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我们感谢德克萨斯大学西南医学中心的 Abbhimanyu Garg、Anil Agarwal 和 Jay Horton 提供 Agpat2-/- 小鼠。感谢智利天主教大学化学与药学院的 Andrea del Campo 和 Gonzalo Almarza 提供 Oxygraph 仪器的使用权限。本研究得到了智利天主教大学流式细胞术核心实验室和高级显微镜单元的支持。本研究由智利国家研发局（ANID）资助，项目编号包括 FONDECYT 1221146 和 1261504、FONDEQUIP 230130 以及 ACT 210039，均由 V.C. 获得。图 1A 使用 BioRender.com 制作。

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作者声明无利益冲突。

线粒体转移在脂肪生成中的生物学意义
我们的结果显示，尽管来自人和小鼠的外源性线粒体均可整合到分化中的前脂肪细胞的内源性线粒体网络中，但人为增加线粒体质量并不足以驱动棕色脂肪生成程序。这些发现表明，棕色脂肪生成过程中典型的线粒体扩增是细胞分化的结果，而非机制上的限制因素或主要驱动因素。这些观察结果与以往在多能干细胞中的研究形成对比，后者显示线粒体移植（MTA）可显著增强分化或诱导代谢重编程23,24。在本研究中，小鼠线粒体分离自肩胛间棕色脂肪组织（BAT）的基质血管组分（SVF），该组分此前已被鉴定为已定向的前脂肪细胞25。我们的数据表明，一旦细胞已定向于棕色脂肪细胞谱系，仅增加线粒体质量并不能显著改变其分化程序。
如果线粒体提供调控细胞核转录程序的关键逆行信号（例如 MOTS-c、Humanin、长链非编码 RNA、ROS 或三羧...

除了其主要的生物能量功能外，线粒体还在多种细胞过程中充当信号传导中心，包括细胞分化1,2,3,4。棕色脂肪组织（BAT）具有显著较高的线粒体质量，以支持其产热活性，凸显了其在全身能量平衡以及肥胖发病机制中的作用5。尽管线粒体质量受线粒体生物发生与线粒体自噬之间平衡的调控，但在棕色脂肪细胞分化过程中线粒体质量的增加究竟是脂肪生成所必需的功能性需求，还是仅仅是该过程的伴随现象，目前尚不明确。
细胞间生理性线粒体转移已有报道 体外 和 体内，在病理性条件下促进组织适应，包括与肥胖和胰岛素抵抗相关的脂肪组织功能障碍6,7此外，人工线粒体转移 体外 已被证明可增强受体细胞的呼吸能力8这些研究结果共同支持了线粒体转移能够改变细胞代谢功能，并可能在生物能量应激条件下促进组织适应的观点。9,10,11与通过激活细胞核和线粒体转录程序来刺激内源性线粒体生物发生的药理学或遗传学策略相比，线粒体转移可直接将细胞器递送至受体细胞，从而在不依赖转录调控的情况下快速改变线粒体数量12,13该方法对于校正线粒体疾病的缺陷至关重要，同时也能够在不产生药物或遗传学方法潜在脱靶效应的情况下研究线粒体功能。14.
在本研究中，我们探讨了通过外源性线粒体转移人为增加线粒体数量对分化中的棕色脂肪细胞的影响。该方法可直接评估线粒体数量对脂肪生成程序的作用。为实现这一目标，我们对最初为间充质干细胞开发的线粒体转移方案进行了改进15，并分别采用人肝细胞和小鼠前脂肪细胞作为线粒体供体。我们结合遗传工具与成像技术，建立了在分化中的小鼠细胞中追踪人源线粒体的方法，结果表明，无论来源如何，线粒体均能整合至内源性线粒体网络中，并在整个脂肪生成分化过程中持续存在。
为了模拟与线粒体质量减少相关的脂肪生成障碍，本研究采用了源自1-酰基甘油-3-磷酸-O-酰基转移酶2（AGPAT2）缺陷型（Agpat2-/-）小鼠的分化中棕色脂肪细胞。AGPAT2在脂肪组织中高表达，可催化甘油酯生物合成途径中磷脂酸的生成。AGPAT2缺陷在人类和小鼠中均会导致严重的脂肪营养不良，并伴随线粒体质量减少，从而损害白色和棕色脂肪细胞模型中的脂肪生成16,17,18。将外源性线粒体导入正在分化的前脂肪细胞后，脂滴大小分布仅有轻微改变，但并未提高成熟棕色脂肪细胞标志物的表达水平，也未能挽救Agpat2-/-前脂肪细胞的脂肪生成缺陷。

