Name: MODS的方法和诊断结核病耐药结核病 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 6 s
Description: 学习显微镜观察药敏试验（MODS）方法，用于快速、低成本诊断结核病和耐多药结核病。本视频详细讲解液体培养技术的操作步骤、生物安全要求及质量控制措施，适用于资源有限地区的高性能检测需求。

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我们感谢 Sean Fitzwater 和 Carmen Giannina Luna Colombo 提供结核病生长延时视频片段。&nbsp; 感谢 Marty Roper 在编辑和共同撰写用户指南过程中提供的全面而出色的反馈意见，本实验方案主要直接取自该用户指南。&nbsp; 本视频的制作由美国国立卫生研究院（NIH）/福格蒂国际中心（Fogarty International Center）资助，网址为 <a href="http://www.fic.nih.gov/">http://www.fic.nih.gov/</a>。David A.J. Moore 以惠康信托（Wellcome Trust）热带医学临床研究员及伦敦帝国理工学院传染病学 Reader 的身份做出贡献（资助编号：078067/Z/05）。&nbsp; Mark F. Brady 以 NIH/福格蒂国际中心研究学者的身份做出贡献。

<ol>
<li>配制储备液 <ol>
<li>磷酸盐缓冲液储备液 <ol>
<li>将950 ml 磷酸氢二钠溶液（9.47 g 磷酸氢二钠溶于1000 ml 蒸馏水中）与950 ml 磷酸二氢钾溶液（9.07 g 磷酸二氢钾溶于1000 ml 蒸馏水中）混合，搅拌；每种溶液各保留50 ml，以备必要时用于调节pH </li>
<li>调节pH至6.8 ± 0.2：加入磷酸氢二钠溶液以提高pH；加入磷酸二氢钾溶液以降低pH </li>
<li>在121–124°C下高压灭菌15分钟以达到灭菌效果 </li>
<li>在培养皿中的营养琼脂培养基上接种100μl磷酸盐缓冲液样品，于37°C培养48小时，以确认无菌性 </li>
<li>2-8°C 冰箱中保存，可存放长达一个月 注意每个痰液样本需要10 ml磷酸盐缓冲液 </li>
</ol></li>
<li>去污储备液 <ol>
<li>将等体积的氢氧化钠溶液（8.0 g 氢氧化钠溶于 200 ml 无菌蒸馏水）与柠檬酸钠溶液（5.8 g 柠檬酸钠溶于 200 ml 无菌蒸馏水）混合 </li>
<li>混合并在121–124°C下高压灭菌15分钟 </li>
<li>2-8°C 冰箱中保存，可存放长达一个月 注意每个痰液样本需要 2ml 去污染储备液 </li>
</ol></li>
<li>培养基储备液 <ol>
<li>向900 ml无菌蒸馏水中加入3.1 ml甘油、1.25 g酪蛋白胨和5.9 g 7H9培养基粉末；持续搅拌至完全溶解 </li>
<li>121–124°C 下高压灭菌 15 分钟 </li>
<li>将无菌培养基冷却后，分装至无菌的16×100 mm玻璃试管中，每管4.5 ml，用于样品制备；另分装每管10.8 ml，用于抗生素溶液和内对照的制备。 </li>
<li>37°C 下孵育 48 小时以验证无菌性（无浑浊） </li>
<li>2-8°C下避光保存，瓶盖需拧紧，可保存一个月 注意每个痰液样本需要一支含有4.5 ml 7H9培养基的试管 </li>
</ol></li>
<li>抗生素储备液 <ol>
<li>A. 异烟肼储备液（8 mg/ml） <ol>
<li>将20 mg异烟肼完全溶解于2.5 ml无菌蒸馏水中 </li>
<li>使用0.2 μm针头滤器过滤水相溶剂 </li>
