SDS-SEITE

Die Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese oder SDS-PAGE ist eine auf Molekulargewicht basierende Technik, bei der Proteinmischungen anhand ihrer Größe getrennt werden.

Hier werden Probenproteine mit β-Mercaptoethanol und SDS behandelt.

β-Mercaptoethanol ist ein Reduktionsmittel, das die Disulfidbindungen aufbricht.

SDS, ein negativ geladenes Detergensmittel, bindet an den hydrophoben Regionen, um die Proteine zu entfalten und zu denaturieren und fügt eine gleichmäßige negative Ladung hinzu.

Anschließend werden die Proben auf ein Polyacrylamid-Gel aus vernetzten Acrylamid-Monomeren geladen.

Das Top-Stacking-Gel hat aufgrund der geringen Acrylamidkonzentration große Poren.

Beim Anlegen der Spannung stapeln sich die Proteinproben wie Münzen, um gleichzeitig in das niedriger auflösende Gel einzudringen.

Das auflösende Gel hat aufgrund einer höheren Acrylamidkonzentration kleinere Poren. Es fungiert als molekulares Sieb, das kleinere Proteine schneller laufen lässt und so die Proteine nach ihrer Größe trennt.

Diese getrennten Proteinbanden werden üblicherweise mit Hilfe der Coomassie-Blau-Färbung sichtbar gemacht. Das Molekulargewicht jeder Bande kann mit Hilfe von Refere