<table><tbody><tr><td>100 mm 培养皿</td><td>SPL生命科学</td><td>10101SPL</td><td></td></tr><tr><td>10x Tris/甘氨酸缓冲液</td><td>BioRad</td><td>1610734</td><td></td></tr><tr><td>12 mm 玻璃盖玻片</td><td>Marienfeld</td><td>111520</td><td></td></tr><tr><td>12孔板</td><td>SPL Life Science</td><td>30012SPL</td><td></td></tr><tr><td>16% 甲醛水溶液</td><td>Invitrogen</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>18 mm 玻璃盖玻片</td><td>HART</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>24孔板</td><td>SPL Life Science</td><td>30024SPL</td><td></td></tr><tr><td>3,3&amp;prime;三碘甲腺原氨酸钠盐（T3）</td><td>Sigma</td><td>T6397</td><td></td></tr><tr><td>3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）</td><td>Calbiochem</td><td>410957</td><td></td></tr><tr><td>30% 丙烯酰胺/双丙烯酰胺溶液，37.5:1</td><td>伯乐（BioRad）</td><td>1610158</td><td></td></tr><tr><td>35 mm 培养皿</td><td>SPL Life Science</td><td>20035SPL</td><td></td></tr><tr><td>6孔板</td><td>SPL Life Science</td><td>30006SPL</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 培养皿</td><td>SPL Life Science</td><td>20060SPL</td><td>用于原代前脂肪细胞及DNA/qPCR实验；未提供供应商/目录号</td></tr><tr><td>AccuRuler RGB Plus 预染蛋白标准品</td><td>雌激素</td><td>02102-250</td><td></td></tr><tr><td>ACK裂解缓冲液</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Actrapid 100 UI/mL（胰岛素）</td><td>诺和诺德</td><td>A10AB01</td><td></td></tr><tr><td>ADP</td><td>默克</td><td>117105</td><td></td></tr><tr><td>琼脂糖</td><td>FERMELO BIOTEC</td><td>FER00AL200G</td><td>用于RNA完整性验证；未提供供应商/目录号</td></tr><tr><td>过硫酸铵</td><td>伯乐（BioRad）</td><td>1610700</td><td></td></tr><tr><td>抗兔 IgG，HRP 标记抗体</td><td>细胞信号传导</td><td>7074</td><td></td></tr><tr><td>抗大鼠IgG，HRP标记抗体</td><td>细胞信号传导</td><td>7077</td><td></td></tr><tr><td>抗生素-抗真菌剂</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Axio Observer 倒置显微镜机身</td><td>卡尔·蔡司</td><td>431007-9901-000</td><td>来自补充方法</td></tr><tr><td>BCA 蛋白检测试剂盒</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>D49328</td><td></td></tr><tr><td>BD流式细胞仪设置与追踪微球</td><td>BD 生物科学</td><td>-</td><td>来自补充方法；未提供目录编号</td></tr><tr><td>BD FACSDiva 软件 v8.0.3</td><td>BD 生物科学</td><td>-</td><td>来自补充方法</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa X-20 细胞分析仪</td><td>BD 生物科学</td><td>-</td><td>现有条目已标准化以匹配补充文件</td></tr><tr><td>BioRender</td><td>BioRender</td><td>-</td><td>用于创建图1的工作流程</td></tr><tr><td>印迹级封闭剂</td><td>伯乐（BioRad）</td><td>170-6404</td><td></td></tr><tr><td>BODIPY 493/503</td><td>Invitrogen</td><td>D3922</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>Sigma</td><td>A1470</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Calbiochem</td><td>208291</td><td></td></tr><tr><td>cDNA反转录试剂盒</td><td>Invitrogen</td><td>4374966</td><td></td></tr><tr><td>细胞滤网 100 &amp;mu;米，尼龙</td><td>Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>细胞滤网 40 &amp;mu;米，尼龙</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>II型胶原酶</td><td>Gibco</td><td>17101-015</td><td></td></tr><tr><td>地塞米松</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>DMEM粉末，高糖，含丙酮酸钠</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>12800017</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12，无酚红</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>21041025</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12，粉末</td><td>Gibco</td><td>12500062</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D8418</td><td>诱导培养基溶剂；未提供供应商/目录信息</td></tr><tr><td>EMBed-812 包埋试剂盒（Epon）</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>14120</td><td></td></tr><tr><td>乙醇，绝对</td><td>默克</td><td>100983</td><td></td></tr><tr><td>乙二醇双(&amp;beta;-氨基乙基醚-N,N,N&amp;prime;，N&amp;prime;四乙酸四钠盐（EGTA）</td><td>默克</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>FAST