇动。早期蛹阶段的肌肉-肌腱连接极为脆弱，持续的缓冲液扰动会导致其撕裂，造成 IFMs 丢失。更换溶液时，应缓慢而小心地沿液面边缘移液，避免将样品吸入移液枪头内。</li>
</ol>
4. 固定的IFM样本的免疫染色与组织化学
<ol>
	<li>准备必要的耗材，包括移液器、移液器吸头以及所需的抗体或染料。配制 0.05% PBS-T、封闭液及抗体/染料混合液（参见补充文件 1）。</li>
	<li>用移液器将洗涤液（0.05% PBS-T）从样本中吸出，加入封闭液。将样本在封闭液中于室温孵育至少 30 分钟（步骤 1–2 需摇动，步骤 3 无需摇动）。 
	注意：样本也可在 4 °C 下封闭过夜。本方案中，样本使用含 5% 正常山羊血清（NGS）的 0.05% PBS-T 进行封闭。有关封闭液选择的更多详细信息，请参见补充文件 1。</li>
	<li>用移液器将胸段中的封闭液移除，加入一抗混合液，并于室温孵育至少 2 小时，或在 4 °C 下过夜孵育（步骤 1–2 需摇动，步骤 3 无需摇动）。 
	注意：本方案适用于大多数一抗。一抗应使用封闭液进行稀释。本方案中测试的一抗稀释比例范围为 1:10 至 1:2000，具体稀释比例需根据每种抗体实验确定。有关一抗染色优化的更多细节，请参见补充文件 1。</li>
	<li>用移液器移除一抗混合液，使用 0.05% PBS-T 对样本进行洗涤，每次 10 分钟，共洗涤 3 次。</li>
	<li>向样本中加入二抗或染料混合液。用铝箔包裹样本以减少光漂白。于室温孵育至少 2 小时，或在 4 °C 下过夜孵育（步骤 1–2 需摇动，步骤 3 无需摇动）。 
	注意：大多数二抗和荧光细胞染料均可用于本方案。许多二抗的使用稀释比例为 1:500。在下文的代表性数据中（参见代表性结果），细胞核使用 DAPI（1 mg/mL 储存液，在 0.05% PBS-T 中 1:1000 稀释）标记，F-肌动蛋白使用罗丹明鬼笔环肽（300 单位/mL 储存液，在 0.05% PBS-T 中 1:500 稀释）标记。</li>
	<li>用移液器移除二抗/染料混合液，使用 0.05% PBS-T 在室温下洗涤样本 4 次，每次 10 分钟。洗涤完成后立即进入封片步骤（步骤 5）。</li>
</ol>
5. 将染色样本装载到载玻片上以进行显微镜分析（图5）
<ol>
	<li>准备必要的材料，包括画笔、镊子、磨砂载玻片、盖玻片（#1 厚度）、透明指甲油、封片剂和无绒擦拭布（参见材料表）。</li>
	<li>在载玻片的磨砂书写区域标记相应的样品编号或首选的识别信息（日期、基因型、抗体、玻片编号等）。</li>
	<li>放置盖玻片间隔物（#1 盖玻片），在间隔物之间预留约 1 cm 的空间用于放置样品（图 5A-C）。使用少量 50% 甘油固定间隔物（图 5A，D）。 
	注意：在封片较厚样品时，间隔物可防止样品变形。成年果蝇胸部通常需要两个盖玻片厚度的间隔物，48 小时龄蛹胸部需要一个盖玻片厚度的间隔物，而“展开书页”状样品则无需间隔物。</li>
	<li>在盖玻片间隔物之间的凹槽中滴加一滴封片剂；若封片早期蛹样品，则将封片剂滴在载玻片中央（图 5C-D）。将载玻片置于体视解剖显微镜下。 
	注意：有多种类型的封片剂可供选择。若使用自固化封片剂，建议选择固化时间数小时的产品，以便在封片剂固化前有足够时间正确调整样品方向。已有研究表明，不同封片剂会影响肌节的尺寸43,44,45，因此同一实验中的所有样品应使用同一种试剂。</li>
	<li>使用移液器尽可能吸除样品中的洗涤缓冲液，并立即用镊子或画笔将样品转移至载玻片上的封片剂液滴中（图 5E）。</li>
	<li>使用 Dumont #5 镊子将样品排列成行和列，确保样品不重叠，并使胸部样品的间接飞行肌（IFMs）朝上（图 5F,J,Q,S）。若刚毛/角质层朝上，则需小心翻转样品以完成正确朝向（图 5G,H,K, L,R）。操作时避免触碰间接飞行肌，以免破坏肌节结构（参见代表性结果）。</li>
	<li>小心地将一片 #1 盖玻片（18 × 18 mm 或 22 × 22 mm）覆盖在胸部样品上方（图 5M）。若使用了间隔物，应轻轻按压盖玻片，直至其与样品两侧的间隔物接触（图 5N）。</li>
	<li>使用移液器吸头或滴管从边缘补充封片剂，直至所有胸部样品完全被浸没（图 5O）。避免产生气泡，否则会影响成像质量。</li>
	<li>使用透明指甲油密封湿封片。注意需同时密封样品盖玻片及间隔用盖玻片的四周（图 5P,S）。 
	注意：避免使用顶层涂层或快干型指甲油，因其密封效果差，且随着封片剂蒸发会产生气泡。</li>
	<li>室温下干燥 10 分钟。将玻片存放在玻片盒中，置于 4 °C 保存。样品可在数天至数周内进行成像。</li>
