Name: 从冷冻的Buffy皮毛样本中重新编程诱导多能干细胞系 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 了解将冷冻Buffy外套或PBMC重编程为诱导多能干细胞的方法。本方案通过密度梯度离心纯化细胞，利用Sendai病毒携带Yamanaka因子进行转导，并建立形态学检查点以预测重编程成功率，适用于生物样本库中珍贵患者样本的iPSC制备。

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根据机构审查委员会（IRB）协议编号UGA# 2012-10769-06、NYU# s21-01701、Emory# 2024P008659和Emory# 000002114，招募了人类受试者，并获得其参与献血的知情同意。本研究工作得到了美国国立卫生研究院（NIH）下属国家普通医学科学研究所的支持，资助编号分别为J. Art获得的5T32GM142623、V. Michopoulos获得的R01MH115174以及N. Zeltner获得的R01NS114567。本内容仅由作者负责，不代表美国国立卫生研究院的官方观点。

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我们声明，本研究在无任何可能被解释为潜在利益冲突的商业或财务关系的情况下进行。

诱导多能干细胞（iPSC）技术在生物医学领域具有巨大潜力，可用于疾病机制研究、个性化医疗以及“培养皿中的临床试验”22,23。从血液样本中高效且可灵活调整的iPSC重编程方案是释放iPSC技术广阔前景的关键，因为血液样本易于采集，并且在生物样本库中通常 readily available。尽管已有多种文献报道了从纯化的外周血单个核细胞（PBMC）进行重编程的方案，但本方案重点介绍从纯度较低的血液样本（即冻存的血沉棕黄层）中进行重编程的方法，并明确了重编程过程中的关键检测节点，以便于评估实验成功与否，从而最大限度地减少时间和资源的浪费。
成功重编程的第一个关键步骤是拥有高质量的起始样本（图5，CK1）。从新鲜血液中纯化的外周血单个核细胞（PBMC）是重编程最方便的起始样本；然而，在本方案中，详细描述了从冻存的白膜层等非理想样本开始实现成功重编程的步骤。解冻白膜层后通过密度梯度...

