Agar-Einbettung: Eine grundlegende Methode zur Einbettung lebender Zebrafisch-Embryonen für die Langzeitbildgebung

Abstract

Quelle: Hagedorn E. J., et al. Erzeugung von parabiotischen Zebrafischembryonen durch chirurgische Fusion von sich entwickelnden Blastulae. J. Vis. Exp. (2016).

Dieses Video beschreibt Schritt für Schritt eine Anleitung zum Montieren von lebenden Zebrafischembryonen auf einer 6-Well-Platte mit niedrigschmelziger Agarose. Es bietet auch die Möglichkeit, Bilder von lebenden Embryonen zu erfassen und sie mit Hilfe von Software zu analysieren.

Protocol

>1. Mikroskopeinrichtung, Bildaufnahme, -verarbeitung und -analyse

1. 0,8 % Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt (LMP) zubereiten: 0,8 g LMP Agarose auf 100 ml E3 geben und erhitzen, bis sie sich vollständig aufgelöst hat. Im heißen Zustand aliquotiert 1 ml LMP-Agarose in 1,5 ml Mikrofuge-Röhrchen in einem 37 °C heißen Heizblock. Die LMP-Agarose bleibt bei 37 °C geschmolzen. Geben Sie 40 μl 4 mg/ml (25x), pH 7,0 Tricain zu jedem 1 ml Aliquot LMP-Agarose bei 37 °C. HINWEIS: Wenn Sie mit einem pigmentierten Stamm arbeiten, fügen Sie 20 μl 0,15 % (50x) PTU zu jedem 1 ml Aliquot hinzu.
   1. Die restliche LMP-Agarose wird mehr....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
LMP Agarose (Hochreine LMP Agarose)	Invitrogen	16520100
Tricain (Pulver) (Tricain, Methansulfonato, Tricain-S)	Western Chemical Inc	MS 222
6-Well-Platten mit Glasboden für die Bildgebung	MatTek	P06G1.5-20-F
10 ml Pipettenpumpe (grün) (Pipettenpumpe Pipettor)	Novatech International	Nr. F37898-0000