Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll, mit dem Homing von hämatopoetischen Zellen, ihre Nischen im Knochenmark zu studieren.
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Methodenartikel
Homing von hämatopoetischen Zellen im Knochenmark
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Homing ist das Phänomen, dass transplantierte hämatopoetische Zellen sind in der Lage zu erreichen und einprägen Reise-oder niederlassen in das Knochenmark. Verschiedene chemomkines und Rezeptoren sind in der Homing von hämatopoetischen Stammzellen beteiligt sind. [1, 2]
Dieser Beitrag skizziert die klassische Homing-Protokoll in hämatopoetischen Stammzellen Studien verwendet. Im Allgemeinen besteht die Isolierung des Zell-Population, deren Referenzierung muss untersucht werden, Färbung dieser Population mit einem Farbstoff der Zinsen und Injektion dieser Zellen in die Blutbahn des Empfängers Tier. Der Empfänger Tier wird dann bei einer vorbestimmten Zeit nach der Injektion und dem Knochenmark für die prozentuale oder absolute Anzahl der Zellen, die positiv sind für den Farbstoff von Interesse ausgewertet geopfert. In einer der häufigsten experimentellen Systemen, die Homing-Effizienz von hämatopoetischen Zellen von zwei genetisch verschiedene Tiere (ein Wildtyp-Tier und die entsprechenden knock-out) verglichen wird. Dieser Artikel beschreibt das hämatopoetische Zellen Homing-Protokoll im Rahmen der, wie zu experimentieren.
Protokoll
- Wir beginnen die Homing Experiment durch Extrahieren von Zellen im Experiment verwendet werden. Aus diesem aktuellen Experiment, das wir wollen wissen, interessiert, wenn die Referenzfahrt der gesamte Knochenmark zu den Nischen in den langen Knochen des Empfängers Tieren unterscheidet sich für Knochenmark-Zellen aus WT Tieren wie C57BL/6J (WT) extrahiert und jene, die transgene sind Vorprägungen für Lysophosphatidsäure-Rezeptor 1 (LPAR1) (KO).
- Bevor wir den Versuch starten, die wir sammeln die Materialien, die wir für dieses Experiment. In unserem Labor alle Maus-Sektionen sind in einer laminaren Strömung Gewebekultur Kapuze trug vor allem, wenn die Zellen gehen, um in ein....
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Diskussion
Homing ist der Prozess, durch Knochenmarkszellen wie Stammzellen, Vorläuferzellen und differenzierte Zellen, ihren Weg in das Knochenmark, nachdem sie in die Blutbahn oder Knochenmarkshöhle von Mäusen injiziert. Wie aus der Definition, kann ein Wissenschaftler wählten die Homing von hämatopoetischen Stammzellen, Vorläuferzellen oder differenzierten Zellen durch Immunphänotypisierung identifiziert und isoliert durch Zellsortierung zu studieren. Typischerweise Wissenschaftler injizieren Knochenmarkzellen für Linie Marker .......
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Danksagungen
Dieses Protokoll wurde getestet und optimiert im Labor von Dr. David Scadden. Die Finanzierung erfolgt durch das Dana Farber Cancer Institute / Massachusetts General Hospital Clinical Hämatologie und Onkologie Fellowship Program zur Verfügung gestellt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| DPBS (Dulbecco’s Phosphatgepufferter Salzlösung) | Mediatech, Inc. | 21-031-CV | |
| Steriles fetalen Kälberserum | Valley Biomedical, Inc. | BS3033 | |
| 0,5 M EDTA (pH 8,0) | Boston BioProducts | BM-150 | |
| Trypanblaulösung | Mediatech, Inc. | 25-900-CI | |
| ACK-Lysierungspuffer | Lonza Inc. | 10-548E | |
| Isopropranolol U.S.P. | Denison Pharmaceuticals, Inc | ||
| Vybrant DiD Zellmarkierungslösung | Invitrogen | V22887 | |
| Vybrant DiI Zellmarkierungslösung | Invitrogen | V22885 |
Referenzen
- Adams, G. B., et al. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor. Nature. 439 (7076), 599-603 (2006).
- Broxmeyer, H. E. Chemokines in hematopoiesis. Curr Opin Hematol. 15 (1), 49-58 (2008).
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Nachdrucke und Genehmigungen