SYBR预混液</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>4385612</td><td></td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Sigma</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Capricorn Scientific</td><td>BS-16A</td><td></td></tr><tr><td>Floreada.io</td><td>Floreada.io</td><td>-</td><td>流式细胞术分析软件</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>7984-25</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH 抗体</td><td>圣克鲁斯</td><td>sc-32233</td><td></td></tr><tr><td>葡萄糖</td><td>Gibco</td><td>15023-021</td><td></td></tr><tr><td>谷氨酸</td><td>Sigma</td><td>G1626</td><td></td></tr><tr><td>25% 戊二醛水溶液</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>16210</td><td></td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠 IgG（H+L）二抗</td><td>Invitrogen</td><td>62-6520</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism v10.6.1</td><td>GraphPad Software</td><td>-</td><td>统计学/对数回归分析软件</td></tr><tr><td>Halt 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液 100X</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>78442</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>生物工业公司</td><td>41-122-100</td><td></td></tr><tr><td>组蛋白 H3 (1G1)</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-517576</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Life Technologies</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ v1.54s</td><td>美国国立卫生研究院</td><td>-</td><td>脂滴图像分析软件</td></tr><tr><td>免疫印迹PVDF膜</td><td>BioRad</td><td>1620177</td><td></td></tr><tr><td>吲哚美辛</td><td>Sigma</td><td>I7378</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素注射器</td><td>蔓越莓</td><td>AAJECIN3</td><td>用于细胞匀浆；未提供供应商/目录编号</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Calbiochem</td><td>529552</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Calbiochem</td><td>529568</td><td></td></tr><tr><td>KHCO₃</td><td>Sigma</td><td>60339</td><td></td></tr><tr><td>LAMP-1 抗体</td><td>Abcam</td><td>ab25245</td><td></td></tr><tr><td>上样缓冲液（含还原剂，红色）</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>39000</td><td></td></tr><tr><td>苹果酸</td><td>Sigma</td><td>M1000</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Calbiochem</td><td>208291</td><td>线粒体检测溶液组分；未提供供应商/目录信息</td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>微量紫外-可见分光光度计</td><td>NanoDrop</td><td>ND-1000</td><td>用于DNA/RNA定量；未提供供应商/目录号</td></tr><tr><td>超纯水（MilliQ）无菌</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>MitoTracker Deep Red FM</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>M22426</td><td></td></tr><tr><td>MitoTracker Green</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>M7514</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>默克</td><td>1064041000</td><td></td></tr><tr><td>尼康C2plus共聚焦激光扫描显微镜</td><td>尼康</td><td>C2-SCHJ-1</td><td>来自补充方法</td></tr><tr><td>尼康Ti2倒置显微镜</td><td>尼康</td><td>MEA54010</td><td>来自补充方法</td></tr><tr><td>NIS-Elements AR 软件 v5.11.03</td><td>尼康</td><td>MQS31000</td><td>来自补充方法</td></tr><tr><td>无核酸酶水</td><td>温克勒</td><td>BM-0140</td><td></td></tr><tr><td>光学96孔qPCR板</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>4346907</td><td>用于 qPCR；未提供供应商/目录号</td></tr><tr><td>光学粘合膜</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>4311971</td><td>用于 qPCR 板封膜；未提供供应商/目录号</td></tr><tr><td>轨道摇床</td><td>实验室线</td><td>4630-1</td><td>封闭/通透化过程中使用；未提供供应商/目录编号</td></tr><tr><td>四氧化锇</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>19100</td><td></td></tr><tr><td>Oxygraph+</td><td>Hansatech</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10X 