<li>置于无菌微量离心管中，每管20μl，于-20°C保存，可存放长达6个月 注意：每个储存的20μl等分试样足以用于多达100个样品（包括损耗） </li>
</ol></li>
<li>B. 利福平储备液（8 mg/ml） </li>
</ol><ol>
<li>将20 mg利福平完全溶解于1.25 ml DMSO中 </li>
<li>加入1.25 ml无菌蒸馏水并混匀 </li>
<li>使用有机溶剂专用的0.2 μm注射器滤器过滤 </li>
<li>在无菌微量离心管中以20μl分装，于-20°C保存，可稳定存放长达6个月 注意：每个储存的20μl等分试样足以用于多达100个样品（包括损耗） </li>
</ol></li>
</ol></li>
<li>配制工作液 <ol>
<li>去污工作液 <ol>
<li>每20 ml所需去污溶液中溶解0.1 g NALC晶体 注意每个样本需要 2ml 去污溶液 注意：将未使用的 NaOH-NALC 去污染溶液在 24 小时后弃置，因为 NALC 的黏液溶解活性会随时间下降 </li>
</ol></li>
<li>培养基工作液 <ol>
<li>设置： <ol>
<li>每个痰样本处理所需的一管7H9培养基，以及每块平板额外增加的一管（用于阴性对照孔） </li>
<li>用于阳性对照的2管7H9培养基（若使用单耐药菌株则为3管） </li>
<li>用于抗生素溶液配制的1-2管含10.8 ml 7H9培养基的试管 </li>
</ol></li>
<li>向每个样品管中的4.5 ml 7H9培养基加入0.5 ml OADC </li>
<li>向含有10.8 ml 7H9的试管中加入1.2 ml OADC </li>
<li>留出2管含5 ml 7H9-OADC的试管用于阳性对照，另准备1管或多管含12 ml 7H9-OADC的试管用于抗生素溶液配制（这些试管无需添加PANTA）</li>
<li>重悬PANTA，并向每个样本管及阴性对照管中加入0.1 ml（7H9-OADC-PANTA：总体积=5.1 ml） 注意含PANTA的完全培养基7H9-OADC-PANTA用于痰液样本和阴性对照；阳性对照及抗生素溶液配制使用不含PANTA的7H9-OADC </li>
</ol></li>
<li>抗生素工作溶液 <ol>
<li>1. 在未使用的24孔板中配制抗生素工作液的步骤见图1 注意: 准确的药敏结果取决于最终的抗生素浓度。以下步骤适用于配备微量移液器的实验室。若无微量移液器，可使用结核菌素注射器，并采用 modsperu.org 网站用户指南附录3中所述的不同稀释系列。 注意: 不要重新冷冻或重复使用抗生素工作液或储存液，以免药物活性丧失。 在处理当天结束时丢弃所有未使用的抗生素溶液 图1. 制备抗生素工作溶液（来自 modsperu.org 用户指南） </li>
</ol></li>
</ol></li>
<li>痰液样本与平板制备<ol>
<li>去污<ol>
<li>将2 ml痰液样本加入15 ml离心管中（若不足2 ml，用磷酸盐缓冲液补足至2 ml；若超过2 ml，仅取2 ml使用）</li>
<li>加入2 ml NaOH-NALC溶液</li>
<li>盖紧管盖，涡旋振荡20秒；倒置试管，确保NaOH-NALC溶液接触试管内壁及管盖的整个内表面 </li>
<li>静置至少15分钟——若样品黏度较高，可适当延长几分钟。为避免过度处理， 不应超过20分钟</li>
<li>用磷酸缓冲液（pH 6.8）将试管补至14 ml，以中和碱性并终止去污过程，轻轻翻转试管4次充分混匀</li>
<li>在3000 g下离心15分钟（有关达到3000 g所需的每分钟转数计算公式，请参见modsperu.org用户指南中的附录2）</li>
<li>小心地将上清液倒入含有10%次氯酸钠或其他合适消毒剂的液体废液容器中，并保留沉淀物</li>
</ol></li>