	<li>根据实验设计，在荧光显微镜、共聚焦显微镜或其他成像系统上对样品进行成像。图像采集与分析的相关方案可参考其他文献14,30,46,47,48。</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本方案介绍了对黑腹果蝇（D. melanogaster）成虫（图1）&#160;以及晚期蛹（48 h - 96 h APF）（图3）间接飞行肌（IFMs）进行半胸腔解剖，以及对早期蛹（8 h - 48 h APF）（图4）IFMs进行开放式书本状解剖的操作流程。本方案特别适用于免疫组织化学和荧光显微镜分析。文中配有解剖步骤的示意图和分步照片，以直观展示操作过程。总体示意图的加入进一步提升了本方案的可读性，便于刚进入果蝇（Drosophila）研究领域的科研人员、本科生及初级研究人员学习掌握。此外，文中还提供了固定不良和样品制备伪迹的典型示例，帮助使用者区分人为伪迹与真实的肌节表型（bona fide sarcomere phenotypes）。
IFM半胸腔解剖中最困难的步骤是将胸部沿中线切开（图1I、J、L 和 图3O）。该步骤需要花费时间和反复练习才能掌握。切割时，为获得额外稳定性，可将单个胸部样本置于双面胶带上进行切割36，但需注意避免IFM组织干燥。也可从胸部腹侧进行切割，将背侧朝下放置，以便新用户测试哪种方法在其实验条件下更为有效。切割应使用新的锋利刀片，以避免损伤IFM，当刀片变钝时应及时更换。本方案采用切片机（冷冻切片机）刀片对胸部进行干净利落地切割，而不同于其他使用针、镊子或手术刀片的方法24,32,36。剃须刀片是实现胸部干净切开的另一种替代选择。在切开前，固定步骤同样至关重要，因为轻微固定的组织虽然结构保存稳定，但可能呈&#34;柔软易压&#34;状态，从而更难切割。固定时间控制在30–60分钟，可在抗原可及性与组织硬度之间取得平衡，有利于切割操作；有经验者可将固定时间缩短至15分钟。
半胸壁制备方法的一个局限性在于抗体的渗透。半胸壁是较厚的样品32，而最佳质量的共聚焦显微图像通常仅能从IFM的最表层10–20 µm范围内获得42,58。去污剂浓度过低或通透时间过短都可能导致染色微弱且不一致。延长一抗孵育时间（2–3天）也有助于改善抗体渗透。使用双光子系统或工作距离更长的物镜也可增加成像深度59。如果实验者需要对IFM肌纤维的完整直径进行成像，应考虑采用其他方法，例如在矢状面进行切片机24,58或冷冻切片27处理。
主方案中未涉及的一个重要方面是图像数据分析。对于在10倍或20倍图像中IFM肌纤维的分析（图6A-D、图7A、B、E、F、I、J），标准分析包括判断肌纤维是否附着，以及肌纤维的整体形态是否完整37,38。可根据实验需求进行定量的参数示例包括肌纤维的长度、宽度、数量、附着数量或撕裂肌纤维的数量37,60。本方案的一个主要优势是与荧光显微镜兼容，能够在60倍或100倍的更高放大倍数下分析肌节和肌原纤维的形态（图6E-H、图7C、D、G、H、K、L）。肌节形态的分析应基于无技术性伪影的样本进行（图6K-P）。已有研究预先定义了多种可能的肌原纤维和肌节表型类别60。最常用的测量方法是通过图像处理软件手动绘制并测量Z盘到Z盘之间的直线距离，或者使用若干种可免费获取的自动化工具进行测量18,45,61。通过引入标记Z盘或M线、粗肌丝或细肌丝的探针，可进一步提升肌节形态的评估效果30,34,58。这些数据可用于定量描述采用本解剖方案制备的对照样本与测试样本之间在肌纤维、肌原纤维及肌节表型上的差异。
实验操作者应注意，固定虽然能够保存肌纤维和肌节的形态，但固定剂、缓冲液以及封片介质可能导致组织收缩或肿胀，从而影响形态学参数的测量45。用于透射电镜的戊二醛固定和脱水过程已知会引起肌节直径缩小43，而纤维去膜和甘油化处理则已被证明会增加肌节直径44,45。这一现象可能是文献中肌节参数存在差异的原因之一，也凸显了在每次实验中同时设置对照样本和测试样本的重要性。为准确比较肌节的定量参数，对照组和实验组的间接飞行肌（IFM）应在相同的缓冲液中同步处理。
本详细方案旨在使初学者和高级果蝇研究者更易于掌握成虫和蛹期间接飞行肌（IFM）的免疫组织化学与荧光显微镜观察解剖技术。该方案也可根据需要调整用于其他昆虫，以及适用于其他成像技术，例如冷冻电子显微镜（cryo-EM）、单分子荧光原位杂交（smFISH）或空间转录组学。结合强大的Drosophila遗传学工具与荧光显微镜技术，可为研究肌发生及肌肉功能的保守机制提供独特的机会。由于间接飞行肌同样适用于分子与生物化学方法26,27，未来将分子表型与肌肉形态、细胞生物学及功能关联的研究将有助于更深入地理解肌发生过程以及肌肉疾病的病因学。

动物拥有数百块肌肉，控制着从行走、说话到抓握工具等各种运动。为了支持如此多样的功能，肌肉在大小、附着方式、收缩能力、代谢和基因表达方面存在差异1。肌肉生物学领域的一个主要研究重点是理解这些结构和功能差异在发育过程中是如何产生的，以及在肌肉疾病中如何发生改变2。肌肉收缩由肌节驱动，肌节由含肌动蛋白的细丝构成，细丝锚定于Z盘，并与锚定于M线、含双极肌球蛋白的粗丝相互交错3。肌节首尾相连形成肌原纤维，这种在横纹肌中规则排列的结构在显微镜下呈现为明暗相间的条带4，为监测肌节组装和排列的变化提供了一种实用的可视化方法。结合遗传学和生化手段，显微镜技术已为转录调控、RNA加工、代谢和机械信号转导等细胞过程提供了重要见解5,6,7，这些过程指导并精细调节肌肉的发育与功能。许多此类细胞过程在人类肌病和神经肌肉疾病中受到破坏8,9，凸显了理解肌肉发育对于揭示肌肉疾病病因的重要性。基因工程技术的进步使得单个细胞的操作和内源性蛋白标记成为可能10,11，结合成像技术和分辨率的技术进步12,13，确保了显微镜技术在肌肉研究中的持续重要性。因此，具有清晰且易于实施的肌肉解剖和样品制备方案的模型系统在肌肉研究领域具有重要价值。