分子生物学</td><td>温克勒</td><td>BM-1340</td><td></td></tr><tr><td>Plan Apo 60x 油镜，数值孔径 1.4</td><td>尼康</td><td>MRD01605</td><td>来自补充方法</td></tr><tr><td>Plan-Apochromat 10x/0.45 M27 空气物镜</td><td>卡尔·蔡司</td><td>420640-9900-000</td><td>来自补充方法</td></tr><tr><td>R 软件 v4.5.2</td><td>R 基金会</td><td>-</td><td>用于数据分析</td></tr><tr><td>实时荧光定量PCR仪</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>Quantum Studio 3</td><td>用于逆转录和qPCR；未提供供应商/目录号</td></tr><tr><td>雷诺氏染色（3%柠檬酸铅）</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>22410-1</td><td></td></tr><tr><td>RIPA裂解缓冲液</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>罗格列酮</td><td>默克</td><td>557366</td><td></td></tr><tr><td>RStudio</td><td>正位</td><td>-</td><td>用于 R 分析；论文及补充材料引用了 RStudio</td></tr><tr><td>皂苷</td><td>Sigma</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>碳酸氢钠</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>二甲胂酸钠</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>12300</td><td></td></tr><tr><td>十二烷基硫酸钠</td><td>BioRad</td><td>1610301</td><td></td></tr><tr><td>氢氧化钠（NaOH）</td><td>默克</td><td>B0547933</td><td>T3溶剂；未提供供应商/目录信息</td></tr><tr><td>蔗糖</td><td>默克</td><td>573113</td><td>线粒体分离缓冲液组分；未提供供应商/目录编号</td></tr><tr><td>四甲基乙二胺（TEMED）</td><td>伯乐（BioRad）</td><td>1610800</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific F200C 透射电子显微镜</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>TOMM20 抗体</td><td>细胞信号传导</td><td>42406</td><td></td></tr><tr><td>Tris缓冲盐溶液（TBS-10X）</td><td>细胞信号传导</td><td>12498</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol试剂</td><td>Invitrogen</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白酶-EDTA（0.25%）</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>结核菌素注射器</td><td>NIPRO</td><td>JD-01T2516/IB</td><td>用于细胞破碎；未提供供应商/目录编号</td></tr><tr><td>TURBO DNA-free 试剂盒</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>AM1907</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20，分子生物学级</td><td>Promega</td><td>H5152</td><td></td></tr><tr><td>Ultracut R</td><td>Leica</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>醋酸铀酰</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>VAP-A 抗体</td><td>圣克鲁斯</td><td>sc-293278</td><td></td></tr><tr><td>Vinculin 抗体</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-73614</td><td></td></tr><tr><td>Westar Supernova</td><td>Cyanagen</td><td>XLS3</td><td></td></tr><tr><td>配备Airyscan检测器的蔡司LSM 880共聚焦激光扫描显微镜</td><td>卡尔·蔡司</td><td>421102-9010-000</td><td></td></tr><tr><td>ZEN 软件</td><td>卡尔·蔡司</td><td>-</td><td>Airyscan/去卷积软件</td></tr><tr><td>基因</td><td>正向（5&amp;rsquo;&amp;rarr;3&amp;rsquo;)</td><td>反向（5&amp;rsquo;&amp;rarr;3&amp;rsquo;)</td><td></td></tr><tr><td>H-mtDNA</td><td>CACTTTCCACACAGACATCA</td><td>CACTTTCCACACAGACATCA</td><td></td></tr><tr><td>PPARγ</td><td>CACAATGCCATCAGGTTTGG</td><td>GCTGGTCGATATCACTGGAGATC</td><td></td></tr><tr><td>PPAR&amp;alpha;</td><td>ACAAGGCCTCAGGGTACCA</td><td>GCCGAAAGAAGCCCTTACAG</td><td></td></tr><tr><td>PCG&amp;alpha;-1</td><td>AACCACACCCACAGGATC</td><td>TCTTCGCTTTATTGCTCCATGA</td><td></td></tr><tr><td>UCP1</td><td>GAGGTGTGGCAGTGTTCATTG</td><td>GGCTTGCATTCTGACCTTCA</td><td></td></tr><tr><td>PRDM16</td><td>GACATTCCAATCCCAGA</td><td>CACCTCTGTATCCGTCAGCA</td><td></td></tr><tr><td>PLIN1</td><td>GGGCTGTCTGAGACTGAGGT</td><td>GCAGAACTCTCTGGAGCACG</td><td></td></tr><tr><td>FATP4</td><td>ACCCAAAGCTGCCATTGTG</td><td>GCATGCGGAATCCAAGTACCA</td><td></td></tr><tr><td>36b4</td><td>CACTGGTCTAGGACCCGAGAAG</td><td>GGTGCCTCTGGAGATTTTCG</td><td></td></tr></tbody></table>