人类多能干细胞（hPSC）技术是一种易于扩增且可再生的人类细胞来源，能够分化为体内任何类型的细胞，使研究人员得以研究在患者中难以获取或无法触及的细胞和组织类型。此外，诱导性多能干细胞（iPSCs）可直接从患者的体细胞中获得1。这使得特定患者的感兴趣细胞类型得以分化，为疾病建模和药物发现提供了极为宝贵的工具。因此，将体细胞重编程为iPSCs的严格、可重复且高效的方法至关重要。
成纤维细胞、尿液细胞和血细胞2,3是诱导多能干细胞（iPSC）制备中最常用的体细胞来源，但各自均存在一定的局限性。&#160;成纤维细胞历来是最常用的重编程细胞类型3，但其获取过程相对有创，需进行皮肤活检，操作不便。可重编程的细胞也可来源于尿液样本，该方法采集简便且无创，但重编程过程必须在样本采集后48小时内使用新鲜样本启动4。血液则是获取可重编程细胞的优良来源，因其采集创伤小且易于获得。目前已有多种从外周血单个核细胞（PBMCs）进行重编程的技术方案，PBMCs是一类具有单个细胞核的血细胞，包括淋巴细胞、单核细胞和自然杀伤细胞5。由于PBMCs的密度低于其他血细胞，可通过密度梯度离心法从新鲜分离的全血样本中分离或纯化获得5。此外，全血经离心后可形成三层结构：血浆层、白膜层（buffy coat）和红细胞层6。白膜层中含有PBMCs，同时也包含血小板和少量红细胞。然而，在大多数生物样本库中，PBMCs并不易获得，而全血或白膜层则更为丰富且易于获取7。尽管生物样本库中存有大量白膜层样本，且其中含有可重编程的PBMCs，但目前极少有技术方案详细描述如何从冻存的白膜层中进行重编程8，使得这一资源尚未得到有效利用。
目前已有多种已发表的实验方案1,8,9以及市售试剂盒10可用于简化重编程流程；然而，这些方法并未深入探讨如何最大限度地提高难以重编程的患者供体细胞的重编程成功率。通常认为某些细胞本身就无法实现重编程，当这种情况发生时，许多研究人员可能会尝试使用不同类型的供体细胞或来自其他患者的细胞。然而，这对许多研究人员或患者群体而言可能并非可行的选择。与先前已发表的实验方案8,9不同，本实验方案包含一个设有检查点和判断标准的指导流程，可用于预测重编程是否成功，并采用了一种独特的方法：在冻存的血沉棕黄层解冻后，通过密度梯度离心法对其进行纯化。
该过程首先从选定个体中抽取血液，并分离外周血单个核细胞（PBMCs）或血沉棕黄层（buffy coats）。对于新实验，通常需要招募新的供体，在机构审查委员会（IRB）批准及签署适当知情同意书的前提下进行新鲜采血。下一步是体细胞扩增，即将冻存的血细胞解冻，并在促进造血干细胞和红系祖细胞增殖的条件下进行培养，这些血细胞是重编程的最佳候选细胞11。经过10至14天培养后，细胞应已准备好进行重编程，其标志为一种此前方案中未讨论过的独特形态学特征；随后通过接种携带Yamanaka因子Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4的仙台病毒对其进行转导1。转导后，细胞将开始表达Yamanaka转录因子，并回归到多能状态，这一过程再次表现为明显的形态学改变以及形成干细胞克隆的增殖现象。新生的克隆被逐一挑取，扩增并冷冻保存。经过十次传代后，通过验证干细胞标志物的表达以及向三个胚层分化的能力，可确认成功建立重编程的诱导多能干细胞（iPSC）系。
该方案最适合使用储存时间少于&#60;1 个月的冻存血沉棕黄层（buffy coats），或解冻后至少有 100 万活细胞的、储存时间长达 2 年的冻存外周血单个核细胞（PBMCs）。然而，文中所述的质量控制节点也可用于指导从任何质量的血液样本中进行重编程问题的排查与解决。此外，关于将重编程获得的诱导多能干细胞（iPSCs）适应无饲养层条件的详细信息，可适用于任何 iPSC 重编程工作流程，无论起始体细胞类型如何。
本方案通过实际操作中的问题排查建立，详细阐述了从冻存的血沉棕黄层中重编程诱导多能干细胞（iPSCs）的方法，并鉴定了重编程成功的形态学指标，为难以重编程样本的处理提供了切实可行的操作指南。最终，实施这些策略可有效节约时间、经费、试剂和样本资源。

