Prinzipien der Säulenchromatographie

Die Säulenchromatographie ist eine biochemische Technik, mit der Verbindungen auf der Grundlage ihrer physikalischen und chemischen Eigenschaften getrennt werden.

Es besteht aus zwei Hauptkomponenten: der festen stationären Phase oder der Matrix und der flüssigen mobilen Phase oder dem Lösungsmittel.

Die matrixgepackte Säule wird mit einer Probe, z. B. einer Proteinmischung, beladen. Das Lösungsmittel wird dann verwendet, um die Probe durch die Säule zu transportieren.

Im Inneren der Säule fungiert die Matrix als molekulares Netz, das die Proteine basierend auf ihrer Größe oder Wechselwirkung mit der Matrix filtert. Die größeren Proteine neigen dazu, sich schneller zu bewegen als die kleineren Proteine, was zu einer größenbasierten Trennung führt.

Darüber hinaus können Proteine in einer Probe mit der Matrix interagieren. Schwache Wechselwirkungen ermöglichen es Proteinen, schnell zu passieren, während starke Wechselwirkungen Proteine in der Säule halten.

Eine allmähliche Änderung des pH-Werts oder der Ionenstärke des Lösungsmittels verändert die Wechselwirkungen der Proteine mit der Matrix und hilft, Proteine in separate Fraktionen zu eluieren.