外源性线粒体转移至分化中的棕色脂肪细胞及agpat2缺陷型前脂肪细胞

Exogenous Mitochondrial Transfer in Differentiating Brown Adipocytes and AGPAT2-Deficient Preadipocytes

线粒体是关键的信号枢纽；然而，线粒体质量扩增是否在机制上为细胞分化所必需，目前仍是一个未解的问题。AGPAT2 催化溶血磷脂酸转化为磷脂酸，其缺乏会导致脂肪组织缺失以及与线粒体质量减少相关的脂肪生成障碍。通过将外源性线粒体转入正在分化的棕色脂肪细胞，评估了线粒体质量扩增对脂肪生成的影响。同时研究了线粒体转移是否能够挽救 AGPAT2 缺陷细胞中受损的脂肪生成过程。人源和鼠源线粒体被成功转入并整合到正在分化的鼠前脂肪细胞内源性线粒体网络中，并在整个棕色脂肪生成过程中持续存在。脂肪细胞分化是保留转入线粒体的前提条件。线粒体转移并未改变成熟棕色脂肪细胞分子标志物的表达水平或脂滴含量，尽管其以物种依赖的方式影响了脂滴大小的相对分布。在 Agpat2-/- 前脂肪细胞中，线粒体转移未能恢复脂肪生成，表明在此模型中，仅线粒体质量的扩增不足以逆转导致脂肪营养不良的机制。这些结果表明，尽管外源性的人源和鼠源线粒体可以整合到正在分化的脂肪细胞的线粒体网络中，但它们并不直接影响脂肪生成程序。

线粒体提取及其结构与呼吸完整性
为了评估线粒体质量增加对棕色脂肪生成的影响，在未分化的前脂肪细胞中进行了线粒体转移实验（MTA）（图1A）。线粒体来源于原代小鼠前脂肪细胞（mMito）和人肝源性HepG2细胞系（hMito）。Western印迹分析显示，与全细胞提取物相比，两种线粒体制剂均高度富集线粒体标志物TOMM20（图1B）。对分离组分进行的透射电子显微镜（TEM）分析显示出结构清晰的双层膜结构，并保留了完整的嵴，符合完整线粒体的形态特征（图1C）。氧消耗测定结果显示，将线粒体制剂加入培养基后，氧气浓度曲线斜率呈负向显著下降，表明耗氧量明显增加；在补充ADP后，耗氧进一步升高，证实hMito和mMito制剂均保持了偶联呼吸功能（图1D）。
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来源于人类和小鼠的外源性线粒体可被正在分化的前脂肪细胞摄取，并可通过成像和遗传学工具在脂肪生成分化过程中进行追踪。尽管这些线粒体与内源性线粒体网络发生物理相互作用，但它们并不增加与成熟棕色脂肪细胞相关标志物的表达水平。