黑腹果蝇（D. melanogaster）的间接飞行肌（IFMs）是研究肌发生基本原理的一个强大且特征明确的模型系统8。IFMs 每侧胸半区包含六条背纵肌（DLMs），这些肌肉在幼虫期的肌肉模板上形成，同时还包括七条背腹肌纤维（DVMs），后者在蛹期发育过程中从头（de novo）构建14。由于 DLMs 位置靠近中线，易于操作，许多 IFM 研究集中于该肌肉，它是成虫果蝇中最大的肌肉，贯穿整个胸节，长度达 1 mm15。在化蛹初期，IFM 成肌细胞从翅盘铰链处的生态位迁移至胸部，并融合形成合胞体肌管16。在 27 °C 条件下，约化蛹后 24 小时（APF），肌纤维与肌腱连接后，其胞质和细胞骨架逐步组织化、致密化，并于化蛹后 30–32 小时开始肌原纤维生成17。新的肌节不断添加至肌原纤维中，肌纤维持续生长直至填满胸腔，此过程持续至约化蛹后 48 小时。随后，IFMs 进入成熟阶段，伴随转录和剪接模式的改变，逐步获得成体特有的代谢特性、收缩功能以及牵张激活能力18。在 27 °C 条件下，成虫果蝇于化蛹后 90 至 100 小时羽化；而在 25 °C 条件下，雌性果蝇约在化蛹后 98 小时、雄性约在化蛹后 102 小时羽化19。IFMs 是一个多功能且具有高度相关性的模型系统。该系统可在肌发生的各个阶段进行监测，其形态和功能均明显区别于果蝇体内其他类型的肌纤维，并且可利用大量已建立的遗传工具和操作方法8,20。从果蝇到脊椎动物，其收缩机制、基本肌节结构以及许多结构组分均高度保守5，使得从果蝇中获得的肌发生原理可有效转化为人类相关研究。事实上，果蝇已被成功用于建立多种神经肌肉疾病的模型，如强直性肌营养不良、脊髓性肌萎缩症（SMA）、肌原纤维肌病和肌动蛋白病，为揭示这些疾病的病因机制和开发治疗策略提供了重要见解21,22。值得注意的是，果蝇特别适用于显微成像技术，可用于系统分析肌纤维和肌节在整个肌发生过程中的形态变化，涵盖从成肌细胞特化、肌原纤维形成到肌节成熟与维持的各个阶段。
该 果蝇 IFMs 已被用于显微镜研究四十多年，极大地促进了对肌肉生长和发育的理解8在此期间，随着技术的进步，IFM解剖方案不断得到改进，从而产生了多种详略程度不一的方案，这些方案对某些成像技术而言较为理想，而对其他成像技术则可能不够理想。例如，为透射电子显微镜开发的方案涉及强效固定条件、超薄切片以及使用重金属进行对比染色3,23,24,25，但并不适用于光学显微镜观察。已开发出快速从胸部解剖分离间接飞行肌（IFMs）的实验方案，用于生化检测或分子分析26,27 会失去组织结构并可能破坏肌原纤维结构，因此不适合用于显微镜观察。已开发出针对幼虫肌肉或成体腹部肌肉的解剖方法20,28，但不适合完整IFM的分离。活体成像方法需要进行 minimally invasive dissections 或使用特殊培养基，以在成像过程中维持IFM组织的活性29,30，且无需进行免疫组织化学所需的肌肉固定步骤。目前已有多种针对间接飞行肌（IFM）组织的石蜡包埋或冷冻切片方案，这些方法均适用于组织化学或抗体染色。27,31,32，但这些方法通常涉及冷冻和组织脱水，可能改变肌肉超微结构，并限制一抗对某些抗原的识别。直接固定飞行肌（IFMs）的方案可保持肌肉形态，减少抗原构象的改变，因此适用于多种免疫组织化学实验。24然而，这些方案也针对特定应用，例如，解离IFMs的方案可用于单个肌原纤维的荧光显微镜、冷冻电镜或超分辨率显微镜分析20,33,34其他示例包括从胸部解剖完整间接飞行肌纤维的实验方案32,35 或制备整体 mounts 或半胸腔标本20,32,36 能够在完整环境下对肌纤维和肌节进行分析。对于新用户而言，从大量现有方案中进行筛选可能具有挑战性，其中大多数方案仅以文本形式呈现。培训人员和本科研究人员将受益于一种详细应用于标准免疫组织化学实验的完整肌肉纤维（IFM）解剖方案。
本文包含一系列用于解剖与制备的方案 D. melanogaster 用于免疫组织化学显微镜分析的蛹期和成虫期间接飞行肌。该方法已在近期研究中用于追踪RNA结合蛋白Bruno1在发育过程中的功能37 和 Rbfox138 在整个间接飞行肌（IFM）肌发生过程中。该方案包含详细的图示和分步操作图片，指导使用者完成成虫及晚期蛹期（出羽化后48小时至96小时）IFM的半胸廓解剖，其中沿中线将胸部切为两半，同时保持肌纤维结构完整。此外，本方案还涵盖了早期蛹期（出羽化后8小时至48小时）的“开书式”解剖方法，即切开并掀起胸部腹侧部分，如同打开一本书，以暴露仍附着于背侧表皮的完整IFM。方案后续步骤包括固定、染色和样本封片，代表性数据表明，该方法适用于多种固定方式，可用于免疫组织化学和荧光显微镜检测的组织制备。文中提供了典型示例，以帮助新用户识别常见的解剖伪影。该方案已应用于分析发育中IFM的表型特征 SmnE33，运动神经元存活基因（Smn）的一个功能减弱等位基因，用作果蝇模型&#160;脊髓性肌萎缩症（SMA）21,39在26小时、72小时羽化后以及成体间接飞行肌中。本文提供的数据揭示了Smn在肌肉中的特异性功能，并突显了该解剖方案在研究肌肉发育及肌肉疾病病因学中的适用性。

