0 Aufrufe • 2:52 Min. • April 30th, 2023
- Zu Beginn züchten Sie die Embryonen in 3 Petrischale. Die erste ist eine Kontrollplatte, die Hanks Lösung enthält - eine ausgewogene Salzlösung. Die zweite und dritte Platte enthalten Hank-Lösung mit einer potenziell neurotoxischen Verbindung in unterschiedlichen Konzentrationen.
Die neurotoxische Verbindung in der Expositionslösung dringt durch passive Diffusion in die äußere Membran der Embryonen ein und verändert die Prozesse des Nervensystems wie Aufmerksamkeit, Koordination und Muskelaktivität. Sobald sich die Embryonen zu Larven des entsprechenden Alters entwickelt haben, wird jede Larve in eine einzelne Vertiefung mit einer 48-Well-Platte übertragen. Behalten Sie den Überblick über den Behandlungszustand für jedes Tier.
Übertragen Sie die Well-Platte auf eine Aufnahmeplattform und ziehen Sie die Abdeckung herunter. Lassen Sie die Larven 10 Minuten lang akklimatisieren. Stellen Sie mit der Software abwechselnde Zyklen von Hell- und Dunkelperioden ein.
Zebrafischlarven zeigen normalerweise mehr Bewegung im Dunkeln und weniger Bewegung im Licht. Erfassen Sie die Gesamtstrecke, die die Larven der Kontrolle und die Expositionsgruppen in jedem Zeitraum zurückgelegt haben. Ist die Verbindung neurotoxisch, zeigen Larven im Dunkeln und im Licht noch mehr Bewegung als Kontrolltiere.
Im folgenden Protokoll werden wir Verhaltenstests an den Zebrafischlarven durchführen, die neurotoxischen Verbindungen ausgesetzt waren.
- Stellen Sie mindestens 2 Stunden vor der Durchführung eines Experiments die Raumtemperatur auf 28 Grad Celsius ein und geben Sie 800 Mikroliter Expositionslösung in jede Vertiefung einer 48-Well-Mikroplatte. Verwenden Sie dann eine 1-Milliliter-Pipette mit einer modifizierten Spitze, um eine Larve in 200 Mikrolitern Expositionslösung in jede Vertiefung der Mikroplatte zu übertragen, um ein Fortbewegungs- und Wegwinkelexperiment vorzubereiten.
Wenn alle Parameter eingestellt sind, schalten Sie die Beleuchtung im Testraum herunter und lassen Sie die Larven 10 Minuten lang im System akklimatisieren. Klicken Sie am Ende der Eingewöhnungsphase auf Experimentieren und Ausführen und erstellen Sie den Ordner, in dem die experimentellen Dateien gespeichert werden sollen. Geben Sie dann den Ergebnisnamen ein und klicken Sie auf Hintergrund und Start.
Klicken Sie am Ende des Experiments auf Experiment und Stopp. Anschließend wird die 48-Well-Mikroplatte für nachfolgende Experimente wieder in den Lichtinkubator zurückgebracht.