<li>最终样品悬液的制备与备份<ol>
<li>使用含 5.1 ml 的 7H9-OADC-PANTA 培养基，用巴斯德吸管将离心管中的样品沉淀重悬于总体积为 2 ml 的培养基中，充分混匀</li>
<li>移取1 ml样品悬液，置于微量离心管中，于2–8°C保存作为备份</li>
<li>将第二份1 ml样品悬液加入含有剩余7H9-OADC-PANTA的离心管中，充分混匀。此即为可用于涂布的最终样品溶液。</li>
</ol></li>
<li>将样品悬液加入24孔板<ol>
<li>将900μl最终样品悬液分别加入24孔板中一列的4个孔内</li>
<li>用额外的样本重复上述步骤，直至除第3列外的所有列均被填满（或所有样本均完成点样）</li>
<li>加入900μl 7H9-OADC培养基 无样本 每个样本板第3列的4个孔中（阴性内对照）</li>
</ol></li>
<li>向样品中添加抗生素<ol>
<li>使用多通道移液器，小心吸取7H9-OADC和抗生素工作溶液（抗生素稀释板第2列——见图1）中的液体，将4个吸头各填充100μl。</li>
<li>将100μl等分试样加入含900μl样品溶液的第1列孔中 不接触培养板或样品</li>
<li>重复上述步骤，直至所有孔均加入额外的100μl培养基（无药物孔）或抗生素溶液（包括作为阴性对照的第3列）</li>
<li>用盖子盖好培养板，放入可密封的聚乙烯（Ziplock）袋中并封口从此时起，袋子不再被打开)</li>
<li>在37°C（CO₂）条件下孵育2 富集不是必需的</li>
</ol></li>
</ol></li>
<li>&nbsp;质量控制 <ol>
<li>每次实验均在每块板上设置阴性对照。&nbsp; 阴性对照列中任意孔出现任何生长迹象均表明存在交叉污染，因此必须弃用整块板，并对样本重新接种。 </li>
<li>阳性对照在当天结束前于单独的培养板上进行.&nbsp; 一列中运行一种完全药物敏感菌株，另一列中运行一种对异烟肼和利福平耐药的菌株。&nbsp; 如果对使用耐多药（MDR）菌株存在顾虑，可用异烟肼（INH）单耐药菌株和利福平（RIF）单耐药菌株分别替代敏感菌株和MDR菌株进行实验。&nbsp; 所有阳性对照在无药物的孔中均应有生长，以证明培养基支持微生物生长。&nbsp; 为验证药物浓度的准确性，敏感菌株不应在异烟肼（INH）或利福平（RIF）孔中生长，而耐多药（MDR）菌株则应在INH和RIF孔中均能生长。 </li>
</ol></li>
<li>酶标仪读数 <ol>
<li>以铺板当天为“第0天”，从第5天开始读板；若第5天结果为阴性，则每天（或根据工作量隔天）读板一次，持续至第14天，随后在第15至21天期间每2-3天读板一次。&nbsp; 使用10倍物镜在倒置光学显微镜下观察培养板 </li>
<li>A 阳性培养 是指存在两个或更多个菌落形成单位（&gt;2 CFU）在不含药物的两个孔中。&nbsp; 早期分枝杆菌生长形态呈小型弯曲的逗号状或螺旋状（第5-9天）。&nbsp; 菌落形成通常会发展为“索状”或“缠结状”结构（参见 modsperu.org 的图像库） </li>
<li>在培养物于两个无药孔中呈阳性当天，应读取含药孔的结果。&nbsp; 药物存在下出现任何生长均表明对该药物具有耐药性。 注意：如果对含药物的孔进行读数 &gt;在无药物孔中观察到阳性培养1周后，此现象可能并不代表耐药性，因为偶尔会出现突破性生长 </li>
<li>在第21天未呈阳性的样本被视为阴性培养物 </li>
<li>孔内出现浑浊是由于污染菌过度生长所致，而分枝杆菌的生长不会引起浑浊 </li>
<li>完成21天培养后，可弃置培养物。&nbsp; 培养物保持在密封袋中，放入高压灭菌袋后，在121-124°C下高压灭菌45-60分钟 </li>
</ol></li>
</ol>
&nbsp;

