2008年7月30日
光学显微镜是细胞生物学家的基本工具,研究者应充分理解其工作原理、针对不同应用所需的校准方法,以及为获得最大成像能力和分辨率所必需的维护措施。本文详细描述了显微镜的各个组成部分。
光学显微镜是生物医学研究中的重要工具。其光学组件能够实现远高于肉眼观察的图像分辨率。通过将显微技术与数字图像处理相结合,研究人员可以增强图像的可见性,并进行精确的定量测量。
本视频将为您详细介绍显微镜的主要组件及其功能。大家好,我是来自圣安东尼奥德克萨斯大学健康科学中心核心光学成像中心的 Victoria Sanon Frolic。今天我将为您展示您日常使用的显微镜的主要部件及其基本功能。
接下来让我们来熟悉一下您的显微镜。在使用显微镜之前,最好先了解其各个组成部分及其功能。这是一台尼康Eclipse TI型倒置复合光学显微镜,配备了透射光和落射荧光显微镜功能。
显微镜轴线方向称为Z轴,与之垂直的方向称为X轴和Y轴。首先,我们将检查目镜筒、容纳物镜的物镜转换器以及载物台。这些是显微镜主要的成像组件。
目镜是观察者与显微镜之间的接口。通过握住双目光学系统的目镜筒基部,可将其相互靠近或推远,从而调节瞳距。这能使您双眼舒适地进行观察。
同时,现在可以独立调节每个目镜的焦距。目镜的放大倍数标记在镜筒上。相机通常被安装在显微镜上用于图像采集。
该显微镜使用C型接口适配器将CCD相机连接至显微镜主体的侧端口。通过旋转显微镜上的旋钮,使棱镜进入光路,从而将成像光束从目镜转向并导向安装在相机端口的相机。不同的物镜(决定大部分放大倍数和分辨率)安装在可旋转的物镜转换器上。
每个物镜上都标有技术参数,例如放大倍数、数值孔径、所需浸没介质(如油、甘油或空气)、盖玻片厚度,以及其他特殊特性,例如照明模式、目镜和物镜转盘未聚焦或无限远投射的光路设计。镜筒内含一个正焦透镜,可将成像光线聚焦至目镜或相机。在向您展示了显微镜的成像组件之后,接下来让我们来看看帮助我们聚焦图像并对透射光进行调节的组件。
接下来,我们将检查载物台,它是用于固定载玻片的机械装置。通过旋转旋钮,可以在 x 和 y 方向上调节样本的位置。在倒置显微镜结构中,载物台是固定的,通过显微镜主体上的粗调和微调焦旋钮沿 Z 轴上下移动物镜来实现样本的聚焦。
现在我们将检查光学显微镜的透射照明组件,这些组件为观察样本提供光源。首先,我们有灯和灯室,它们提供用于照亮样本的光线。在光学显微镜中,灯通常是一种低电压卤素灯泡,内含钨丝,可通过调节来控制光强。可在光源后方设置快门,以控制照明持续时间。
光源后紧接的是视场光阑,用于调节被照明标本的区域或视场范围。接下来是称为聚光镜的组件,其主要功能是将明亮且均匀的光线聚焦到标本上。位于聚光镜底部的孔径光阑(虹膜光阑)则用于控制照射在标本上的聚光镜照明锥的角度。
调节此光圈可控制照射到样品的光锥的大小和数值孔径,从而实现正确的照明、对比度和景深。聚光镜光圈的光学调节可使物镜前透镜元件得到适当照明。理想情况下,应针对每个物镜进行此项调节,以充分发挥镜头的性能。对于落射荧光照明,光源通常为氙弧灯或汞弧灯。
在我们的显微镜上,采用的是基于汞的弧光灯作为光源,应小心操作,因为它们可能会发生爆裂。如果操作不当,可能导致危险。安装灯泡时务必佩戴手套,因为指纹和杂质可能形成热点,导致灯泡破裂。强烈建议不要使弧光灯运行超过其额定的使用小时数。
荧光光路包含一个视场光阑和一个孔径光阑,类似于透射光光路。在经过这些光阑后,光线将通过一组滤光片,这些滤光片用于选择光的波长范围,并将照明光引导至物镜,从而在落射照明光路中照射到样本上。在此光路中,物镜同时起到聚光镜和物镜的作用。
我们刚刚向您展示了光学显微镜的主要组成部分。首先,我向您介绍了显微镜的成像部件,即目镜、物镜和CCD相机。接着,我们回顾了载物台调节装置、聚焦调节旋钮以及聚光镜。
以上就是全部内容。感谢观看,祝您的显微镜实验顺利。
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光学显微镜是生物医学研究中的基本仪器,与肉眼相比可提供更高的图像分辨率。本文详细介绍了光学显微镜的主要组成部分及其功能,这些内容对于该领域的研究人员至关重要。
了解光学显微镜的组成部分是早期发现工作流程中可靠细胞成像的基础。正确的对准和维护可确保图像质量的可重复性,支持靶点验证和检测方法开发。这些知识有助于减少技术变异性,并提高临床前模型的预测可信度。
光学显微镜通过假设验证和通路阐明,支持发现生物学研究,从而实现早期生物学风险的降低。