Hochleistungsflüssigkeitschromatographie: Einführung

Bei der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie oder HPLC erfolgt die Trennung in einer analytischen Säule, die mit einer auf Kieselsäure basierenden, gebundenen stationären Phase gefüllt ist.

Die Trennung der Analyten erfolgt auf der Grundlage der Wechselwirkungen zwischen der festen stationären Phase und der flüssigen mobilen Phase.

Die Kieselsäureoberfläche besteht auch aus nicht umgesetzten Silanolgruppen, was zu polaren Wechselwirkungen führt, die zu Tailing führen.

So werden Silanolgruppen mit Trimethylchlorsilan umgesetzt, um die endverschlossene stationäre Phase zu bilden.

Eine Vorsäule, die mit der gleichen stationären Phase gefüllt ist, wird vor der Analysesäule platziert, um sie vor Kontamination zu schützen, und wird regelmäßig ausgetauscht, um die Lebensdauer der Säule zu verlängern.

Die Polarität der mobilen Phase spielt eine entscheidende Rolle bei der Elution von Analyten.

Bei der Normalphasenchromatographie werden eine polare stationäre Phase und eine unpolare mobile Phase verwendet.

Im Gegensatz dazu wird bei der Umkehrphasenchromatographie eine unpolare stationäre Phase und eine polare mobile Phase verwendet.