Peptididentifizierung mittels Tandem-Massenspektrometrie

Im Gegensatz zu MALDI-TOF werden bei der Tandem-Massenspektrometrie oder MS/MS zwei in Reihe geschaltete Massenanalysatoren verwendet, die durch eine Kollisionszelle getrennt sind. Mit dieser Technik kann die Aminosäuresequenz eines Peptids aus einer komplexen Mischung für eine detaillierte Analyse identifiziert werden.

Zunächst erzeugt ein Elektrospray-Ionisator Peptidionen und beschleunigt sie wie ein Quadrupol zum ersten Massenanalysator. Dieser Analysator fungiert als Massenfilter, der die Auswahl eines einzelnen Peptidions, des sogenannten Vorläuferions, mit einem bestimmten Masse-Ladungs-Verhältnis ermöglicht.

Im Inneren der Kollisionszelle kollidiert das ausgewählte Peptidion mit den Gasmolekülen, wodurch vor allem die Peptidbindungen aufgebrochen und kleinere Ionen erzeugt werden.

Diese Ionen wandern in den zweiten Massenanalysator wie eine Flugzeit, die die Ionen auf der Grundlage ihres Masse-Ladungs-Verhältnisses trennt.

Das erhaltene Produkt-Ionen-Spektrum hilft bei der Identifizierung der Aminosäuresequenz des Peptids.

Die Kombination von MS/MS mit Flüssigchromatographie hilft bei der kontinuierlichen Peptidanalyse aus komplexen biologischen Proben.

MS/MS kann auch Lipide charakterisieren, posttranslationale Proteinmodifikationen identifizieren und geringe Mengen an krankheitsspezifischen Biomarkern in biologischen Proben nachweisen.