<table><tbody><tr><td>10 cm 标准组织培养皿</td><td>Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>12 孔板</td><td>Falcon</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 圆锥形试管</td><td>Fisher</td><td>7200886</td><td></td></tr><tr><td>24 孔板</td><td>康宁</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>4% 甲醛溶液</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>J19943-K2</td><td></td></tr><tr><td>6 孔板</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012927</td><td></td></tr><tr><td>accuSpin1R</td><td>Fisher Scientific</td><td>75003449</td><td></td></tr><tr><td>激活素A</td><td>Bio-techne</td><td>338-AC</td><td></td></tr><tr><td>AF488-驴 &amp;alpha; 山羊</td><td>invitrogen</td><td>A11055</td><td></td></tr><tr><td>AF555-驴 &amp;alpha; rbt</td><td>invitrogen</td><td>A31572</td><td></td></tr><tr><td>AF647-驴 &amp;alpha; m</td><td>invitrogen</td><td>A31571</td><td></td></tr><tr><td>AF647-驴 &amp;alpha; rbt</td><td>invitrogen</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>抗生素-抗真菌素（100X）</td><td>Fisher</td><td>15 240 096&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Basix 聚苯乙烯刻度吸管</td><td>Fisher</td><td>14955233&lt;br/&gt; 14955234&lt;br/&gt; 14955235&lt;br/&gt; 14955236</td><td></td></tr><tr><td>BD 结核菌素注射器</td><td>Fisher</td><td>14-826-87</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutaine 玻璃单个核细胞分离（CPT）管</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-685-125</td><td>PBMC分离用采血管</td></tr><tr><td>BD&amp;nbsp;含K2EDTA的Vacutainer塑料采血管：Hemogard封口</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-657-32</td><td>抗凝剂包被的采血管</td></tr><tr><td>β-巯基乙醇</td><td>Fisher</td><td>21 985 023&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>牛明胶</td><td>Sigma</td><td>G1393</td><td></td></tr><tr><td>Brachyury-T 抗体 多克隆山羊 IgG</td><td>R&amp;研发</td><td>AF2085</td><td></td></tr><tr><td>CellDrop BF</td><td>Denovix</td><td>CellDrop BF</td><td></td></tr><tr><td>离心 5702</td><td>Eppendorf</td><td>EP022628102-1EA</td><td></td></tr><tr><td>化学成分明确的脂质浓缩液</td><td>Fisher</td><td>NC9022744</td><td></td></tr><tr><td>CHIR 99021&amp;nbsp;</td><td>R&amp;研发</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 培养箱</td><td>Sanyo</td><td>MCO-20AIC</td><td></td></tr><tr><td>冷冻保存储存系统</td><td>Custom Biogenic Systems</td><td>V-1500AB</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor CS10</td><td>干细胞技术</td><td>100-1061</td><td>替代冻存液</td></tr><tr><td>CytoTune-iPS 2.0 Sendai 重编程试剂盒</td><td>Fisher</td><td>A16517</td><td></td></tr><tr><td>地塞米松</td><td>Sigma</td><td>D2915</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Fisher</td><td>11965118</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Fisher</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher</td><td>BP231-1</td><td></td></tr><tr><td>DPBS 1X 不含钙镁&amp;nbsp;</td><td>Fisher</td><td>MT21031CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher</td><td>AM9262</td><td></td></tr><tr><td>促红细胞生成素（EPO）</td><td>Bio-Techne</td><td>287-TC-500</td><td></td></tr><tr><td>Essential 6 培养基（E6）</td><td>Fisher</td><td>A1516401</td><td>分化基础培养基&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Essential 8 培养基（E8）</td><td>Fisher</td><td>A1517001</td><td>hPSC 基础培养基</td></tr><tr><td>EVOS FL 显微镜</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>AMF4300</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>VWR</td><td>45000-734</td><td></td></tr><tr><td>碱性成纤维细胞生长因子（FGF2）</td><td>Bio-techne</td><td>233-FB/CF&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Geltrex</td><td>Fisher</td><td>A1413202</td><td>基质包被</td></tr><tr><td>Gibco MEM 非必需氨基酸溶液（100X）</td><td>Fisher</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Fisher</td><td>35050061</td><td>L-谷氨酰胺替代物&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>肝素</td><td>干细胞技术</td><td>7980</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque 1077</td><td>Sigma</td><td>10771</td><td>密度梯度溶液 1&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>全转铁蛋白</td><td>Sigma</td><td>T0665</td><td></td></tr><tr><td>人干细胞因子（SCF）</td><td>Peprotech</td><td>300-07-100UG</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素样生长因子1（IGF1）</td><td>Peprotech</td><td>100-11-100UG</td><td></td></tr><tr><td>白细胞介素-3（IL-3）</td><td>Peprotech</td><td>200-03-2UG</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp 210 水浴箱</td><td>Fisher Scientific</td><td>210</td><td></td></tr><tr><td>Knockout-血清替代物（KSR）</td><td>Fisher</td><td>10828028</td><td>无FBS补充剂&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>L-抗坏血酸</td><td>Sigma</td><td>A4544-100G</td><td></td></tr><tr><td>LDN193189</td><td>Stemgent</td><td>04-0074</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺</td><td>Fisher</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>淋巴细胞分离液</td><td>干细胞技术</td><td>7801</td><td>密度梯度溶液 2</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>康宁</td><td>CB-40234</td><td>基质包被</td></tr><tr><td>小鼠胚胎成纤维细胞</td><td>Fisher</td><td>A34964&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nanog 多克隆山羊 IgG</td><td>R&amp;研发</td><td>AF1997-SP</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 生物样本库与细胞培养冻存管</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-163N</td><td></td></tr><tr><td>青霉素/链霉素</td><td>Fisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>纯化的兔多克隆抗 Pax-6 抗体 IgG</td><td>Biolegend</td><td>901301</td><td></td></tr><tr><td>QBSF-60 无血清培养基</td><td>Quality Biological</td><td>160-204-101</td><td>EM基础</td></tr><tr><td>无血清细胞冻存培养基</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>12648010</td><td>替代冻存液</td></tr><tr><td>重组人玻璃连接蛋白（rhVitronectin, VTN）</td><td>Fisher</td><td>A31804</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 培养基</td><td>Fisher</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>SB431542</td><td>R&amp;研发</td><td>1614</td><td></td></tr><tr><td>仙台病毒HN单克隆抗体小鼠IgG2a</td><td>Invitrogen</td><td>14649482</td><td></td></tr><tr><td>亚硒酸钠</td><td>Sigma</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Sox17 抗体 多克隆 山羊 IgG</td><td>R&amp;研究与开发</td><td>af1924</td><td></td></tr><tr><td>StemSpan 红系扩增添加剂</td><td>干细胞技术</td><td>2692</td><td>替代性商用扩增培养基添加剂</td></tr><tr><td>StemSpan SFEM II 培养基</td><td>干细胞技术</td><td>9605</td><td>替代性商用扩增培养基</td></tr><tr><td>超低温冰箱</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>TSX60086A</td><td></td></tr><tr><td>通用移液器吸头-带滤芯</td><td>VWR</td><td>76322-132&lt;br/&gt; 76322-134&lt;br/&gt; 76322-150&lt;br/&gt; 76322-156</td><td></td></tr><tr><td>XAV939</td><td>Bio-techne</td><td>3748/10</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 二盐酸盐</td><td>BioGems</td><td>1293823</td><td></td></tr></tbody></table>

