DNA-Isolierung

DNA-Extraktion ist die Entfernung und Reinigung von DNA aus Zellen. Zunächst werden Zellen lysiert, aufgebrochen, normalerweise durch eine Kombination aus physikalischer Störung und Behandlung mit Chemikalien wie Detergenzien, die die Zelle und die Kernmembranen auflösen. Der Inhalt kann dann frei in die umgebende Lösung fließen.

Als nächstes muss die DNA von den anderen vorhandenen Molekülen getrennt werden. Organische Lösungsmittel wie Phenol und Chloroform werden üblicherweise verwendet, um Nukleinsäuren aufgrund ihrer unterschiedlichen Löslichkeit von Proteinen zu trennen. Zusätzlich können Proteinase- und RNase-Enzyme verwendet werden, um Proteine und RNA abzubauen, wobei die DNA intakt bleibt.

Üblicherweise wird der Probe Salz zugesetzt, das die negativ geladenen Phosphatgruppen im Rückgrat der DNA stabilisiert und nach Zugabe von eiskaltem Alkohol die DNA aus der Lösung ausfällt. Der weiße Niederschlag wird durch Drehen in einer Zentrifuge gesammelt, wo er sich am Boden des Röhrchens absetzt. Nach dem Waschen und Resuspendieren in einer Pufferlösung kann die extrahierte DNA schließlich für Forschungs- oder Biotechnologieanwendungen verwendet werden.