<ol><li>Arias, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+the+microscopic-observation+drug-susceptibility+assay+for+detection+of+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis.</a> Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).</li>
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<li>Vargas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+sputum-scarce+HIV-associated+pulmonary+tuberculosis+in+Lima%2C+Peru%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru.</a> Lancet. 365, 150-150 (2005).</li>
</ol>

MODS 检测主要针对资源有限的环境。&nbsp; 这是首次将结核分枝杆菌及耐多药结核分枝杆菌的快速液体培养检测能力引入资源有限地区，每个检测的成本不足 3 美元。&nbsp; MODS 是一种非专有的、可迭代的方法，MODS 社区始终关注其他实验室所实现的改进。
人们普遍关注结核病液体培养基培养的生物安全性，因为液体可能发生溢出或形成气溶胶。&nbsp; 我们认为，与所有涉及间接药物敏感性试验的方法相比，MODS 检测具有更高的生物安全性，因为间接药物敏感性试验需要操作高浓度的分枝杆菌溶液，存在溢出和气溶胶产生的相关风险；而 MODS 仅需将痰标本接种到培养板中，随后将培养板密封于塑料袋内，此后不再打开。&nbsp; 韩国的数据（Kim 2007）支持这一观点，结果显示，仅进行痰标本接种但不进行药物敏感性试验的实验室工作人员，其职业暴露风险并不高于从事痰涂片显微镜检查的工作人员；相比之下，进行药物敏感性试验的人员患结核病的职业风险显著更高。
我们强烈建议，实验室工作人员在未采取适当防护措施的情况下，不得进行任何这些操作。...

