Dieser Artikel veranschaulicht die floral-dip-Methode der Agrobacterium tumefaciens-Vermittelte Transformation von Arabidopsis thaliana. Durch die Einführung eines Zellzyklus-regulierten Promotor-Reporter PTSO2: β-Glucuronidase (GUS), In Arabidopsis, Zeigt uns, wie man GUS-Reporter Expression in transgenen Keimlinge erkennt.
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Methodenartikel
Floral-dip Transformation von Arabidopsis thaliana Zum Untersuchen PTSO2: β-Glucuronidase Reporter Gene Expression
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Fähigkeit, fremde Gene in einen Organismus einbringen ist das Fundament für die moderne Biologie und Biotechnologie. In das Modell blühende Pflanze
Protokoll
I. Floral-dip Transformation von Arabidopsis thaliana
- Etwa 1 Monat vor der Transformation, säen Arabidopsis Samen auf 4 bis 8 Töpfe (5 Zoll Vierkant-Töpfe) mit ca. 10-15 Pflanzen pro Topf. Für Anlagen mit normaler Fruchtbarkeit, werden 4 Töpfe mit Pflanzen pro Plasmid-Konstrukt ausreichend sein. Wenn man mutierte Arabidopsis mit reduzierter Fruchtbarkeit zu verwandeln, erhöhen Sie die Anzahl der Töpfe entsprechend.
- Die Pflanzen werden unter Standard-Bedingungen (16 Stunden Licht und 8 h Dunkelheit bei 22 ° C) gewachsen. Wenn Pflanzen unter kürzeren Tag oder niedrigere Temperatur gezüchtet werden, werden sie länger dauer....
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Diskussion
Die Effizienz der Transformation wird durch viele verschiedene Faktoren, die im Folgenden diskutiert bestimmt:
- Die Gesundheit der Pflanzen und deren Alter von primärer Bedeutung sind. Etwa einen Monat alten Anlagen zur Produktion von zahlreichen unreifen Blütenknospen sind ideal. Trimmen Sie primäre Triebe zu fördern sekundären Sproßbildung 3-4 Tage vor der Transformation erhöht Transformationseffizienz. Ältere Pflanzen werden steigen, um Transformanten zu geben, sondern zu einem niedrigeren Zinssatz. .......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Wir danken Chunxin Wang für den Bau pTSO2:: GUS und für Fotos in Abbildung 1, Detlef Weigel für die gemeinsame Nutzung der GUS-narrensicher Protokoll, Paja Sijacic und Courtney Hollender für hilfreiche Kommentare. Research in Z. L s Labor ist von der US National Science Foundation (IOB0616096 und MCB0744752) unterstützt. ZL wird teilweise durch die University of Maryland Agricultural Experiment Station unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 6-Benzyladenin | Sigma-Aldrich | 852430 | |
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxisch, Handschuhe tragen | |
| Murashige-und-Skoog-Basalmedium (MS) | Sigma-Aldrich | M5519 | |
| Vitaminalösung nach Gamborg’s, 1000fach konzentriert | Sigma-Aldrich | G1019 | |
| X-Gluc (5-Brom-4-chlor-3-indolyl-β-D-glucuronid-Cyclohexamin-Salz) | Biosynth International, Inc | B-7300 | Toxisch, lichtempfindlich, im Dunkeln aufbewahren |
| Micropore 3M-Klebeband | Fisher Scientific | 19027761 |
Referenzen
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J....
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Nachdrucke und Genehmigungen
