口腔感染杆状病毒鳞翅目幼虫的协议

Vao 病毒通常用作 DNA 载体，与昆虫细胞系联合用于蛋白质表达。然而，这种病毒有效地感染昆虫并造成致命后果这一事实也使其成为一种有效的杀虫剂。例如，在巴西，野生型 balo 病毒每年应用于超过 100 万公顷的大豆作物，以控制天鹅绒豆毛虫以增强其杀虫功效，Balo 病毒已被基因工程改造，编码在昆虫的 HemosIL 中活跃的昆虫特异性毒素。

在本视频中，我们演示了用 bacao 病毒口服感染鳞翅目幼虫的方法，以分析杀虫效果。嗨，我来自爱荷华州立大学眼科系的 Blind Boning 实验室，我是 Wendy Sparks，也是剔骨实验室的。今天我们将向您展示 lter 和 larvae 的 VA 病毒感染的两种程序。

首先，harran 将向您展示如何使用飞沫喂养生物测定法感染新生儿幼虫。然后，我将向您展示如何使用饮食血液生物测定法感染中龄期幼虫。那么让我们开始吧。

飞沫喂养生物测定可用于确定阿巴卡韦的致死剂量和存活率。巴洛病毒感染幼虫的时间。早期龄或新生儿幼虫通常用于该测定。

在开始之前，请确保您手头有装有适当饮食的减肥杯。此外，准备适当的病毒稀释液包括绿色食用色素染料，浓度为 4%（按体积计）。为了确定致死病毒浓度，稀释度应给出 1 至 99% 之间的死亡率范围可能需要初步生物测定以确定适当的病毒浓度范围，涡旋试管后以防止多面体沉降，在 60 毫米培养皿中制作两个病毒溶液小液滴的同心圆。

对于使用的每种病毒浓度，请记住还要设置阴性对照模拟感染。治疗 接下来，使用无菌画笔将 25 到 30 只新生幼虫转移到同心圆的中间。将盖子盖在培养皿上并用 paraform 密封，以防止幼虫逃逸。

理想情况下，使用不同的画笔来转移每种病毒类型，以防止两次治疗之间产生污染。让培养皿在室温下静置 10 到 15 分钟，在此期间幼虫会喝水。喂食的溶液幼虫可以通过绿色食用色素染料导致的前肠绿色来识别，仅转移那些喂食到 1 盎司塑料杯中的幼虫，这些塑料杯含有饮食转移每杯一只幼虫。

转移幼虫后，用盖子盖住杯子，并在感染后 28 小时在 24 摄氏度下孵育。去除任何含有死幼虫的杯子。这些早期死亡可能是由于处理伤害造成的。

当使用这种生物测定法确定致死剂量时，应每两到三天检查一次幼虫，直到模拟感染的幼虫和任何存活的病毒处理的幼虫已经净化或开始借用以化蛹，感染病毒的幼虫将留在食物的顶部，然后在几天后死亡。死去的幼虫有时会变成黑色的幼虫，死于感染的幼虫基本上会变成多面体袋，它们会完全溶解。如果此时受到机械干扰，则对每次处理中的幼虫死亡率进行评分。

致死浓度生物测定应在不同场合重复 3 或 4 次。对于每种病毒或对照治疗，每剂使用 30 人。使用适当的遗嘱认证分析程序（如 polo 或 SAS）来计算 lc 50 值、95% 置信区间和适当的统计数据。

这种液滴进料测定也可用于确定 ST 50 存活时间值。在这种情况下，每 4 到 8 小时对幼虫死亡率进行一次评分，并进行更频繁的观察。如果死亡率高，则使用 lc 99 剂量的病毒中位生存时间进行生物测定，并使用 s plus 或 SAS 程序的 Kaplan Mayer 估计器计算 95% 置信限。

现在 Harang 已经向您展示了液滴喂养生物测定法，我将向您展示饮食塞生物测定中的饮食塞生物测定法。在进行该测定的前一天，用用已知剂量的病毒处理的饮食塞喂养中至晚期龄幼虫，以确定致死剂量或 LD 50。从杯子中取出食物，让幼虫饿一夜。

此步骤将增加幼虫消耗病毒的速度。接种减肥块第二天，将减肥草切成约两立方毫米的小方块来准备减肥。如果减肥块太小，它们会变干。

如果饮食块太大，幼虫将无法在一夜之间吃掉整个饮食块。现在向每个饮食块中加入 1 到 2 微升的多面体悬浮液。悬浮液含有 4% 体积的食用色素染料。

让悬浮液浸泡到饮食中 5 到 15 分钟。请记住还要准备一个模拟病毒处理的饮食块作为阴性对照。接下来，将一个饮食块转移到每个杯子中的每四龄幼虫上。

然后第二天将杯子放入 28 摄氏度的培养箱中过夜，丢弃任何未完全吃掉饮食块的幼虫。然后在每个杯子中加入一大块饮食，供剩余的幼虫食用。将幼虫保持在 28 摄氏度，根据需要添加额外的饮食，直到模拟感染的幼虫和幸存的病毒感染幼虫已经吃掉或开始化蛹。

此时，记录死亡和存活昆虫的数量。我们只向您展示两种用背部病毒感染昆虫的方法，即出血、摄食活检和饮食斑块活检。在执行此程序时，重要的是要记住，vao 病毒杀死的幼虫的尸体通常很脆弱，很容易破裂释放病毒。

因此，请对工作台面进行消毒，并以适当的方式处理受污染的手套和一次性材料，以防止污染。就是这样。感谢您的观看，祝您的实验好运。