<table><tbody><tr><td>冰箱/冷冻柜</td><td>设备</td><td></td><td></td><td>用于储存预配制的培养基和抗生素储备液</td></tr><tr><td>涡旋振荡器</td><td>设备</td><td></td><td></td><td>辅助痰液去污染</td></tr><tr><td>离心机</td><td>设备</td><td></td><td></td><td>用于痰液浓缩；可达到3000 g；d&amp;#8211;s无需制冷，但必须具备生物安全性能（桶可密封）</td></tr><tr><td>恒温培养箱（37°C）</td><td>设备</td><td></td><td></td><td>用于培养；无需CO₂富集环境</td></tr><tr><td>倒置光学显微镜</td><td>显微镜</td><td></td><td></td><td>用于读取MODS培养板</td></tr><tr><td>高压灭菌器</td><td>设备</td><td></td><td></td><td>用于灭菌培养基、PBS及使用过的培养板</td></tr><tr><td>天平</td><td>设备</td><td></td><td></td><td>用于称量异烟肼、利福平和NALC</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9培养基（Difco）</td><td>试剂</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0713-17-9</td><td>500克/瓶；培养基基础成分</td></tr><tr><td>酪蛋白胰酶消化物（Casitone）</td><td>试剂</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0259&amp;#8208;17&amp;#8208;9</td><td>500克/瓶；培养基基础成分</td></tr><tr><td>甘油（甘油）冻干品</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G&amp;#8208;33&amp;#8208;500</td><td>500毫升/瓶；培养基基础成分</td></tr><tr><td>PANTA（抗生素混合物，冻干，BD）</td><td>试剂</td><td>Fisher Scientific</td><td>B4345114</td><td>6瓶/包；抗生素培养基补充剂</td></tr><tr><td>OADC（Middlebrook OADC营养补充剂，BD）</td><td>试剂</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11886</td><td>10 × 20毫升/包；营养培养基补充剂</td></tr><tr><td>二甲基亚砜（Hibri-Max）</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-2650</td><td>100毫升/瓶；用于配制利福平储备液</td></tr><tr><td>抗生素储备液：异烟肼</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-3377</td><td>50克/瓶；直接药敏试验</td></tr><tr><td>抗生素储备液：利福平</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-3501</td><td>1克/瓶；直接药敏试验</td></tr><tr><td>氢氧化钠（颗粒）</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>500克/瓶；用于痰液去污染</td></tr><tr><td>柠檬酸钠（三钠盐二水合物）</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-4641</td><td>500克/瓶；用于痰液去污染</td></tr><tr><td>N-乙酰-L-半胱氨酸</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-7250</td><td>50克/瓶；用于痰液去污染</td></tr><tr><td>磷酸二氢钾晶体，KH₂PO₄</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>500克/瓶；用于痰液去污染</td></tr><tr><td>磷酸氢二钠，无水，Na₂HPO₄</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>500克/瓶；用于痰液去污染</td></tr><tr><td>次氯酸钠</td><td>试剂</td><td>家用漂白剂</td><td></td><td>用于处理污染性废弃物</td></tr><tr><td>15毫升离心管（聚丙烯，15毫升 Falcon 35&amp;#8208;2096）</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>14&amp;#8208;959&amp;#8208;49B</td><td>500个/箱；用于痰液去污染和浓缩</td></tr><tr><td>24孔板（组织培养板，24孔，BD Falcon 35&amp;#8208;3047）</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1</td><td>50块/箱；用于培养和观察</td></tr><tr><td>可密封聚乙烯袋，6 × 6 &amp;#8220;（自封袋）</td><td>耗材</td><td></td><td></td><td>用于生物安全，容纳24孔板</td></tr><tr><td>带盖玻璃管（16 × 100毫米 和 18 × 145毫米）</td><td>耗材</td><td>VWR international</td><td>47729-583</td><td>500支/箱；用于储存分装的培养基</td></tr><tr><td>螺口微量离心管（1.5毫升）</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>05&amp;#8208;669&amp;#8208;22</td><td>1000个/箱；用于储存分装的抗生素储备液</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;m 滤膜（适用于水溶液）注射器滤器 Millex 蓝色</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGL 025 OS</td><td>50个/箱；用于过滤抗生素储备液</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;m 滤膜（适用于有机溶剂）注射器滤器 Millex 黄色</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGV 033 RS</td><td>50个/箱；用于过滤抗生素储备液</td></tr><tr><td>一次性巴斯德吸管，硼硅酸盐玻璃，9&amp;#8243;</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>13&amp;#8208;678&amp;#8208;20C</td><td>720支/箱；用于混合PANTA与培养基混合液</td></tr><tr><td>气溶胶阻隔吸头，1000&amp;#8208;1300&amp;mu;l</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>02&amp;#8208;707&amp;#8208;51</td><td>1000个/包；用于将培养基分配至培养板</td></tr><tr><td>USA Scientific 吸头 One 1&amp;#8208;200&amp;mu;l 黄色吸头</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>1111&amp;#8208;0006</td><td>1000个/袋；用于稀释抗生素储备液</td></tr></tbody></table>

用于结核病及耐多药结核病诊断的mods方法

The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis

活动性肺结核（TB）患者每年可传染10至15人，因此对活动性结核病的诊断对于治愈患者和防止新感染至关重要。此外，耐多药结核病（MDRTB）的出现意味着必须检测药物耐药性，以阻止耐药菌株的传播。显微观察药物敏感性（MODS）检测是一种低成本、低技术门槛但高性能的TB和MDRTB检测工具。MODS检测基于三个原理：1）结核分枝杆菌（MTB）在液体培养基中的生长速度快于固体培养基；2）与等待固体培养基上菌落的肉眼可见生长相比，可在液体培养基中更早通过显微镜观察到MTB的特征性生长，且该生长形态具有特异性，可将其与非典型分枝杆菌、真菌或细菌污染相区分；3）可将异烟肼和利福平两种药物加入MODS检测体系中，从而实现对MDRTB的同步直接检测，无需进行亚培养即可完成间接药物敏感性试验。目前现有的竞争性诊断方法存在诸多局限：痰涂片检测敏感性低；固体培养基培养诊断耗时长；现有液体培养方法成本过高；且检测MDRTB时需进行亚培养以完成间接药物敏感性试验。相比之下，非专利的MODS方法对TB和MDRTB具有高敏感性，是一种相对较快的培养方法，可同步提供MDRTB的药物敏感性检测结果，并且在资源有限的环境中每例TB和MDRTB检测成本不足3美元，具有良好的可及性。

