压力抛光移液管以改善膜片钳记录

此操作首先在100倍放大倍数下，将移液器吸头置于抛光丝附近。接着打开气压和加热装置。该丝状体。

移液器吸头将膨胀形成钝头形状。关闭加热以获得更小的吸头开口。再次关闭压力和加热。

大家好，我是来自斯坦福大学分子与细胞生理学系 Miriam Goodman 博士实验室的 Brandon Johnson。今天我们将向您展示一种压力抛光膜片电极的实验方法。我们实验室采用该方法来研究离子通道、膜片以及秀丽隐杆线虫神经元中的相关特性。

那么我们开始吧。准备六到十个膜片钳移液管。如有需要，可咨询当地专家，或参考我们关于使用可编程拉制仪制作膜片钳移液管和尖锐电极的可视化实验视频以获得帮助。

开始操作时，将压缩空气管路压力设置为约 40 PS.I，然后将压缩空气管路连接至一个四通控制阀。将一段塑料管连接到四通阀上，并在塑料管的自由端安装一个高压移液管支架。使用微加工火焰装置进行抛光。

我们使用 LA Scientific 公司的 Ccpm 两件套工具包。该装置包含一个高压移液器固定器、一个由脚踏板控制的铂金加热丝，以及一台配备低倍和高倍（10 倍和 100 倍）长工作距离物镜的显微镜。长工作距离的空气物镜是理想选择，因为在实验过程中必须能够清晰观察移液器开口的情况。

接下来，确认压力阀处于关闭位置。然后将移液器放入移液器支架中，并用手拧紧固定装置，以确保实验室安全。确保移液器牢固地固定在移液器支架中。

否则，气压会导致移液管从 holder 中弹出。作为可选步骤，可用疏水性绝缘材料（如石蜡）涂覆移液管，以降低电容并改善噪声特性。现在将装有移液管的 holder 置于显微拉针仪上，并将移液管 holder 定位在显微镜载物台上，使在显微拉针仪低倍（10 倍）视野下可同时观察到移液管尖端和抛光丝。

将尖端移至距灯丝约50微米处，然后切换到高倍100倍物镜，此时移液管尖端和抛光灯丝均应处于焦平面内并位于视野中。如果未满足该条件，则调节灯丝的高度。由于移液管位置无法调整，移液管尖端与灯丝应位于视野的相对两侧。

避免将移液器尖端过于靠近灯丝，因为灯丝加热后会膨胀，可能触碰到移液器。当尖端和灯丝位置调整妥当后，转动阀门，使加压空气进入移液器，并加热移液器尖端，直至尖端后方的锥形部分开始向外膨胀。在尖端过度膨胀之前停止加热。

需要通过实验确定获得理想形状所需的距离、加热温度和时间。作为可选步骤，您还可以在无压力条件下对拉制好的尖端进行抛光，以减小尖端开口直径。此外，请注意这些抛光步骤可重复进行以进一步优化。

调整移液管尖端的形状和尺寸。抛光完成后，关闭压力，将移液管尖端指向安全方向。

移去移液器，并将其放入干净的储存盒中，以防止灰尘污染。为确保实验室安全，在取下移液器前务必先关闭压力，否则移液器可能从移液器架中弹出。

移除后，我们刚刚向您展示了如何通过压力抛光毛细管以改善膜片钳记录效果。进行此操作时，需注意务必用高熔点玻璃涂覆抛光线圈，以尽量减少金属蒸气在毛细管上的沉积；同时，在毛细管暴露于加压空气时应格外小心。

确保移液器牢固地固定在支架中，并在从支架上取下移液器之前关闭气源。操作到此结束。感谢观看。

祝您压力抛光顺利，实验成功。