Filamentöse Pilze

1. Boden Probenvorbereitung

1. Ermitteln Sie zunächst den ursprünglichen Feuchtigkeitsgehalt des Bodens durch über Nacht trocknen von einer bekannten Menge des feuchten Bodens und Gegengutachten die getrockneten Boden. Die Gleichung den ursprünglichen Feuchtigkeitsgehalt des Bodens zu bestimmen ist:
   
   (Gleichung 1)
   Wo:
   MC = Feuchtigkeitsgehalt
   W = Nettogewicht
   D = Trockengewicht
2. Berechnen Sie die Menge des Wassers, die 25 g des Bodens erhöhen die Bodenfeuchte, 10 % auf einer trockenen Gewicht-Basis hinzugefügt werden muss.
3. Fügen Sie diese Menge an Wasser, 25 g des Bodens.
4. Decken Sie den Container mit Plastikfolie und Punktion des Films mehrmals mit einer Sonde zur Belüftung während der Inkubation zu ermöglichen. Befestigen Sie den Film mit einem Gummiband.
5. Wiegen des Bodens und wickeln, dann eine Woche Probe bei Raumtemperatur inkubieren.

(2) Pilz Impfung und Inkubation

1. Nach die Inkubation abgeschlossen ist, wiegen Sie die Bodenprobe mit Wrap und Gummiband. Berechnen Sie die Gewichtsabnahme durch den Feuchtigkeitsverlust von.
2. Berechnen Sie die neue Bodenfeuchte.
3. Als nächstes bereiten Sie eine Reihe von 1/10-Verdünnung der Böden wie in Abbildung 2dargestellt. Dadurch werden Verdünnungen von 10^-1 (a-Flasche), 10^-2 (Rohr B), 10^-3 (Rohr C), 10^-4 (Rohr D) und 10^-5 (Rohr E) g Erde pro mL Suspensionen.
4. Bereiten Sie sterile Rose Bengal-Streptomycin Agarplatten. Die Rose Bengal und Streptomycin hemmen Wachstum von Bakterien. Für sehr fruchtbaren Böden, wo Boden mikrobiellen Populationen hoch sind, die gewählten Verdünnungen sollte höher sein, d.h., 10^-310^-4und 10^-5g Boden pro Platte.
5. Zu jedem der 10^-3 Platten, fügen Sie 0,1 mL Verdünnung Röhre 10^-2und Verbreitung über die Agar-Oberfläche mit einer Ethanol-Flamme sterilisiert Glas Streuer. Weil eine Menge von 0,1 mL überzogen ist, macht dies die effektive Verdünnung 10^-3. Wiederholen Sie diese Schritte für alle Verdünnungen.
6. Eine Woche inkubieren Sie Platten bei Raumtemperatur.

(3) Koloniezahlbestimmung und Prüfung durch Mikroskopie

1. Kolonie zählt nur eine Verdünnung von jeder Boden zu machen. Die Platten, die gezählt werden sollte diskrete zählbare Kolonien haben. Überwucherte Platten sollten nicht gezählt werden. Ebenso sollten die Platten mit weniger als 10 Kolonien nicht gezählt werden. Beachten Sie, und beschreiben Sie die kulturellen Besonderheiten von drei verschiedenen Kolonien zu.
2. Detaillierten Mikroskop Studie mithilfe des folgenden Verfahrens bereiten Sie Druck Klebeband (Tesafilm) Halterungen auf Folien vor:
   1. Hinterlegen Sie einen Tropfen Flüssigkeit in der Mitte des einen sauberen Objektträger Montage lactophenol
   2. Schneiden Sie einen Streifen von klaren Tesafilm etwa 3 cm lang aus dem Lager Rollen. Zur Vermeidung einer Kontamination der Klebefläche, verwenden Sie Zange beim Umgang mit des Bands. Sezierenden Nadel wird helfen, das Band von der Zange zu befreien.
   3. Die klebende Seite des Bandes wird die Oberfläche einer sporulating Pilz-Kolonie. Achten Sie darauf, übermäßigen Druck auf das Band oder zu dicht, eine Masse von Hyphen und Sporen werden gesammelt.
   4. Entfernen Sie das Klebeband vom Kontakt mit der Pilz-Kolonie und wenden sie, Klebeseite nach unten, bis die Tropfen Flüssigkeit auf den Objektträger zu montieren. Das Band mit einer glatten, flachen Instrument zur ausdrücklichen Luftblasen einmassieren.
   5. Prüfen Sie die Band Mount mikroskopisch unter dem Öl-Immersion-Ziel mit Öl.
   6. Identifizieren Sie zwei verschiedene Pilz-Gattungen mit den mitgelieferten Pilz Identifikationsschlüssel (Abbildung 4).

Abbildung 4. Pilz Identifikationsschlüssel.