Elektrophysiologie adulter Zebrafische: Eine Methode zur Messung der extrazellulären elektrischen Aktivität von Neuronen in vivo

Zusammenfassung

Quelle: Johnston, L., et al. Elektrophysiologische Aufzeichnung im Gehirn von intakten erwachsenen Zebrafischen. J. Vis. Exp. (2013)

Das Protokoll beschreibt das Verfahren zur Durchführung der Elektrophysiologie bei erwachsenen Zebrafischen. Diese Methode kann zur Messung der neuronalen Aktivität in vivo verwendet werden.

Protokoll

1. Elektrophysiologie

1. Schalten Sie den Intubationshahn aus und lösen Sie schnell den Luer-Lock, der die Intubationsbasis mit dem Tricain-Tropf verbindet.
   1. Verschieben Sie das intakte Intubationssetup in das elektrophysiologische Mikroskop und schließen Sie es an das Perfusionssystem an.
   2. Schalten Sie das Habitatwasser ein und perfundieren Sie mit einer Geschwindigkeit von 1 ml/min für ~1 Stunde, um das Tricain auszuwaschen.
2. Positionieren Sie die Sekundärelektrode mit einem Mikromanipulator unter visueller Kontrolle so, dass die Elektrodenspitze in das Nasenloch des Tieres oder in die Vertiefung hinter dem Oberkiefer eingeführt werden kann.
3. Führen Sie die Primärelektrodennadel in die Kraniotomieöffnung ein. Führen Sie die Nadel so in das Gewebe ein, dass die Spitze ziemlich oberflächlich innerhalb des optischen Tectums positioniert ist.
   1. Wenn die Elektrode zu tief ist, kann das elektrische Signal klein sein.
4. Erfassen und analysieren Sie die aufgezeichnete elektrische Differenz zwischen der primären und der sekundären Referenzelektrode. Dieser Prozess wird es ermöglichen, extrazelluläre Aufzeichnungen zu erhalten.
   1. Sammeln Sie die Daten im lückenlosen Modus mit einer Abtastrate von 5 kHz, mit einem Tiefpassfilter von 0,1 kHz und einem Hochpassfilter von 1 Hz.
   2. Beginnen Sie erst mit der Aufzeichnung der elektrophysiologischen Aktivität, wenn das Wasser des Lebensraums mindestens 45 Minuten lang durchblutet ist.
   3. Zeichnen Sie mindestens 15 Minuten vor der Zugabe von experimentellen Arzneimitteln eine Grundlinie der nativen Aktivität auf. Beginnen Sie die Perfusion mit experimentellen Medikamenten Ihrer Wahl und zeichnen Sie sie für die gewünschte Zeit auf. Bei gesunden Präparaten ist es möglich, die neurologische Aktivität für 2-3 Stunden aufzuzeichnen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Lebensraum Wasser			pH 7,0-7,4, Leitfähigkeit von 400-450 μS; gepflegt von Instant Ocean und Natriumbicarbonat
0,4% Tris-gepuffertes Tricain	Sigma-Aldrich	Nr. E10521	pH 7,2-7,4; gelagert bei -20 oC
60 ml Luer-Lock-Spritzenröhrchen	Becton, Dickinson und Co.	309653
3-Wege-Hähne mit Luer-Anschlüssen
0,010 Zoll Silberdraht	A-M Systems, Inc.
Elektrodenhalter der Q-Serie
Fisherbrand 100 mm x 15 mm Petrischale	Fisher Scientific	NC9299146
34 g abgeschrägte Nadel	World Precision Instruments, Inc.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Kimberly-Clark Professional	TW31KEM
Rohr mit einem Durchmesser von 1/8 Zoll
Rohr mit 1 mm Durchmesser
Mikroskop (Leica MZ APO)	Ein anderes Mikroskop kann verwendet werden