<table><tbody><tr><td>60 mm 组织培养皿</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012921</td><td>60 mm，聚苯乙烯</td></tr><tr><td>冰醋酸（ACS 认证）</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38S-212</td><td></td></tr><tr><td>三磷酸腺苷（ATP）</td><td>Millipore Sigma</td><td>A1852</td><td></td></tr><tr><td>重型铝箔</td><td>Amazon</td><td></td><td>12 英寸 × 1000 英尺</td></tr><tr><td>黑色硅胶解剖皿：活性炭粉末</td><td>Millipore Sigma</td><td>C9157</td><td>大多数药店也可购买</td></tr><tr><td>黑色硅胶解剖皿：Sylgard 184</td><td>Millipore Sigma</td><td>761036</td><td>制备硅胶解剖皿时，将 Sylgard 组分放入自封袋中充分混合。向约 50 g Sylgard 中加入约 200 mg 活性炭粉末，充分混合，剪去袋角，填充至 60 mm 培养皿中，用移液器吸头去除气泡，并过夜固化。&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>纸板载玻片托盘，Research Products International Corp</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-136-7558</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜，Nikon AXR 倒置共聚焦显微镜</td><td>Nikon</td><td></td><td>&lt;a href=&quot;http://www.microscope.healthcare.nikon.com/">www.microscope.healthcare.nikon.com/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>共聚焦显微镜，Zeiss LSM 780 倒置共聚焦显微镜</td><td>Zeiss</td><td></td><td>&lt;a href=&quot;http://www.zeiss.com/">www.zeiss.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Darwin 昆虫饲养培养箱（培养箱）</td><td>Fisher Scientific/Darwin Chambers</td><td>IN034</td><td>可控制光照、温度和湿度的培养箱</td></tr><tr><td>解剖皿（黑色玻璃）</td><td>Mikroskop Technik Diethelm</td><td>398011</td><td>Lymphbecken（染色皿/淋巴槽），黑色玻璃，4×4 cm，带透明玻璃盖</td></tr><tr><td>Dumont #3 镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11231-30</td><td>Dumoxel 直头镊子，12 cm，尖端尺寸 0.17 × 0.1 mm&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Dumont #5 镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td>Inox 直头镊子，11 cm，生物学级，尖端尺寸 0.05 × 0.02 mm&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>EGTA（乙二醇双四乙酸）</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>乙醇，无水（200 证明）</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP28184</td><td>分子生物学级</td></tr><tr><td>Fisherbrand 