Dies ist ein Verfahren zur Erzeugung gynogenetic diploid Zebrafischembryonen (Embryonen, deren einzige genetische Beitrag kommt von der Mutter) durch die Blockierung der zweiten Reifeteilung unmittelbar nach der Befruchtung mit UV-Licht-inaktivierten Sperma. EP Embryonen sind nicht vollständig homozygot durch Rekombination während der ersten meiotischen Teilung, aber sie sind homozygot überhaupt loci, die nicht von ihrem Zentromer wurden durch Rekombination getrennt.
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Methodenartikel
Machen Gynogenetic Diploid Zebrafisch von Anfang Druck
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Heterozygotie in diploiden Eukaryoten macht oft genetische Studien umständlich. Methoden, die lebensfähige homozygoten diploiden Nachkommen zu erzeugen direkt aus heterozygoten Weibchen ermöglichen F1 mutagenisierten Weibchen direkt für schädliche Mutationen gescreent werden in einem beschleunigten freuen genetische Bildschirm. Streisinger et al.
Protokoll
Übersicht der frühen Druck
Hinweis: Rezepte für viele der Reagenzien in diesem Protokoll wie Tricaine, Fisch Wasser und Hanks Kochsalzlösung verwendet sind online verfügbar in Kapitel 10 des Zebrafisch-Buch 3 ( http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html )
- Produce Embryonen durch künstliche Befruchtung mittels UV-inaktivierte Spermien.
- Unmittelbar Übertragung der befruchteten Eizellen zu einem Glasfläschchen (mit einer Kunststoff-Schnappdeckel) bis zum Rand gefüllt mit Ei Wasser. Decken Sie die offene Ende des Röhrchens mit einer dünnen Schicht von Latex u....
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Diskussion
Es ist wichtig, um sicherzustellen, dass Embryonen nach diesem Verfahren hergestellten wahre gynogenetic Diploiden sind. Als Kontrollen erzeugen eine Kupplung von normalen diploiden Eier (indem sie beiseite einige der Spermien ohne UV-Inaktivierung) und eine Kupplung von haploiden Embryonen (indem sie beiseite ein Gelege von Eiern mit UV Spermium befruchtet, ohne durch die EP-Verfahren). An 1 Tag nach der Befruchtung haploide Embryonen haben einen kurzen Körper Achse, unregelmäßige Gehirn und Somiten Morphologie. Haploi.......
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Danksagungen
Verfahren zur in-vitro-Fertilisation und gynogenetic Diploiden wurden Zebrafisch von Charline Walker in George Streisinger Labor an der University of Oregon in den 1970er und 1980er Jahren entwickelt. Die hier beschriebene Methode ist unverändert von Charline die Protokolle, die verfügbar sind in voller Höhe in der Zebrafisch Book 3.
Verfahren zur in-vitro-Fertilisation und gynogenetic Diploiden wurden Zebrafisch von Charline Walker in George Streisinger Labor an der University of Oregon in den 1970er und 1980er Jahren entwickelt. Die hier beschriebene Methode ist unverändert von Charline die Protokolle, die verfügbar sind in v....
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Tricain | Sigma-Aldrich | ||
| Uhrglas | |||
| Französische Presse | |||
| Druckzylinder | |||
| Instant Ocean | |||
| Pasteur-Pipetten | Schneiden Sie das enge Ende ab und glühen Sie es an | ||
| UV-Vernetzungsgerät | |||
| Haarnadelkapillaren |
Referenzen
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Weste....
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Nachdrucke und Genehmigungen