从冻存的血沉棕黄层样本重编程诱导多能干细胞系

Reprogramming Induced Pluripotent Stem Cell Lines from Frozen Buffy Coat Samples

人类多能干细胞（hPSCs）是疾病建模的重要工具。此外，干细胞可由成体体细胞重编程获得，称为诱导性多能干细胞（iPSC）。iPSC技术使得针对特定研究对象和人群的评估成为可能，并推动了个性化医学的发展。血液样本常规被采集并冷冻保存用于科研目的。这些样本可加工为“血沉棕黄层”（buffy coat），即含有白细胞和血小板的血液组分，或加工为外周血单个核细胞（PBMCs），后者是更为纯化的白细胞群体，不含嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、血小板或红细胞。两者均为易于获取且相对非侵入性的可重编程体细胞来源。已有多个研究报告了从PBMCs进行重编程的方法，而仅有一篇文献描述了从冷冻保存的血沉棕黄层中进行该过程。近期实践经验表明，文献中及厂商提供的PBMC重编程方案在应用于冷冻血沉棕黄层样本时均未能成功，因此需要采用本文所述的优化与故障排除策略。对于许多使用iPSC技术的研究人员而言，建立具有高成功率的详尽操作流程至关重要，尤其是在患者样本细胞数量稀少、采集时间间隔较长、来自有限的受试者群体或样本本身极为珍贵的情况下。本文确定了若干关键质控节点和故障排查策略，以提高对人类冷冻血沉棕黄层或纯化PBMCs进行重编程的成功几率。最终，该方案将帮助研究人员识别重编程成功的预测指标，并制定替代策略以提升成功获得iPSC的几率。