优质盖玻片（18 × 18 mm）</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548A</td><td>玻璃，方形，#1 厚度（0.13 - 0.16 mm）</td></tr><tr><td>Fisherbrand 优质盖玻片（22 × 22 mm）</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548B</td><td>玻璃，方形，#1 厚度（0.13 - 0.16 mm）</td></tr><tr><td>平底细胞培养板（24 孔）</td><td>Fisher Scientific</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>荧光解剖显微镜相机，Infinity8 相机</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td>600 万像素，低光照，单色</td></tr><tr><td>果蝇：Smn[E33]</td><td></td><td></td><td>果蝇品系；由 Gregory Matera 惠赠</td></tr><tr><td>果蝇：w[1118]</td><td>Bloomington Stock Center</td><td>RRID:BDSC_3605</td><td>果蝇品系</td></tr><tr><td>甘油</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td>分子生物学级</td></tr><tr><td>乙二醛溶液（40 wt. % 水溶液 H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O）</td><td>Millipore Sigma</td><td>128465</td><td>&amp;nbsp;此为 40% 储存液</td></tr><tr><td>图像处理软件，Affinity Designer 2</td><td>Affinity</td><td></td><td>https://affinity.serif.com/en-us/</td></tr><tr><td>图像处理软件，Image J (Fiji)</td><td>ImageJ2</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td></tr><tr><td>昆虫针</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td>不锈钢，直径 0.1 mm（微细针）</td></tr><tr><td>氯化镁（MgCl2）</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA12315A1</td><td></td></tr><tr><td>甲醇（HPLC 级）</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>A452-4</td><td>使用前于 -20 °C 冷却</td></tr><tr><td>载玻片，磨砂面</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-400</td><td>可书写区域，不带电荷，75 mm × 25 mm × 1 mm</td></tr><tr><td>载玻片，普通玻璃</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-4</td><td>预清洁，75 mm × 25 mm</td></tr><tr><td>MX35 超薄切片机刀片</td><td>epredia (Fisher Scientific)</td><td>3053835</td><td>低剖面，34&amp;deg; 切割角；C35 feather 80 mm 刀片效果良好</td></tr><tr><td>透明指甲油（Sally Hansen Xtreme Wear 指甲油）</td><td>Amazon</td><td></td><td>0.4 液体盎司</td></tr><tr><td>正常山羊血清</td><td>Millipore Sigma</td><td>S26-LITER</td><td></td></tr><tr><td>摇床（Mini Nutating Rocker，Benchmark）</td><td>Midwest Scientific</td><td>H3D1020</td><td>固定转速 24 rpm；平台尺寸 8 × 6 英寸，带凹陷垫</td></tr><tr><td>画笔（圆头 0 号）</td><td>Amazon</td><td></td><td>0 