Objektiv Transplantation in Zebrafisch und ihre Anwendung in der Analyse von Eye-Mutanten

Zusammenfassung

Objektiv Entwicklung beinhaltet Wechselwirkungen mit anderen Geweben. Mehrere Zebrafisch Auge Mutanten sind durch eine abnormal kleine Linse Größe aus. Hier zeigen wir eine Linse Transplantation experimentieren, um festzustellen, ob dieser Phänotyp durch inneren Ursachen oder defekte Interaktion mit Gewebe, die das Objektiv umgeben ist.

Zusammenfassung

Das Objektiv spielt eine wichtige Rolle in der Entwicklung der Augenbecher ^[1,2]. Mit der Zebrafisch als Modellorganismus, können Fragen zur Linse Entwicklung angesprochen werden. Der Zebrafisch ist nützlich für genetische Studien durch mehrere vorteilhafte Eigenschaften, einschließlich der kleinen Größe, hohe Fruchtbarkeit, kurzen Lebenszyklus und Pflegeleichtigkeit. Objektiv Entwicklung erfolgt rasch im Zebrafisch. Um 72 HPF, ist die Zebrafisch-Objektiv funktionell ausgereift ^[3]. Reichlich genetischen und molekularen Ressourcen zur Verfügung stehen, die Forschung im Zebrafisch zu unterstützen. Darüber hinaus bietet die Ähnlichkeit der Zebrafisch-Auge mit denen anderer Wirbeltiere Grundlage für seine Verwendung als ein hervorragendes Tiermodell der menschlichen Mängel ^[4-7]. Mehrere Zebrafisch-Mutanten weisen Objektiv Anomalien, einschließlich hohe Zelltod, der in einigen Fällen zu einer vollständigen Degeneration der Linse Gewebe ^[8].

Um festzustellen, ob Objektiv Anomalien aufgrund von inneren Ursachen oder fehlerhafter Interaktionen mit dem umgebenden Gewebe, ist die Transplantation einer Mutante Objektiv in einem Wildtyp-Auge durchgeführt. Mit Feuer-poliertem Metall Nadeln, mutierte oder Wildtyp-Objektive sind sorgfältig aus dem Spendertier seziert, und in die Host. Zur Unterscheidung Wildtyp und Mutante Gewebe, ist eine transgene Linie als Spender verwendet. Diese Linie drückt Membran-gebundenen GFP in allen Geweben, einschließlich der Linse. Diese Transplantation Technik ist ein wichtiges Instrument in den Studien von Zebrafisch-Mutanten-Objektiv.

Protokoll

Teil 1: Vorbereitung der Embryonen

In diesem Protokoll werden wir die jj ^xy Symbol, um eine hypothetische Zebrafisch-Mutante Linse bezeichnen.

1. Zebrafisch-Stämme sind in Standard-Fisch-Anlage Bedingungen bei 28,5 C auf einem 14h light/10h Dunkel-Zyklus gehalten.
2. Am Abend statt Männchen und Weibchen der Zebrafisch-Stamm jj ^xy: AB / TU; tg (mGFP) in einem Tank mit einem Teiler, um sie voneinander zu trennen. Die Nachkommen dieser Kreuzung wird zum Ausdruck der GFP-Transgen in allen Geweben und wird als Spender verwendet werden. Parallel dazu verwenden die gleiche Prozedur, um Kreuz....

Diskussion

Mehrere Schritte erfordern besondere Aufmerksamkeit bei der Linse Transplantationen.

1. Geschärft Nadeln: Es ist besser, mehrere Nadeln vor der Durchführung Objektiv Transplantation vorzubereiten, und die Spitze der Nadeln sind so dünn wie möglich. Eine dickere Nadel reißt mehr Gewebe wegen seiner größeren Durchmesser, so dass ein Ausfall in die Augen zu heilen.
2. Die Anordnung der Embryonen: Kurz vor der Transplantation müssen die Embryonen Position, so dass sie auf ihren Seiten liegend sind. Bei der .......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Wolframdraht mit 0,1 mm Durchmesser	A Johnson Matthey	45086
Agarose (niedriger Schmelzpunkt)	Sigma-Aldrich	39346
Borosilikatglas-Kapillaren	World Precision Instruments, Inc.	TW 100-4
Pinzette	Dumont	11252-30
Pasteur-Pipette	Fisher Scientific	13-678-20C
Pipettierpumpe	Fisher Scientific	13-683C
Petri-Schale	Cardinal Health	D1906
Penicillin-Streptomycin	GIBCO, von Life Technologies	15140-122