Mouse Models of Epididymitis Induced by Pathogen-Associated Molecular Patterns

我们研究炎症对男性生殖力附睾生理的影响。精准分隔注射炎症诱导剂，且无损伤。小鼠模型中的附睾管需要复杂的外科技能和训练。

开始时，将麻醉动物放在手术场上仰卧。使用电动修剪笔，对小鼠腹部进行毛发切除，完全去除毛发。然后，使用浸泡0.25%氯己定溶液的无菌棉。

然后用酒精进行腹部无菌。用15号手术刀在腹壁右侧切开大约四毫米的垂直切口。现在，用倾斜钝头的手术钳轻轻分离皮肤。

然后，用同一把手术刀在第一次切口侧腹膜上再做一个大约四毫米的垂直切口。通过轻轻推压阴囊右侧，小心地将睾丸中的附睾从腹腔中抬起。使用弯曲的手术钳，轻轻拉出附睾白色脂肪组织，定位附睾的初始段。

借助附睾白色脂肪组织，在切口处露出初始节段。接着，将预装注入溶液的汉密尔顿注射器与初始段第一段约90度平行的位置放置。小心地将针插入夹层间隙，斜角朝下。

然后，将弯曲的手术钳子放在针头插入点，轻轻捏住附睾囊和针头。缓慢按下注射器活塞，直到整个刺激溶液都被注射完毕。保持弯曲手术产钳的位置，小心取出针头，约30秒后松开弯曲手术钳。

接着，利用附睾白色脂肪组织，轻柔地将睾丸组织回归腹腔。用针架和50号手术缝线缝合两针，确定腹膜并闭合，同时用两针缝合皮肤切口。术后观察小鼠，确保术后恢复情况良好。

麻醉后，将小鼠置于手术区上仰卧。将食指和拇指放在阴囊下方，按诊并确认睾丸和附睾的位置。如有必要，轻柔地按摩腹部两侧朝向阴囊方向，引导睾丸和附睾就位。

使用电动修剪笔对阴囊进行三毛切除术，完全去除毛发，并用浸泡在0.25%氯己定溶液中的无菌棉消毒，然后再用酒精消毒。用食指和拇指轻轻拉伸阴囊皮肤。使用15号手术刀，在阴囊内侧做一个大约两毫米的垂直切口。

现在，轻轻将左睾丸和附睾移回腹腔，同时保持右睾丸和附睾在阴囊内。食指和拇指位于右侧睾丸和附睾下方，轻柔地拉伸阴囊皮肤。然后，使用带斜角的钝头手术钳，小心地开合精子筋膜的尖端，以破裂内精筋膜和阴道束膜。

接着，减轻食指和拇指的压力，将斜角手术产钳从阴道外套的开口插入阴囊底部。用镊子小心拉出远端附睾脂肪以定位尾骨附睾。现在定位输精管，将直立的手术钳放在输精管下方。

将斗牛犬镊子夹固定在输精管上，确保尾骨附睾与夹具之间有足够空间。然后，将预装注射液的汉密尔顿注射器以大约10到15度的角度与输精管平行，针头朝上插入输精管。轻轻挤压直立手术产钳以释放输精管，然后缓慢按下注射器活塞，将整个刺激液注入。

现在，取出直立的手术钳。使用弯曲的手术钳，轻轻捏住针头插入部位周围区域，然后小心地拔出注射针。大约30秒后，取出弯曲的手术产钳和斗牛犬镊夹，轻轻将输精管回归阴囊。

接下来，识别阴道束缚，用针夹和50号手术缝线缝合。用食指轻轻将右睾丸和附睾推回腹部，将左睾丸和附睾移入阴囊。最后，用针架和5-0号手术缝线缝合阴囊皮肤切口，观察小鼠情况，确保术后恢复正常。

初始段间隙注射导致注入的蓝色埃文斯染料主要限制在第一段，注射后最多30分钟，随后扩散至相邻段和附睾。输精管内注射将蓝色埃文斯染料限制在第10段腔内，注射后最多30分钟。组织学照片显微照片确认，盐水对照注射在治疗后72小时内未改变附睾形态。

初始节段间质性LPS注射诱发间质性水肿，治疗后72小时内强烈的间质、上皮内和腔内免疫细胞浸润。在尾骨附睾内注射LPS或LTA时，治疗后72小时内出现间质性水肿和间质及腔内腔室的免疫细胞浸润。缺乏可重复的动物模型研究局部附睾炎症及其对男性生育能力的影响。

直接区域注射引发炎症的化学物质，能够精确分析附睾结局中区域特异性的免疫反应。