该实验方案的成功可在多个阶段进行追踪。表1汇总了已应用本方案的样本情况。起始样本为冻存一周的外周血单个核细胞层（buffy coat）或冻存的外周血单个核细胞（PBMC），若解冻后样本质量良好，并在细胞扩增后呈现明显的可重编程形态特征，则7次中有6次成功实现了重编程（表1，类别1）。另有两份在相似条件下采集和保存的buffy coat样本，其质量和形态学表现类似，但被用于建立其他检测方法，而非进行重编程。相反，若起始样本为长期冻存（&gt; 6年）的buffy coat，无论其解冻后质量如何，在体细胞扩增后均不会呈现可重编程的形态特征，也无法成功重编程（表1，类别2）。为节约资源，扩增后未呈现可重编程形态特征的样本不应进行转导操作（表1，类别3）。
总体重编程的成功与否取决于扩增后的外周血单个核细胞（PBMCs）/血细胞的健康状况，而这又与细胞的保存条件密切相关。冻存的血样在解冻后立即加入DPBS时，若细胞能够扩散（良好），表明状态较好；若出现致密...

本方案详细介绍了针对患者外周血单个核细胞（PBMC）诱导多能干细胞（iPSC）建系过程中难以按照制造商说明书进行重编程时的故障排除步骤。该方案主要适用于冻存的血沉棕黄层样本，但也可用于纯化的PBMC细胞的重编程。

人类多能干细胞（hPSCs）是疾病建模的重要工具。此外，干细胞可由成体体细胞重编程获得，这类细胞称为……

本实验方案的目的是将人类冻存的血沉棕黄层或外周血单个核细胞重编程为诱导性多能干细胞。该方案在解冻后对血沉棕黄层进行独特纯化，并鉴定出一种可指示重编程成功与否的体细胞形态特征。首先，取出源自人类血液的冻存血沉棕黄层，并置于冰上。将样品在37摄氏度水浴中轻轻摇晃，当仅剩少量冰晶时取出小瓶。小心地将小瓶中的内容物逐滴转移至含有12毫升DPBS的锥形管中。用1毫升DPBS冲洗小瓶，并将冲洗液加入含有回收细胞的锥形管中。使用水平转子，在室温下以 200 g 离心样品 10 分钟。小心吸去上清液，并将细胞沉淀重悬于 4 毫升含 1% FBS 的 DPBS 中。接着，将血沉棕黄层混合物轻轻铺在 3 毫升密度梯度溶液之上，注意避免在界面处发生混合。使用水平转子，在室温下以800 ×g离心20分钟，关闭刹车。用移液器小心吸除并弃去上层血浆层，注意不要扰动血浆与分离液的界面。然后吸取位于界面处的外周血单个核细胞（PBMC）层，并转移至一个新的15毫升离心管中。通过加入三毫升扩增培养基，以200 ×g在室温下离心10分钟，洗涤外周血单个核细胞。小心吸去上清液，并将沉淀重悬于两毫升含有细胞因子（如SCF、IL-3、EPO和IGF-1）的扩增培养基中。将细胞接种至12孔板中的1个孔内。将细胞在37摄氏度、5%二氧化碳和20%氧气条件下培养10至14天。每隔一天更换一半培养基，直至观察到大量明亮、圆形的成红细胞，表明细胞已准备好进行转导。用携带Yamanaka因子的仙台病毒转导三天后，将细胞接种至小鼠胚胎成纤维细胞上，每孔2毫升。将培养物孵育约七天，每隔一天用hESC培养基喂养新出现的克隆。将含有转导细胞及已出现克隆的培养板置于解剖显微镜下，利用显微镜定位一个待挑选的克隆，并掀开培养板盖子以暴露孔位。无菌打开注射器，露出针头。在显微镜引导下，用针尖沿克隆边缘划线，将其从周围的饲养层细胞中分离。用针尖将克隆切割成若干大小相近的小块。如果组织块尚未脱落，可用针的侧面将其从培养板上舀起或刮下，直至其悬浮于液体中。现在使用P200移液器，在显微镜下找到已挑选的菌落，用移液器吸取悬浮的菌落，并将其转移至预先准备好的24孔板的一个孔中。确保完整转移整个菌落，避免同时吸走其他菌落或饲养细胞。将培养板置于37摄氏度、含5%二氧化碳和20%氧气的培养箱中培养，直至达到所需汇合度。选择体积较大、呈圆形且边缘发亮的克隆作为准备传代的克隆。吸除孔中的培养基，并用1毫升DPBS冲洗样品一次。然后移除DPBS，并加入500 µL的0.5 mM EDTA解离缓冲液。将样品在37°C、5% CO₂条件下孵育2分钟，直至细胞集落松解且细胞变圆。接着，从培养箱中取出培养板，吸除EDTA解离缓冲液。