Die stomatogastrischen Nervensystems (Tln) des Jonah Krabbe ( C. borealis) Kann für die Elektrophysiologie, Immunhistochemie und Zellkultur-Studien verwendet werden. Die Tln-Extraktion ist in zwei Teile gemacht: die Brutto-und feinen Sezierung.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Cancer Borealis stomatogastrischen Nervous System Dissection
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die stomatogastrischen Ganglion (STG) ist ein ausgezeichnetes Modell für die Untersuchung zellulärer und Netzwerk-Interaktionen, da es eine relativ kleine Anzahl von Zellen (ca. 25 in C. borealis), die gut charakterisiert sind enthalten. Die Zellen in der STG zeigen eine breite Palette an Ausgängen und sind verantwortlich für die motorische Handlungen des Magens. Der Magen enthält die Magenmühle die bricht Essen mit drei internen Zähnen und dem Pylorus, die das Lebensmittel-Filter, bevor sie den Mitteldarm erreicht. Die STG stellt zwei rhythmische Ausgänge zu den Magenmühle und Pylorus als central pattern generators (CPG) bekannt zu kontrollieren. Jede Zelle in der STG kann in einem oder beiden dieser Rhythmen zu beteiligen. Diese Leitlinien erlauben für das Studium der Neuromodulation, Homöostase, Mobilfunk-und Netzwerk-Variabilität, Netzwerk-Entwicklung sowie Netzwerk Erholung.
Die Zerlegung der stomatogastrischen Nervensystems (Tln) aus dem Jonah Krabbe (Cancer borealis) ist in zwei Teile gemacht, die grobe und feine Dissektion. In der Brutto-Dissektion der gesamten Magen ist von der Krabbe seziert. Während der feinen Sezierung der Tln wird aus dem Magen mit einem Dissektionsmikroskop und Mikro-Dissektion-Tools (siehe Abbildung 1) extrahiert. Die Tln umfasst die STG, die ösophageale Ganglion (OG) und die kommissuralen Ganglien (CoG) sowie die Nerven, die die Bauchmuskulatur innervieren. Hier zeigen wir, wie eine komplette Zerlegung der Tln in Vorbereitung für eine elektrophysiologische Experiment, bei dem die Zellen in der STG von intrazellulär und der peripheren Nerven erfasst werden durchführen würde für extrazelluläre Ableitungen verwendet werden. Die richtige Technik für das Finden der gewünschten Nerven sowie unsere Technik der desheathing das Ganglion der Somata und Neuropil offenbaren gezeigt.
Protokoll
1. Gross Dissection
- Legen Sie eine Krabbe auf Eis für 30 Minuten zu langweilig die sensorischen und motorischen Systemen des Tieres. Surround es von allen Seiten mit Eis. Die Handschuhe sollten bei der Handhabung des Krabben werden.
- Bereiten Sie sich auf die Brutto-Dissektion durch Auslegen der Dissektion Pfanne und Werkzeuge, die Sie verwenden möchten. Rongeure sind Knochen schneiden Schere, eine kleine Schere, gezahnte Pinzetten, Spatel mit einem sich verjüngenden Rand, eine schwarze Sylgard-beschichtete Schale, und Insekten Pins benötigt werden.
- Entfernen Sie die Katze aus dem Eiskübel durch seine Hinterbeine, um es von nicht gequets....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Die Tln Dissektion ist der erste Schritt in der Durchführung einer elektrophysiologischen oder Immunhistochemie Experiment, oder zur Gewinnung von Zellen für die Zellkultur. Unabhängig von der beabsichtigten Experiment werden die Brutto-Dissektion bleiben unverändert. Allerdings können die feinen Sezierung variieren. Es ist wichtig, vor der Zeit, die Zellen und die Nerven Sie von Datensatz planen. Die meisten Neuronen in der STG haben Prozesse, die mindestens einen Muskel innervieren in den Magen (siehe Abbildung 2) und.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Danksagungen
Wir danken den Mitgliedern der Marder Lab. Wir danken unseren Berater, Dr. Eva Marder, für ihre Unterstützung und Ermutigung. Diese Arbeit wurde vom National Institute of Neurological Disorders and Stroke Grants NS-17813 und NS-058110 gefördert.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| Schwarzes Sylgard 170 | Sonstiges | Dow Corning | 170 | Grobe Dissektion |
| Feinschere | Chirurgie | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insektennadeln Größe 6 | Chirurgie | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo-Schere | Chirurgie | Fine Science Tools | 14110-17 | |
| Mikro-Spatel | Chirurgie | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | |
| Rongeuren | Chirurgie | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Gewebepinzette | Chirurgie | Fine Science Tools | 11021-12 | |
| Feiner Wolframdraht (0,001 in. Durchmesser) | Chirurgie | California Fine Wire Company | Feine Dissektion | |
| Pinzette #5 | Chirurgie | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Minuten-Nadeln | Chirurgie | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Moria-Federschere (7-mm-Klingen) | Chirurgie | Fine Science Tools | 15370-52 | |
| Petri-Schale (100×15 mm) | Sonstiges | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Nadelhalter | Chirurgie | Fine Science Tools | 26018-17 | |
| Ultrafeine Pinzette #5SF | Chirurgie | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | Sonstiges | Dow Corning | 182 | |
| Wolframnadeln | Chirurgie | Fine Science Tools | 10130-05 | |
| Dissektionsmikroskop | Mikroskop | Wild | MC3 | Verschiedenes |
| Jonah-Krabbe (C. borealis) | Tier | Commercial Lobster |
Referenzen
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , MIT Press. Boston. (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.<....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
