Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit der Bestimmung und allgemeinen Empfehlung der chinesischen Gesetzgebung zur Verwaltung von Versuchstieren durchgeführt und von der Institution of Animal Care and Use Committee der Capital Medical University genehmigt (Ref-Nr. AEEI-2014-052). Es wurden weibliche Balb/c-Mäuse im Alter von 6 bis 8 Wochen verwendet.
1. Vorbereitung der Zellen und Tiere
- Einen Tag vor der Operation rasieren Sie die Haare um die vierte Brustwarze, um den Operationsbereich freizulegen.
- Halten Sie die Maus mit einer Hand fest auf der Rückseite, um sicherzustellen, dass sich die Maus nicht frei bewegt, drehen Sie die Maus hoch, um ihren Bauch dem Bediener zu zeigen, und rasieren Sie dann mit einer anderen Hand das Fell um die vierte Brustwarze mit einem elektronischen Rasierer.
- Tragen Sie eine dünne Schicht Haarentfernungscreme 30 - 60 s lang auf die Brustwarzen auf, reinigen Sie die Creme mit destilliertem Wasser und trocknen Sie die Maus dann mit weichem Papier.
- Am Tag der Operation werden murine Brustkrebszellen (4T1-luc2) entnommen, die Zellzahl gezählt und die Zelldichte auf 2 x 105 Zellen/ml in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) in sterilen Mikrozentrifugenröhrchen eingestellt und auf Eis gelegt. Für jede Maus werden 1 x 104 Zellen/50 μl in einer 1-ml-Spritze hergestellt.
2. Orthotope Injektion
- Anästhesie von Mäusen
- Anästhesie einleiten. Legen Sie die Mäuse in einen geschlossenen durchsichtigen Behälter und schalten Sie 2%iges Isoflurangas ein, um die Mäuse etwa 5 Minuten lang zu betäuben, bis sie sich alle hinlegen und einschlafen.
- Halten Sie die Anästhesie aufrecht. Übertragen Sie die Mäuse aus dem Behälter in einzelne Anästhesiemasken, tragen Sie etwas Tiersalbe auf ihre Augen auf, um Trockenheit zu vermeiden, halten Sie die Mäuse mit ihren Brustwarzen dem Bediener ausgesetzt und lassen Sie sie einige Minuten lang weiter Isoflurang inhalieren, bis die Injektion durchgeführt wurde.
- Bestätigen Sie den Erfolg der Anästhesie durch das Fehlen eines Zehenkneif-Rückzugsreflexes.
- Tragen Sie eine Augensalbe auf die Augen der Mäuse auf, um Augentrockenheit zu verhindern.
HINWEIS Abhängig von der Behältergröße und der Anzahl der zur Verfügung stehenden Einzelanästhesiemasken kann eine Gruppe von Mäusen gemeinsam betäubt und nacheinander unter Einzelanästhesie injiziert werden.
- Leistung der Injektion
- Spanne mit einer Hand die Haut um den vierten Sauger mit einer Pinzette fest, um einen angehobenen "Tunnel" zu schaffen, dem die Spritze folgen kann. Halten Sie die Spritze mit der anderen Hand nach oben, um die Nadel subkutan in einem Abstand von 5 - 10 mm von der Brustwarze in die Haut einzudringen. Folgen Sie dann dem "Tunnel", bis die Nadelspitze in die Nähe der Brustwarze kommt, schieben Sie die Nadelspitze vorsichtig nach oben in das Brustfettpolster, bis das Nadelöhr unter die Brustwarzenspitze kommt, entsorgen Sie die Pinzette und injizieren Sie die Zellen langsam.
- Drehen Sie die Nadel ein wenig um und ziehen Sie die Spritze langsam zurück; drücken Sie mit einem Wattestäbchen die Nadelwunde 10 - 20 s lang, um sicherzustellen, dass keine Flüssigkeit austritt.
- Beobachten Sie den vierten Nippel, um eine erfolgreiche Injektion zu bestätigen: Eine weiße, durchsichtige flache Kugel mit dem Nippel in der Mitte ist zu sehen (Abbildung 1).
- Halten Sie die Mäuse eine weitere Minute lang narkotisiert, um zu vermeiden, dass sich die Mäuse erholen und sich zu schnell bewegen, was dazu führt, dass sich die Injektionswunde öffnet und die Tumorzellen austreten.
Abbildung 1: Bilder vor und nach der orthotopen Injektion am Brustfettpolster von weiblichen Balb/c-Mäusen. Die Operation wurde durchgeführt, und die Bilder wurden aufgenommen, während die Mäuse unter Isofluran-Anästhesie standen. A, vor der Injektion, B, nach der Injektion.