显微镜观察药物敏感性（MODS）检测是一种低成本、低技术门槛的高效结核病（TB）及耐多药结核病（MDRTB）检测工具。本视频介绍了MODS液体培养基培养方法。

用于结核病及耐多药结核病诊断的MODS方法

活动性肺结核（TB）患者每年可传染10至15人，因此对活动性结核病的诊断对于治愈患者和控制传播均至关重要。

全球每三个人中就有一人感染结核病。诊断活动性结核病可防止新的感染，因为未经治疗或死亡前，每位活动性结核病患者每年可传染10至15人。MODS 是一个缩写词，我们用它来避免重复表述“显微镜观察药物敏感性检测”，随着方法学的解释，其命名原因将变得清晰明了。在本短片中，我们将概述用于快速、低成本诊断结核病及耐多药结核病的mods技术方法。视频将逐步展示该方法的操作流程。我们将讨论使用液体培养物时涉及的生物安全问题，同时也会解释实施该方法所需关注的一些重要质量保证事项。MODS 检测法由秘鲁利马的卡亚纳大学 Bob Gilman 实验室研发。该方法基于最初由 Loose Cavi 观察到的现象。Loose 试图利用比色指示剂寻找快速检测培养物中结核分枝杆菌的方法。但她指出，在显微镜下观察这些培养物时，可在比色指示剂变色前数天就观察到微生物的生长，MOD 的检测方法正是基于这一观察结果而开发的。MOD 检测法是在资源有限的条件下研发的，目标应用环境也是资源有限的地区，因此每项测试的成本略低于 3 美元，可用于基于液体培养的结核病检测及耐多药检测。该方法极具吸引力，首次将此类诊断能力带入了资源有限的地区。因此，MODS检测基于三个核心原理。第一，结核分枝杆菌在液体培养基中的生长速度远快于在固体培养基中的生长速度。这一事实已被认识多年。其次，如果我们在显微镜下观察这些液体培养基，就能比等待固体培养基上菌落的宏观出现更快速地检测到结核分枝杆菌的生长。事实上，这种生长特征非常典型，以至于我们能够将液体培养基中的结核分枝杆菌与细菌或真菌污染，甚至与可能存在的非结核分枝杆菌（非典型）的生长区分开来。最后，也是mods检测法最令人兴奋的一点：我们可以在培养基中加入利福平类药物，从而直接从痰标本中检测出耐多药性。通过在实验开始时使用这些药物，我们能够同时检测结核病以及分离株对这两种药物是否耐药。这消除了进行分步培养和建立间接药物敏感性试验的需要。接下来，我们将简要介绍进行 MODS 实验所需的设备。需要冰箱来储存制备好的培养基。需要天平来称量异烟肼和利福平。需要涡旋振荡器来混匀痰液。使用去污染溶液时，需要通过离心机浓缩去污染后的痰液样本，离心机应能达到 3000 G。离心机无需制冷，但必须具备生物安全性能，确保生物安全。进行分枝杆菌相关操作时，要求离心机的转桶可使用可锁盖密封。需要配备能够达到并维持 37 摄氏度的培养箱。此环境无需增加 CO2 浓度。读取 mods 平板需要使用倒置显微镜，该显微镜应配备 4 x 和 10 x 物镜，同时需要高压灭菌器对培养基进行灭菌以及处理微生物培养物废弃物。分装培养基需要使用微量移液器，操作涉及痰液样本处理和接种平板的步骤时，必须在二级生物安全柜中进行。进行mods检测所需的试剂如下：Middlebrook 7H9培养基、吐温-80（Tween-

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

MODS的方法和诊断结核病耐药结核病

结核分枝杆菌的抗菌药物敏感性试验具有挑战性，但对患者护理至关重要。这种微量滴定板格式可检测12种抗分枝杆菌药物，并提供最小抑制浓度（MIC）值，有助于制定恰当的治疗方案。...