号圆头或类似美术用刷</td></tr><tr><td>多聚甲醛（PFA）</td><td>Millipore Sigma</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）：KCl</td><td>Millipore Sigma</td><td>529552-250GM</td><td>根据 Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247 配制 PBS</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）：KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Millipore Sigma</td><td>P0662-500G</td><td>根据 Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247 配制 PBS</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）：Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Millipore Sigma</td><td>S9763-500G</td><td>根据 Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247 配制 PBS</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）：NaCl</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>S271-1</td><td>根据 Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247 配制 PBS</td></tr><tr><td>PR1MA 移液器吸头（10 &amp;micro;L）</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR10XLRK-NS</td><td>通用 10 &amp;micro;L 移液器吸头</td></tr><tr><td>PR1MA 移液器吸头（1000 &amp;micro;L）</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-1000RK-FL</td><td>通用 1000 &amp;micro;L 移液器吸头</td></tr><tr><td>PR1MA 移液器吸头（200 &amp;micro;L）</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-200RK-NS</td><td>通用 200 &amp;micro;L 移液器吸头</td></tr><tr><td>罗丹明-鬼笔环肽</td><td>Invitrogen, Molecular Probes</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>Scotch 双面胶带</td><td>Scotch/3M (Staples)</td><td>649280</td><td>双面涂胶，0.5&quot; × 7 码，大多数办公用品供应商均有售</td></tr><tr><td>磷酸二氢钠二水合物（NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;）</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAA1131636</td><td></td></tr><tr><td>软件：GraphPad Prism</td><td>GraphPad Prism</td><td></td><td>&lt;a href=&quot;http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>软件：Infinity Analyze 7</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td>&lt;a href=&quot;https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/">https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>软件：Microsoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td></tr><tr><td>纸巾/Kimtech Science Kimwipes 