使用 P1000 移液器，加入一毫升人多能干细胞培养基，轻柔吹打直至细胞集落脱离并略微分散。将含细胞的一毫升培养基转移至新的六孔板中，该孔板内已预先加入一毫升新鲜的人多能干细胞培养基。将细胞置于 37 摄氏度、含 5% 二氧化碳和 20% 氧气的培养箱中培养。每天更换培养基以培养诱导多能干细胞，直至细胞长满培养孔并准备进行传代。同时，用7毫升在DPBS中配制的5微克/毫升纤连蛋白溶液包被一个10厘米培养皿，并在室温下孵育1小时。继续传代时，向该10厘米培养皿中加入7至10毫升人多能干细胞培养基，将六孔板中的细胞以1:1比例转移至培养皿中，并按照之前所示条件进行孵育。在再次传代细胞前，确认10厘米培养皿中的细胞已达到汇合状态。根据细胞形态和密度调整传代比例，通常使用1:10的比例，并记录每次传代的代数。最后，通过免疫荧光检测NANOG表达，以鉴定诱导性多能干细胞的干性标志物。使用特定的培养条件将细胞分化为外胚层、中胚层和内胚层谱系。通过检测PAX6、Brachyury和SOX17的染色情况以及NANOG表达的消失来评估分化潜能。扩增结束时，外周血单个核细胞（PBMCs）分化为成红细胞，表现为大小不一的明亮圆形细胞。缺乏这些细胞或出现死亡的培养物通常无法成功重编程。成功的转导和重编程表现为在经照射的饲养细胞上出现诱导性多能干细胞集落，并逐渐形成典型的干细胞形态。而未能获得类似干细胞形态的细胞则未被成功重编程。成功重编程的诱导性多能干细胞呈现出致密、圆形的克隆集落，边缘光滑且明亮。通过调整传代条件，可清除形态欠佳的亚克隆，例如出现自发分化或中心过于致密的克隆。部分挑选的克隆未能成功扩增。除了形态学特征外，诱导性多能干细胞还表现出干性，表现为干性标志物 NANOG 的表达。重编程获得的诱导性多能干细胞具有向外胚层、中胚层和内胚层分化的潜能。本方案提供了详细的检测节点，用于追踪和预测重编程的成功情况。为了进一步确认iPSC细胞系是否适合使用，应进行核型分析、基因分型以及常规支原体检测。本方案可利用已有的患者群体及其生物样本库中保存的血沉棕黄层进行重编程，从而拓展iPSC技术的应用范围。

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利用四转录因子、多西环素诱导型慢病毒转导系统重编程小鼠胚胎成纤维细胞生成诱导性多能干细胞

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本文介绍了一种利用附加体型重编程策略及组蛋白去乙酰化酶抑制剂，从外周血中生成人诱导性多能干细胞的实验方案。...

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利用非整合型附加体质粒从冻存的血沉棕黄层中生成诱导性多能干细胞

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使用仙台病毒和离心法从血细胞生成诱导性多能干细胞

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本方案描述了在完全化学成分明确的条件下，利用非整合型附加体质粒方法将原代羊水及羊膜间充质干细胞重编程为诱导性多能干细胞的过程。详细介绍了细胞的提取、培养、重编程以及通过严格方法对所获得的诱导性多能干细胞进行表征的实验步骤。...

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本文介绍一种具有临床相关性、高效且无需饲养层的重编程方法，利用编码重编程因子的修饰mRNA以及成熟的microRNA-367/302模拟物，将人原代成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞。文中还包括评估重编程效率、扩增单克隆iPSC集落以及验证多能性标志物TRA-1-60表达的方法。...

基于RNA的体细胞重编程将人原代成纤维细胞诱导为多能干细胞

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