采用双相酸-溶剂法从小鼠粪便中提取短链脂肪酸

本方案可从少量小鼠粪便样本中提取短链脂肪酸（SCFAs），用于常规基于气相色谱的分析。短链脂肪酸包括乙酸、丙酸和丁酸，由肠道微生物群通过膳食纤维发酵产生。由于短链脂肪酸与行为、代谢和生理表型相关，因此受到广泛研究。

然而，对粪便样本中短链脂肪酸（SCFAs）的定量仍然具有挑战性。这些代谢物具有挥发性，通常含量较低，且需在复杂的生物基质中进行检测。在小鼠研究中，从每只动物收集的粪便样本量通常也十分有限。

标准方法可能需要衍生化步骤、相对较大量的样品体积或专用设备。本文介绍了一种适用于常规气相色谱分析的双相酸溶剂萃取流程，使用稀盐酸和乙酸乙酯从少量小鼠粪便样品中提取短链脂肪酸（SCFAs）。接下来，我们首先进行正确的布局，以继续后续实验方案的操作。

接下来，我们准备好已正确标记的样本盒，其中包含我们的冷冻粪便样本。然后，将1000微升移液器设定为255。现在，我们已准备好标记好的HCl稀释液。

我们继续将 HCl 分配到每个样品中。现在，我们将乙醇加入镊子的清洗孔中。接着，我们使用相同的乙醇为研杵制备浸泡液。

现在，我们取粪便样本并将其放入离心管中。接着，使用干净的研磨棒在各自的离心管内研磨每份粪便样本。将样本置于涡旋振荡器上，至少振荡10秒，或直至完全混匀。

将混合样品放入离心机并进行设置。确保离心机正确平衡。将离心机参数设定为16,000 ×g，4°C，离心10分钟。

10 分钟结束后，从离心机中取出样品。根据样品对应关系，重新标记新的离心管。将 200 微升移液器调至 120 微升。

小心移除上清液，确保不要触碰到沉淀。将上清液转移至新的相应小瓶中。沉淀物可弃去。

向新的小瓶中加入等量的乙酸乙酯。将这些样品重新放入离心机。设置离心机在4°C条件下以2,374 ×g离心20分钟。

20 分钟结束后，取出样品。根据样品重新标记新的离心管。将移液器调回 120 微升。

小心不要触碰底层，仅移除上层液体。将上清液转移至正确标记的新离心管中。将这些样品转移至样品盒中，用于储存，直至进一步分析。

最后，将样本盒放入 −80 °C 超低温冰箱中。提取的短链脂肪酸（SCFA）分装样品，每份 120 µL，在使用气相色谱法进行定量前于 −80 °C 保存。定量分析鉴定出八种短链脂肪酸，包括关键代谢物：乙酸、丙酸和丁酸，如图所示。

为验证短链脂肪酸（SCFA）的分离效果，通过回收率和重复性试验评估了气相色谱数据。回收率通过向对照样品中添加已知浓度的内标物进行评估，而重复性则通过日内和日间重复分析进行验证。综上所述，本方案提供了一种从少量小鼠粪便样品中提取SCFA的工作流程。

该方法无需衍生化处理，且与常规基于气相色谱的分析兼容。此方法可支持在多种小鼠模型中进行粪便短链脂肪酸的测定。