精细任务擦拭纸，单层</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666</td><td>标准擦拭纸</td></tr><tr><td>移液管</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td>塑料移液管</td></tr><tr><td>吐温 X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 弹簧剪</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td>3 mm 刃口，尖端直径 0.05 mm，长度 8 cm</td></tr><tr><td>含 DAPI 的 Vectashield</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-2000</td><td></td></tr><tr><td>不含 DAPI 的 Vectashield</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1900</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 滤纸</td><td>Millipore Sigma</td><td>WHA1004070</td><td>滤纸圆片，4 号级，70 mm</td></tr><tr><td>z10 荧光立体解剖显微镜</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr><tr><td>z850 人体工学立体变焦解剖显微镜</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr></tbody></table>

drosophila melanogaster 间接飞行肌的显微观察解剖方法

Dissection of Drosophila melanogaster Indirect Flight Muscles for Microscopy Approaches

黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的间接飞行肌（IFMs）是一个强大的遗传模型，可用于探索肌发生的基本原理。其收缩机制及许多肌节组分在从果蝇到脊椎动物的进化过程中高度保守，使得研究人员能够研究从转录调控、RNA加工到代谢和机械生物学等多个调控并精细调节肌肉发育的细胞过程。许多此类细胞通路在人类肌病中发生改变，而对IFM的研究为肌肉疾病的分子病因提供了相关见解。特别是，果蝇非常适合利用显微镜技术，在整个IFM肌发生过程中——从成肌细胞特化、肌原纤维形成、成熟到维持——分析肌纤维和肌节的形态与功能。本文提供了一种用于显微成像的黑腹果蝇（D. melanogaster）IFM在蛹期和成虫期的解剖方案。文中图示了晚期蛹和成虫IFM的半胸廓解剖方法，以及早期蛹IFM的“开书式”解剖方法。同时描述了固定、染色和样本封片的操作流程，并介绍了常见的解剖伪影，辅以代表性数据展示IFM解剖与不同固定试剂的兼容性。该方案被应用于研究RNA结合蛋白运动神经元存活蛋白（Smn）的低效等位基因SmnE33，检测时间点分别为蛹壳形成后26小时（APF）、72小时APF以及成虫期IFM，从而为脊髓性肌萎缩症（SMA）模型提供了新的认识，并展示了该方案的通用性。这一详细的操作流程有助于研究人员更便捷地使用IFM模型系统，获取高质量的显微成像数据，以深入探究肌发生的科学原理。

Drosophila 是研究肌生成基本机制的有力模型。本方案通过解剖和制备胸部半切片，可对蛹期和成虫期的间接飞行肌进行显微镜分析。该方案支持对细胞形态、蛋白质定位、肌肉结构以及肌生成的其他多个方面进行共聚焦成像分析。

Drosophila melanogaster 间接飞行肌的显微观察解剖方法

黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的间接飞行肌（IFMs）是研究肌发生基本原理的一个强大遗传模型。

我们研究肌肉发育，特别是RNA调控如何参与黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）中肌节的形成以及肌纤维类型特异性功能的建立。间接飞行肌在蛹期发育过程中组装完成。要在体内追踪这一过程，需要开发并优化技术上要求较高的解剖方案。首先，将一张显微镜载玻片置于体视解剖显微镜下。使用塑料移液管向载玻片上滴加一滴 PBS。用毛笔或镊子将样品果蝇以小群体为单位转移至 PBS 液滴中。然后，使用Vannas弹簧剪剪除头部、翅膀和腹部，保留附着的腿部。现在，借助毛刷将胸节轻轻转移至24孔板中一个孔内的500 µL固定液中。将该板置于旋转摇床或往复摇床上，根据需要进行固定，通常时间为15至60分钟。使用 P1000 微量移液器，从孔中移除缓冲液。