Hell-Dunkel-Präferenztest: Eine Methode zur Untersuchung von Angstverhalten bei Zebrafischen

Abstract

Quelle: Holcombe, A., et al. Eine neuartige Methode zur Verabreichung von Medikamenten an mehrere Zebrafische (Danio rerio) und die Quantifizierung des Entzugs. J. Vis. Exp.(2014)

Das Video beschreibt den Hell-Dunkel-Präferenz-Assay, um das angstbezogene Verhalten bei Zebrafischen nach der Exposition gegenüber Ethanol zu untersuchen.

Protocol

1. Verhaltenstests

1. Besorgen Sie sich eine Hell-Dunkel-Arena mit einer Breite von 9,5 cm, einer Länge von 55 cm und einer Tiefe von 9,5 cm mit einem weißen, wasserdichten Boden (Abbildung 1B). Befestigen Sie weißes und schwarzes, wasserfestes, nicht reflektierendes Papier mit Klettverschluss an den Innenwänden der Arena, wobei die Hälfte der Arena weiß und die andere Hälfte schwarz bedeckt ist. Füllen Sie die Arena bis zu einer Tiefe von 5 cm mit 25-28 °C warmem Habitatwasser. Halten Sie diese Temperatur während des gesamten Tests.
2. Minimieren Sie äußere visuelle Reize, indem Sie eine weiße dreiseitige Umzäunung für die Arena konstruieren. Stellen Sie sicher, dass der Testbereich über eine diffuse Deckenbeleuchtung verfügt, die keine Reflexionen auf der Wasseroberfläche verursacht, aber dennoch hell genug für die Bewegungsverfolgungssoftware oder die nachträgliche manuelle Quantifizierung von Videobildern ist.
3. Stellen Sie die Arena in das Gehege und stellen Sie die Aufnahme- und Bewegungsanalyseparameter der Verhaltensverfolgungssoftware ein. Stellen Sie die Testdauer je nach Forschungsfrage auf 5-15 Minuten ein.
   HINWEIS: Hier haben wir 5 Minuten verwendet.
4. Transportieren Sie die zu testende Fischgruppe zum Forschungsbereich im Habitatbecken und setzen Sie sie außerhalb des Arenageheges ab. Den Fisch 10 Minuten akklimatisieren.
5. Ziehen Sie einen Fisch aus der entsprechenden Gruppe vorsichtig ins Netz und platzieren Sie ihn in der Mitte der Hell-/Dunkel-Arena, wobei Sie darauf achten müssen, den Fisch freizulassen, wenn er parallel zur Längsachse der Arena positioniert ist, um zu vermeiden, dass der Fisch in den hellen oder dunklen Bereich gedrängt wird.
6. Beginnen Sie sofort nach dem Loslassen des Tieres mit der Aufzeichnung des Verhaltens. Achten Sie auf Softwareprobleme beim Verfolgen des Fisches oder auf das Springen oder Einfrieren von Fischen. Drehen Sie die Arena um 180°, nachdem die Hälfte der Probanden getestet wurde, um Verwirrungen aufgrund von Verzerrungen zu vermeiden, die sich daraus ergeben, dass das Ende der Arena auf das offene Ende des Geheges ausgerichtet ist.
7. Nachdem der Versuch beendet ist, netzen Sie die Fische vorsichtig ein und bringen Sie sie aus der Arena in ein Auffangbecken oder Lebensraumbecken.

2. Analyse

1. Untersuchen Sie die Zeit, die Sie in hellen und dunklen Zonen verbringen. Für jede Gruppe und jeden Fisch ermitteln Sie die relative Zeit, die in der hellen und dunklen Zone verbracht wurde, und analysieren Sie mit einem t-Test bei einer Stichprobe (oder Wilcoxon-Rangtest mit Vorzeichen für nichtparametrische Daten; Differenz von (der Hälfte der gesamten Versuchszeit) 150 Sekunden), um festzustellen, ob Gruppen einen Bereich signifikant gegenüber dem anderen bevorzugen.
2. Um Präferenzen zu vergleichen, berechnen Sie einen Präferenzindex, indem Sie die Zeit, die Sie in der hellen Zone verbringen, von der Zeit in der dunklen Zone subtrahieren und vergleichen Sie die Unterschiede zwischen den Gruppen. t-Tests können verwendet werden, um zwei Gruppen zu vergleichen. Vergleichen Sie mehrere Gruppen mit einer unidirektionalen Varianzanalyse, bei Bedarf unter Verwendung des HSD-Post-hoc-Tests von Tukey (oder des Kruskal-Wallis-Tests mit dem Post-hoc-Test des Mehrfachvergleichs von Dunn für nichtparametrische Daten).
3. Vergleichen Sie Geschwindigkeit, Anzahl der Zonenübergänge, Mäander und Immobilität zwischen Gruppen. Verwenden Sie bei Bedarf eine unidirektionale Varianzanalyse unter Verwendung des HSD-Post-hoc-Tests von Tukey (oder des Kruskal-Wallis-Tests mit dem Post-hoc-Test des Mehrfachvergleichs von Dunn für nichtparametrische Daten).

Results

Abbildung 1: Transferprozedur und die Hell/Dunkel-Arena. Diese Fotos veranschaulichen den Transfervorgang. (A) Zuerst befinden sich die Fische im Transferbecken (links). Ein Dosierbehälter mit Ethanol ist abgebildet (rechts). (B-C) Um den Fisch aus dem Transfertank in die Ethanollösung zu bewegen, muss der Forscher den Laicheinsatz aus dem Transfertank in den Ethanollösungstank heben....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Hell/Dunkel Arena	Gewohnheit		Konstruieren Sie gemäß Verfahrensbeschreibung. 9,5 cm breit, 9,5 cm tief, 55 cm lang.
Tischgehäusesystem mit drei Einlegeböden	Aquatische Lebensräume	N/A
1,5 L Ablaichbecken mit 400 μm Prallwand	Aquatische Lebensräume	N/A
Ethovision XT Motion-Tracking-Software	Noldus Informationstechnologie
Reines Getreide-Ethanol	Luxco, INC	N/A