im lebenden Organismus Elektroporation: Eine ortsspezifische Methode zur Transfektion von Zebrafischen

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Durovic, T., et al. Elektroporationsmethode für die In-vivo-Verabreichung von Plasmid-DNA im adulten Zebrafisch Telencephalon. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt die in vivo Elektroporation, eine Technik zur DNA-Abgabe in Ependymogliazellen bei erwachsenen Zebrafischen.

Protokoll

1. Elektroporation

Nehmen Sie den Fisch aus der Injektionsanlage, während Sie ihn noch im Schwamm halten.
Tauchen Sie die Innenseite der Elektrodenspitze in das Ultraschallgel.
Decken Sie das Fisch-Telencephalon mit einer kleinen Menge Ultraschallgel ab.
Positionieren Sie den Fischkopf zwischen den Elektroden, wobei Sie die positive Elektrode an der ventralen Seite des Fischkopfes und die negative Elektrode an der Rückenseite platzieren (Abbildung 1C), während Sie den Körper des Fisches weiterhin im Schwamm halten. Dies legt die Richtung des Stromflusses fest, der erforderlich ist, um die in der subventrikulären Zone positionierten Ependymoglia zu elektroporieren.
Drücken Sie die Elektroden sanft und präzise gegen das Telencephalon (Abbildung 1 C). Verwalten Sie den Strom mit dem Fußpedal. Halten Sie die Elektroden an Ort und Stelle, bis alle fünf Impulse beendet sind.

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Schematische Darstellung des koronalen Schnitts des umgestülpten Zebrafisch-Telencephalons. (A) Schema eines koronalen Schnitts des Zebrafisch-Telencephalons, wobei die Position der Ependymogliazellen hervorgehoben wird, die die ventrikuläre Oberfläche auskleiden und die ventrale Ventrikelwand bilden. Die dorsale Ependymschicht überbrückt die beiden Hemisphären und bedeckt den Ventrikel (...