Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

此过程首先将移液器吸头以 100 倍放大倍率放置在抛光丝附近。接下来打开气压和加热。细丝。

移液器吸头将膨胀形成钝形吸头。关掉暖气以获得更小的尖端开口。关掉压力，再次加热。

大家好，我是来自斯坦福大学分子与细胞生理学系 Miriam Goodman 博士实验室的 Brandon Johnson。今天，我们将向您展示压力抛光贴片移液器的程序。我们在实验室中使用该程序来研究离子通道和膜贴片以及 NC elgan 神经元。

那么让我们开始吧。拉出一组 6 到 10 个补片移液器。请咨询当地专家或我们的可视化实验，制作带有可编程极性的贴片移液器和尖锐电极以寻求帮助。

要开始该过程，请将压缩的空气管路压力设置为约 40 PS。然后，我将压缩的空气管路连接到四通控制阀。将一段塑料管连接到四通阀，并将高压移液器支架连接到塑料管的松散端。使用微型锻造装置进行抛光。

我们使用 LA Scientific 的 Ccpm two 试剂盒。该装置具有一个高压移液器支架、一个由脚踏板控制的铂加热丝和一个配备 100 倍长 10 倍的低放大倍率和高放大倍率的显微镜。工作距离空气物镜是理想的选择，因为在方案过程中能够观察移液器开口至关重要。

接下来，验证压力阀是否处于关闭位置。然后将移液器放入移液器支架中，并拧紧接头以用手拧紧，以确保实验室的安全。确保移液器牢牢地固定在移液器支架中。

否则，气压将导致移液器从支架中弹出。作为可选步骤，您可以在移液器上涂上疏水绝缘体（如蜡），以降低电容并改善噪音特性。现在将移液器放入 micro forge 中的支架中，将移液器支架放在显微镜载物台上，以便在 micro forge 上以 10 倍的低功率可以看到尖端和抛光丝。

将吸头从灯丝上移出约 50 微米，然后切换到高功率 100 物镜，移液器吸头和抛光灯丝都应聚焦并在视野中。如果没有，请调整灯丝的高度。由于移液器位置无法调整，因此移液器吸头和灯丝应位于视野的相对两侧。

避免将移液器吸头放置在离细丝太近的位置，因为它会在加热时膨胀，并可能撞到移液器。吸头和细丝正确定位后，转动阀门，将加压空气引导至移液器中，并加热移液器吸头，直到吸头后面的锥度开始向外膨胀。在尖端膨胀过大之前停止加热。

需要进行实验以确定所需形状的适当距离、热量和时间。作为可选步骤，您还可以在没有压力的情况下抛光尖端，以减小尖端开口直径。此外，请记住，这些抛光步骤可以重复进行微调。

调整移液器吸头的形状和尺寸。抛光完成后。关闭移液器吸头沿安全方向的压力点。

取出移液器并将其放入干净的储物盒中，以防止灰尘进入。为了实验室的安全，请务必在取出移液器之前关闭压力。否则，它可以从移液器支架中弹出。

移除后，我们刚刚向您展示了如何对移液器进行压力抛光以改善膜片钳记录。执行此程序时，请务必记住在抛光线圈上涂上高熔点玻璃，以尽量减少汽化金属在移液器上的沉积。移液器暴露在加压空气中时要小心。

确保移液器牢牢地固定在支架中，并在从支架中取出移液器之前关闭空气。就是这样。感谢观看。

压力抛光愉快，祝您的实验好运。