微孔板肉汤稀释法对结核分枝杆菌复合群进行一线和二线药物的抗菌药物敏感性试验

Xpert MTB/RIF 检测整合了样本去污染、免手动操作、仪器内置样本处理以及超灵敏的半巢式 PCR 技术，可在约两小时内对咳出的痰液或浓缩痰沉淀物中的结核分枝杆菌（Mycobacterium...

使用Xpert MTB/RIF检测法诊断肺结核

扩增微阵列将不对称PCR扩增与微阵列杂交整合于同一反应腔室中，显著简化了终端用户的微阵列操作流程。简化微阵列操作流程是开发适用于资源有限环境的微阵列诊断技术的必要第一步。...

展示一种多重耐药性Mycobacterium tuberculosis扩增微阵列

我们开发了一种模块化的高通量筛选系统，用于发现针对Mycobacterium...

靶向细胞内目标抑制剂的药效与细胞毒性筛选系统 结核分枝杆菌

我们提出了一种优化的DNA提取方法，该方法采用基于基质的提取法结合磁珠纯化技术，从去污染的痰液样本中提取DNA，用于后续对结核分枝杆菌（Mycobacterium...

基于基质的DNA提取用于污染清除痰液样本的靶向下一代测序

本文介绍了一种通过表型筛选鉴定潜在抗结核药物候选物的实验方案，包括4-氨基喹啉类化合物的化学合成、其对结核分枝杆菌最低抑菌浓度的测定，以及在哺乳动物细胞系中对其细胞毒性的评估。...

潜在抗结核候选物的鉴定：合成、最低抑菌浓度测定及哺乳动物细胞毒性评估的逐步指南

斯氏按蚊是分布在印度及整个亚洲的疟疾传播媒介。本视频展示了对该蚊种进行显微注射的技术，通过导入可使蚊子对疟疾产生抗性的外源基因。本视频所展示的大部分方法同样适用于其他蚊种的显微注射技术。...

显微注射斯氏按蚊胚胎以培育抗疟疾蚊子

在本实验方案中，我们展示了重组表达的膜蛋白 MexB 作为可溶性蛋白-去垢剂复合物的表达、增溶及纯化过程。MexB 是来自机会性细菌病原体铜绿假单胞菌（Pseudomonas...

膜转运蛋白MexB多药耐药蛋白的表达、去垢剂增溶及纯化

全胚胎培养技术可使我们对小鼠和大鼠胚胎进行体外培养 离体...

采用旋转式瓶培养系统的啮齿类动物全胚胎培养方法

我们提供一种经济高效且快速的分子基因分型方案，该方案采用特异性PCR引物，靶向Imperata cylindrica（茅草）叶绿体trnL-F间隔区内的DNA序列差异，以区分仅靠形态特征无法鉴别的不同品种。这些品种包括被列为联邦有害杂草的茅草，以及与其亲缘关系密切且广泛栽培的观赏品种I. cylindrica var.

一种基于PCR的基因分型方法以区分白茅（Imperata cylindrica）的野生型与观赏型品种

学习显微镜观察药敏试验（MODS）方法，用于快速、低成本诊断结核病和耐多药结核病。本视频详细讲解液体培养技术的操作步骤、生物安全要求及质量控制措施，适用于资源有限地区的高性能检测需求。

用于结核病及耐多药结核病诊断的MODS方法

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