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Larven-Lokomotions-Assay: Hochdurchsatzmethode zur Untersuchung der neurologischen Verhaltenstoxizität einer Verbindung in Zebrafischlarven

April 30th, 2023

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Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Zhang B., et al. Untersuchung der Auswirkungen von Umweltschadstoffen auf das Verhalten von Zebrafischlarven. J. Vis. Exp. (2020)

Dieser Artikel beschreibt die Verhaltensreaktion von Zebrafischen auf toxische Verbindungen, indem er die Fortbewegung der Larven überwacht. Das Protokoll befasst sich außerdem mit einem Beispiel für die Reaktion von Zebrafischlarven auf Umweltschadstoffe.

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Vorbereitung auf den Verhaltenstest

  1. Übertragen Sie 800 μl Expositionslösung in jede Vertiefung der 48-Well-Mikroplatte.
    Anmerkung: Verwenden Sie 16 Wells für jede Gruppe (d. h. die Kontrolllösung, 5 μg/l und 50 μg/l Gruppe).
  2. Verwenden Sie eine 1-ml-Pipettenspitze, um 200 μl Expositionslösung mit einer Larve aus der Glas-Petrischale in eine Vertiefung der 48-Well-Mikroplatte zu übertragen.
  3. Übertragen Sie 4 ml Expositionslösung in jede Vertiefung der 6-Well-Mikrotiterplatte.
    Anmerkung: Verwenden Sie für jede Gruppe eine 6-Well-Mikroplatte.
  4. Verwenden Sie eine 1-ml-Pipettenspitze, um 200 μl Expositionslösung mit zwei Larven in jede Vertiefung der 6-Well-Mikroplatte zu übertragen.
    Anmerkung: Jede Gruppe hat sechs sich wiederholende Gruppen.
  5. Stellen Sie sicher, dass die Temperatur des Prüfraums 2 h vor dem Test 28 °C beträgt.
    Anmerkung: Verhaltenstests werden in der Regel am Nachmittag durchgeführt.

2. Prüfung der Fortbewegung und des Wegwinkels

  1. Speichern Sie das Protokoll und schalten Sie das Licht im Testraum aus.
  2. Akklimatisieren Sie die Larven für 10 Minuten im System und klicken Sie nacheinander auf die Schaltfläche "Experiment" "Ausführen", wählen Sie dann den Ordner aus, in dem die Versuchsdateien gespeichert sind, und geben Sie den Namen des Ergebnisses ein.
  3. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Hintergrund" "Start", um den Test zu starten.
  4. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Experiment" "Stopp", um das Experiment zu stoppen, wenn der Test endet.
    Anmerkung: Das System zeigt die getesteten Daten an, wenn das System stoppt. Die Daten umfassen die verfolgte Strecke in drei Geschwindigkeitsklassen und Wegwinkelzahlen in acht Winkelklassen pro Minute. Für den Fortbewegungstest im vorgestellten Beispiel wird die Gesamtstrecke in jeder Lichtperiode (10 min) berechnet und die Differenz zwischen der Kontrollgruppe und den Behandlungsgruppen verglichen.
  5. Übertragen Sie die 48-Well-Mikroplatte für andere Experimente zurück in den Lichtinkubator.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
48-Well-Mikroplatte Corning 3548Embyros Gehäuse
6-Well-Mikroplatte Corning Artikel-Nr.: 3471Embyros Gehäuse
Zebrabox Aussichtspunkt ZebraBox Instrument für Verhalten
ZebraLabor Aussichtspunkt ZebraLabor Verhaltenssoftware
Pipette Eppendorf 3120000267Transfer-Lösung
kg

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Zebrafish LarvaeLocomotion AssayNeurobehavioral ToxicityEnvironmental PollutantHigh Throughput MethodBehavioral TestingLight Dark CycleDistance TraveledCompound Exposure48 Well Plate

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