外源性线粒体转移至分化中的棕色脂肪细胞及AGPAT2缺陷型前脂肪细胞

线粒体是关键的信号枢纽；然而，线粒体质量扩增是否在机制上为细胞分化所必需，仍有待明确。

exogenous-mitochondrial-transfer-differentiating-brown-adipocytes

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

外源线粒体转移在区分棕色脂肪细胞和缺乏AGPAT2的前脂肪细胞中的应用

可诱导的遗传谱系示踪（GIFM）可实现对细胞的精细时空控制下的标记与追踪 体内...

一种用于遗传诱导命运图谱绘制的实用方法：标记与追踪细胞的可视化指南 体内

可视化 体内 RNA 运输通过将荧光标记的 RNA 转录本显微注射到 非洲爪蟾...

在 Xenopus 卵母细胞中可视化 RNA 定位

本文报道了在人类细胞中检测内源性和外源性着丝粒-动粒蛋白的实验方案，并通过间接免疫荧光染色方法（采用固定剂如多聚甲醛、丙酮或甲醇进行固定）对这些蛋白在着丝粒-动粒上的水平进行定量分析。...

内源性和外源性着丝粒-动粒蛋白的免疫荧光分析

要深入理解线粒体功能的调控机制，必须分析线粒体结构与功能之间的关系。本文描述并演示了在活体和固定处理的黑腹果蝇（Drosophila）卵巢中研究线粒体结构与功能的特定方法。...

在 Drosophila 卵巢中研究线粒体结构与功能

线粒体可利用其内膜上的电化学势能（ΔΨm）来摄取钙离子（Ca2+），从而调控细胞质内的Ca2+信号。本文介绍一种利用荧光染料和共聚焦显微镜在活细胞中同时检测线粒体Ca2+摄取和ΔΨm的方法。...

活细胞中线粒体钙与线粒体膜电位的荧光显微镜同步检测

本文介绍了一种从同一样本中同时分离 RNA、DNA...

Caenorhabditis elegans 中的核酸与蛋白质联合提取

本报告描述了一种从新生小鼠中同时分离原代棕色和白色前脂肪细胞的实验方案。分离得到的细胞可在体外培养，并可诱导其分化为完全成熟的白色和棕色脂肪细胞。该方法可用于在培养条件下对原代脂肪细胞进行遗传学、分子水平及功能特性分析。...

从新生小鼠中分离与分化原代白色和棕色前脂肪细胞

在本研究中，我们描述了一种改进的实验方案，通过使用重组的perfringolysin...

测量重组Perfringolysin O透化细胞中的线粒体底物通量

本方案描述了从小鼠皮下脂肪中分离前脂肪细胞、将其分化为成熟脂肪细胞以及诱导胰岛素抵抗的方法。通过蛋白质印迹法检测胰岛素信号通路中相关蛋白的磷酸化/活化水平，以评估胰岛素作用。该方法可直接测定原代脂肪细胞中的胰岛素抵抗/敏感性。...

原代培养中分化的鼠脂肪细胞：胰岛素抵抗模型

前脂肪细胞从小鼠肩胛间棕色脂肪组织的基质血管组分中分离获得，并分化为能够积累脂滴、表达分子标志物并呈现成熟棕色脂肪细胞线粒体形态的细胞。这些细胞进一步通过免疫荧光和透射电子显微镜进行分析。...

从新生小鼠肩胛间脂肪组织基质血管组分中分化与成像棕色脂肪细胞

Pontificia Universidad Católica de Chile.  人类和小鼠起源的外源线粒体可以通过分化前脂肪细胞内化，并通过影像和遗传工具追踪脂肪生成分化过程。虽然这些线粒体与内源性线粒体网络物理相互作用，但它们不会增加与成熟棕色脂肪细胞相关的标志物表达。

外源性线粒体转移至分化中的棕色脂肪细胞及AGPAT2缺陷型前脂肪细胞

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