改良氯化铁诱导上矢状窦血栓形成模型的建立

在我们的研究领域，存在多种用于建立上矢状窦血栓形成的建模方法。然而，三氯化铁诱导法因其操作简便且成本较低而被广泛使用。本研究旨在通过减少皮质损伤并实现对窦内血栓的可视化，优化三氯化铁诱导的上矢状窦血栓形成模型。

首先，将眼用软膏涂抹于麻醉大鼠的双眼，并小心剃除头皮毛发。然后，使用医用胶带将大鼠以俯卧位固定在啮齿类动物手术平台上。通过加热垫维持大鼠体温在约37摄氏度。

使用5%聚维酮碘对剃净的头皮进行彻底消毒，随后使用75%酒精消毒，每种溶液各重复三次。通过脚趾夹捏反射确认麻醉深度后，在头皮上做一处15毫米的近中线皮肤切口。采用钝性分离法，分离下方的筋膜和骨膜，充分暴露颅骨。

使用颅骨钻从人字缝开始，沿矢状缝向前10毫米处，逐步磨薄颅骨，直至上矢状窦清晰暴露。采用间歇性钻孔技术，避免损伤下方的硬脑膜和上矢状窦，并反复用生理盐水冲洗钻头，以防止对皮层造成热损伤。在完成基线状态成像后，将一段10毫米长、浸有40%氯化铁溶液的2-0丝线缝合线敷于暴露的上矢状窦表面，持续5分钟。

更换为新浸泡的缝线段，再持续作用五分钟。随后，用0.5毫升生理盐水冲洗手术区域三次，以清除残留的氯化铁。使用4-0丝线间断缝合皮肤，并用聚维碘酮碘消毒该区域。

观察大鼠直至其完全清醒，然后将其放回笼中。打开激光散斑对比成像系统及相应的软件 RF LSI 版本五。按下在线模式按钮以启动实时成像。

调节仪器的高度和位置，直至指示激光位于视野中央。将大鼠放置在泡沫平台上，并调整其位置，直至上矢状窦与指示激光对齐。调节放大倍数和焦距，直至图像清晰显示。

设置伪彩色阈值的下限和上限，以优化伪彩色图像的视觉效果。在上矢状窦区域设置圆形感兴趣区（ROI），记录静脉血流，并保存原始图像和伪彩色图像。准备异氟烷、超声耦合剂、一次性剃须刀片、医用胶带，并检查所有必需的仪器设备。

将三维采集电机安装到成像系统上，然后安装UHF 57X探头并初始化电机。麻醉大鼠后，将其俯卧位放置在设定为37摄氏度的恒温成像板上，并使用医用胶带轻轻固定其头部和四肢。

在暴露的头皮上均匀涂抹超声耦合剂。调整大鼠相对于换能器的位置和方向，直至清晰显示上矢状窦及管腔内血栓。使用三维B模式成像，以0.04毫米的步长，在矢状面获取上矢状窦的连续断层图像，随后采用相同设置在冠状面获取断层图像。

使用彩色多普勒模式观察上矢状窦中的血流，并应用脉冲波多普勒模式测量血流速度。停止麻醉，观察大鼠直至其完全清醒，然后将大鼠放回笼中。

最后，导出采集的图像，并使用 Vevo LAB 软件进行分析。记录上矢状窦内血栓的最大矢状面和冠状面横截面积及其体积，同时记录窦内最大血流速度。在局部应用三氯化铁后，激光散斑血流成像检测到上矢状窦局部血流较基线水平显著降低。

术后第7天，小动物超声检查证实上矢状窦内血栓形成，并伴有部分管腔再通。脉冲波多普勒超声显示上矢状窦残余管腔内可测得血流速度。三维超声成像通过连续厚度为0.04毫米的图像切片，实现了上矢状窦血栓体积的定量测量。

我们改进后的模型侵入性更小，且与超声成像具有更高的兼容性，能够实现更可靠的直接治疗开发与评估。确保术中激光散斑对比成像确认模型成功建立，术后高分辨率超声动态监测血栓形成、溶解及管腔再通情况。