Methodenartikel

Dissection von 6,5 dpc muriner Embryonen

DOI:

10.3791/160

⸱

25. Februar 2007

 , 
1Massachusetts General Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Isolation der Einnistung-Embryonen erlaubt es, Gen-Mustern zu studieren und zu analysieren Zell-Linie Entscheidungsprozesse während der embryonalen Entwicklung, aber richtigen Zergliederung des frühen Embryos kann schwierig sein. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Isolierung von Anfang primitive-Streifen-Embryonen (~ 6,5 Tage post coitum [DPC]).

Zusammenfassung

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Die Analyse der Genexpression während der frühen Stadien der embryonalen Entwicklung von Säugetieren kann wichtige Hinweise auf die Funktion von Genen, Zell-Zell-Interaktion und Signalisierung Mechanismen, die Führung embryonalen Musterbildung. Allerdings kann Dissektion der Maus-Embryo aus der Dezidua kurz nach der Implantation eine herausfordernde Prozedur sein, und detaillierte Schritt-für-Schritt-Dokumentation dieses Prozesses fehlt.

Hier zeigen wir, wie nach der Implantation (6,5 DPC) Embryonen, indem Sie zuerst Sezieren der Gebärmutter einer schwangeren Maus (Erkennung des vaginalen Stecker wurde als Tag 0,5 Poist coitum) und anschließend seziert der Embryo vom mütterlichen Dezidua isoliert sind. Die Zerlegung der Reichert-Membran ist ebenso wie die Entfernung der ectoplacental Kegel beschrieben.

Protokoll

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Dissection der Geschlechtsorgane aus einer weiblichen Maus

  1. Trächtige Tiere werden durch CO 2 Ersticken mit Druckgas eingeschläfert.
  2. Legen Sie das Tier in Rückenlage auf saugfähige Unterlage und legen Sie ihn in 70% Ethanol, um das Risiko einer Kontamination der Präparation mit Maus Haare zu reduzieren.
  3. Pinch die Haut und machen Sie einen kleinen seitlichen Einschnitt an der Mittellinie mit regelmäßigen chirurgische Scheren. Halten Sie die Haut fest oberhalb und unterhalb des Schnittes und ziehen die Haut auseinander auf den Kopf und Schwanz auf den Bauch freizulegen.
  4. Fassen Sie das Bauchfell mit einer Pinzette und sc....

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Diskussion

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Einnistung in der Maus tritt zwischen 4,5 DPC und Geburt. Diese Zerlegung Verfahren kann angewendet werden, im wesentlichen wie beschrieben, werden früher oder später zu isolieren Embryonen bei 5,5-8,5 dpc.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Feine chirurgische Pinzette, gezahnt, geradeWerkzeugRoboz Surgical Instruments Co.RS-51302 Paar
Feine chirurgische Pinzette, Typ #55 INOXWerkzeugRoboz Surgical Instruments Co.RS-50102 Paar
Dulbecco’s Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (1x)ReagenzInvitrogen14190
Fisherbrand sterile Petrischale aus PolystyrolWerkzeugFisher Scientific08-757-12
4 % Paraformaldehyd in PBSReagenz
Gerade, scharfe Dissektions-SchereWerkzeugFisher Scientific08-940
Schwangere weibliche MäuseTier
DissektionsmikroskopMikroskop

Referenzen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).
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Schlagwörter

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