在体视解剖显微镜下，将一滴含 0.05% Triton X-100 的 PBS 滴加到显微镜载玻片上。然后，使用毛刷或镊子将胸部组织转移至 PBST 液滴中。将胸部腹面朝下，小盾片朝上，并用一对Dumont 3号镊子固定。接着，用冷冻切片机刀片在小盾片上划出切口。然后，沿中线以一次平稳向下的动作切开，将胸部切成两半，从而暴露间接飞行肌。用镊子将胸部分半样本从载玻片转移至24孔板的一个孔中，孔内含500 µL 0.05% PBST，用于后续处理。为进行蛹期间接飞行肌的解剖，需将预蛹置于湿润的滤纸上，并收集至正确的时间点。对于蛹期胸半部解剖，将一条双面胶带粘附于载玻片上，并置于体视解剖显微镜下，放大倍数为10X至20X。在预定时间点，使用画笔将蛹从滤纸转移到胶带上。用5号镊子打开蛹壳前端，轻轻移除盖片。沿蛹壳背侧小心切开，并以1至2毫米的 increments 逐步剥离蛹壳。从蛹壳中取出后，轻轻将蛹转移到另一张载玻片上的 PBS 液滴中。接着使用范纳斯弹簧剪切除腹部。用毛刷或镊子将头部和胸部转移到 24 孔板的一个孔中的 500 微升固定液中。固定并去除固定液后，将胸部组织转移至载玻片上的一滴 0.05% PBST 液滴中。从其余样本中分离出一个胸部，并将其腹面朝下放置，用 Dumont 3 号镊子固定。用冷冻切片机刀片在胸部表面滑动，直至基底膜和角质层被切开。然后，沿中线以一次平滑的向下切口将胸部切成半片，以暴露间接飞行肌。使用毛笔或镊子将半片组织转移至24孔板中含500 µL 0.05% PBST的孔内，用于后续染色。如需对间接飞行肌进行“开放式书本”解剖，需先将蛹从蛹壳中取出，再转移至盛有PBS的黑色硅胶解剖皿中。使用Dumont 5号镊子轻轻将解剖好的蛹压在培养皿表面，并用两枚昆虫针穿过每只蛹的腹部，将其固定成一排。使用Vannas弹簧剪刀剪开每只蛹的基底膜和头部前区。接着将剪刀插入切口，沿蛹体两侧剪开。使用镊子夹起，并用剪刀移除腹侧部分。随后，移除脑、腹神经索、气管和肠道。用剪去尖端的200微升移液枪轻轻吹打PBS冲洗胸段，去除残留的脂肪体。然后，使用一对Vannas弹簧剪沿背部胸部中线剪开，以分离出含有间接飞行肌的两片组织。用Dumont 5号镊子将背部胸部的组织片从腹部切下，并转移至盛有300 µL固定液的黑色玻璃皿中。固定适当时间后，用移液器吸除固定液，再加入500 µL含0.05% PBST的溶液洗涤，随后进行免疫染色。免疫染色完成后，用移液器吸出二抗或染料混合液。随后，在室温下用含0.05% Triton X-100的磷酸盐缓冲液将样本洗涤四次，每次10分钟。在显微镜载玻片的磨砂区域标记样本编号或识别信息，例如日期、基因型、抗体或载玻片编号。在显微镜载玻片上滴加一滴甘油以固定间隔片。然后，将1个盖玻片间隔片放置在显微镜载玻片上，间隔约1厘米。接着，在间隔片之间加入一滴封片介质。用移液器吸出残留的洗涤缓冲液，立即将样品转移至封片剂中。使用Dumont 5号镊子将样品排列成互不重叠的行列，使间接飞行肌面朝上。小心地在样品上加盖一片盖玻片。接下来，用封片剂填充样品区域，直至所有胸部组织被完全包裹。然后，使用透明指甲油密封样品盖玻片和间隔盖玻片。4%多聚甲醛能有效保存肌节形态，但与舒张液相比，多聚甲醛和磷酸盐缓冲液（PBS）处理的样品在肌节宽度上表现出显著差异。甲醇固定可保存肌纤维和肌节结构，但与4%PFA固定相比，肌节明显更短且更细。乙二醛固定与4%多聚甲醛相比显著降低了肌节宽度。固定15或30分钟可保持肌节结构，但固定7分钟则导致形态不一致。由于刀片钝化或刀片打滑，间接飞行肌的肌原纤维结构出现磨损和撕裂。镊子直接接触肌肉导致出现凹痕或拉伸，使肌节被拉开。拉伸或胸廓变形会导致Z线消失。切割纤维导致松散。在蛹壳形成后72小时及成虫阶段，SmnE33突变体缺乏肌节，F-肌动蛋白减少且星状束消失。在蛹壳形成后26小时，SmnE33突变体与对照组均显示出相似的SmnE33纤维束和网状结构。我们收到的免疫荧光显微镜检测间接飞行肌的实验方案，最早可从蛹壳形成后16小时开始，一直延续至晚期蛹发育阶段及成虫阶段。本方案使我们能够观察与蛋白质定位、肌肉结构和功能相关的分子表型及细胞缺陷，这些缺陷通常会导致行为异常。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

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Drosophila 是研究调控肌生成关键分子的成熟模型。然而，现有方法尚不足以确定合胞体内部 mRNA...

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学习黑腹果蝇间接飞行肌解剖技术，用于显微镜观察肌节形成与蛋白定位。该优化方案支持发育生物学研究，帮助科研人员深入理解肌肉发育的分子机制。

Drosophila melanogaster 间接飞行肌的显微观察解剖方法

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