Das Erreichen hoher Qualität und ausreichender Menge menschlicher Inselchen ist einer der führenden Voraussetzungen für eine erfolgreiche Inseltransplantation. In diesem Video, beschreiben wir Schritt für Schritt die Verfahren für die menschliche Inselzellen der Bauchspeicheldrüse Isolation (Teil II: Reinigung und Kultur der menschlichen Inseln) mit einer modifizierten automatisierte Methode.
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Methodenartikel
Menschliche Inselzellen der Bauchspeicheldrüse Isolation: Part II: Reinigung und Kultur der Menschenrechte Islets
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Management von Typ 1 Diabetes ist belastend, sowohl für den Einzelnen und die Gesellschaft, im Wert von über 100 Milliarden Dollar jährlich. Trotz der weit verbreiteten Verwendung von Glukose-Monitoring und neue Insulin-Formulierungen, viele Menschen immer noch zu entwickeln verheerenden Folgekomplikationen. Inselzellen der Bauchspeicheldrüse Transplantation kann bei normalen Blutzuckerspiegels bei Diabetes-Patienten wiederherstellen
Protokoll
1. Reinigung von kleinen Inseln
- So starten Sie die Insel Reinigungsverfahren, laden Sie die COBE Tasche, klemmen alle Rohre mit Ausnahme der grünen Röhre, und die Geschwindigkeit auf 1.500 und der Super-out auf 0 gesetzt.
- In der Haube Einrichten der Pumpe und Gradienten Bechern und verbinden Sie die Sammlung Schlauch an die grüne Röhre.
- Nun ist die Belastung des Ficoll 1,100 kann beginnen: push "spin" fügen Sie dann 110 ml Ficoll 1,100 bis vorne Becher, und starten Sie die Pumpe, um die COBE Tasche zu laden. Da die Ficoll eingelegt ist, drücken Super Out, stoppen Sie die Pumpe, ausspannen Pumpenkopf und stellen Sie die Super-out Geschwi....
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Diskussion
Trotz erheblicher Fortschritte in der Technik der menschlichen Inselzellen isoliert bleiben Insel Ertrag sehr variabel und unvorhersehbar. Die Reinigung der verdauten Pankreasgewebe ist entscheidend, um eine ausreichende Insel Masse nach erfolgreicher enzymatische Verdauung für die Transplantation zu erholen. Die UIC Reinigungsverfahren wird empfohlen, da eine höhere Gewinnung von hochreiner menschlichen Inselchen mit dieser Methode nachgewiesen wurde. Darüber hinaus können bis zu 50 ml verdaute Gewebe in einem einzigen.......
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Danksagungen
Unterstützt von der Gründung an der University of Illinois at Chicago sowie Inselzell Resource Center NIH (RFA-RR 05 bis 003), der Christopher-Stiftung, die Efroymson Foundation, und die Tellabs-Stiftung.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| Zentrifuge | Ausstattung | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Cobe 2991 Cell Processor | Ausstattung | Gambro. BCT | 2556 | Reinigung von Inseln |
| MZ6 Invertiertes Mikroskop TLBD4.1 | Ausstattung | Leica Microsystems | 4103 | |
| Zellkulturschale mit 2-mm-Raster | Ausstattung | Nalge Nunc international | 174926 | Zählung von Inseln |
| Digital Sight DS L1 | Ausstattung | Nikon Instruments | 217267 | |
| COBE-Beutel | Einwegausrüstung | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175-Kulturkolben | Einwegausrüstung | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| University of Wisconsin (UW)-Lösung | Reagenz | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s gepufferte Salzlösung (HBSS) | Reagenz | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | Reagenz | Bichrom AG | L6155 | |
| M199-Medien (Spüllösung) | Reagenz | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Endspülung/Kulturmedium | Reagenz | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| Dithizon | Reagenz | Sigma-Aldrich | D5130 |
Referenzen
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
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Nachdrucke und Genehmigungen
