1. Experimentelle M. marinum-Infektion mit intraperitonealer Injektion
<ol>
	<li>Pipettieren Sie einen 5-μl-Tropfen der verdünnten Bakterienlösung auf ein Stück Parafilmfilm und ziehen Sie den Tropfen in eine 30-G-Insulinnadel.</li>
	<li>Für das Experiment werden 5–8 Monate alte Wildtyp-Fische und rag1−/−hu1999-Mutantenfische verwendet. Betäuben Sie erwachsene Zebrafische im Aquarienwasser mit 0,02% 3-Aminobenzoesäureethylester (pH 7,0). Den Fisch mit der Bauchseite nach oben in einen Schlitz auf einem feuchten, geschäumten Kunststoff legen. 
	HINWEIS: Rag-/- mutierte Fische sind nicht in der Lage, somatische Rekombination zu durchlaufen und funktionelle T- und B-Zellen zu produzieren.</li>
	<li>Spritzen Sie die Nadel in einem Winkel von ca. 45° zwischen die Beckenflossen. Halten Sie die Nadelöffnung nach oben, um zu beobachten, dass sich die gesamte Öffnung in der Bauchhöhle befindet. Injizieren Sie die Bakteriensuspension langsam und entfernen Sie vorsichtig die Nadel. 
	Anmerkung: Falls der rote Tracer bei der Injektion aus dem Fisch austritt, ist der Fisch vom Versuch auszuschließen.</li>
	<li>Setzen Sie den Fisch sofort nach der Injektion in einen Auffangbehälter mit frischem Aquarienwasser um.</li>
	<li>Entnehmen Sie alle 15 Minuten Proben der Bakteriensuspension auf 7H10-Platten von dem verwendeten Bakterienaliquot und inkubieren Sie die Bakterien 5 Tage lang bei 29 °C und überprüfen Sie die Infektionsdosis, indem Sie die Kolonien auf den Platten zählen.</li>
	<li>Überprüfen Sie regelmäßig das Wohlbefinden der Fische und euthanasieren Sie alle Fische mit Symptomen der Infektion mit einer Konzentration von mehr als 0,02 % 3-Aminobenzoesäureethylester (pH 7,0). 
	Anmerkung: Ungefähr 7 % der erwachsenen Zebrafische, die mit 34 ± 15 KBE infiziert sind, und 30 % der Zebrafische, die mit 2029 ± 709 KBE infiziert sind, haben nach 8 Wochen Symptome gezeigt. Zu den Symptomen können abnormales Schwimmen, mangelnde Reaktion auf Berührungen, Keuchen, Ödeme oder beobachtbare Auszehrung gehören.</li>
	<li>Pflegen Sie den Zebrafisch nach den gängigen Normen.</li>
</ol>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="immer">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mycobacterium marinum </td>
			<td>Sammlung amerikanischer Schriftkultur </td>
			<td>ATCC 927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenolrot</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Nr. P3532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatgepufferte Kochsalztabletten (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417-50TAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Middlebrock 7H10 Agar</td>
			<td>BD, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11799042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Aminobenzoesäure-Ethylester (pH 7,0)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Nr. A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnican 100 30 G Insulinnadel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9151133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Spritze</td>
			<td>Henke Sass Wolf</td>
			<td>4010.200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intraperitoneale injektion: eine methode zur verabreichung einer lösung in die bauchhöhle eines erwachsenen zebrafisches

Quelle: Luukinen, H., et al. <a href="https://www.jove.com/v/58299/" target="_blank">Modellierung von Tuberkulose in Mycobacterium marinum-infizierten adulten Zebrafischen</a>. J. Vis. Exp. (2018).
Dieses Video beschreibt eine Technik der intraperitonealen Injektion, eine Methode zur Verabreichung von Lösungen in die Bauchhöhle von erwachsenen Zebrafischen.

Intraperitoneale Injektion: Eine Methode zur Verabreichung einer Lösung in die Bauchhöhle eines erwachsenen Zebrafisches

Quelle: Luukinen, H., et al. Modellierung der Tuberkulose in Mycobacterium marinum-infizierten erwachsenen Zebrafischen.  J. Vis. Exp. (2018).
Dieses Video beschreibt eine ...

- Fasten Sie einen erwachsenen Fisch 24 Stunden vor der Injektion, um den Magen-Darm-Trakt zu entleeren und zusätzlichen Platz im Bauch zu schaffen. Am Tag des Eingriffs betäuben Sie den Fisch mit Tricain und legen Sie ihn mit der Bauchseite nach oben in einen Schlitz in einem feuchten Schwamm.
Pipettieren Sie anschließend die gewünschte Menge der Injektionslösung auf ein Stück Laborfolie und ziehen Sie sie in eine Insulinnadel. Positionieren Sie die Nadel zwischen den Beckenflossen in einem 45-Grad-Winkel zur vorder-hinteren Körperachse und schieben Sie sie vorsichtig an der Mittellinie hinein. Schieben Sie die Nadel etwa 1 bis 2 Millimeter in die Bauchhöhle, den Raum zwischen der Bauchdecke und den inneren Organen, und injizieren Sie langsam die gewünschte Lösung. Warten Sie fünf Sekunden, bevor Sie die Nadel herausziehen, um ein Verschütten zu vermeiden. Entferne nun vorsichtig die Nadel.
Setzen Sie den Fisch nach der Injektion schnell in einen Auffangbehälter mit frischem Aquarienwasser um. Wenn der Fisch nicht sofort zu schwimmen beginnt, schwenken Sie das Wasser in der Nähe der Kiemen, damit er sich von der Narkose erholen kann. Im Beispielprotokoll werden wir eine Mycobacterium marinum-Lösung in RAG1-mutierte Fische injizieren, um die Infektion zu untersuchen.
- Zuerst 5 Mikroliter der verdünnten Bakterienlösung auf ein Stück Paraffinfilm spritzen. Ziehen Sie dann den Tropfen in eine 30-Gauge-Insulinnadel. Verwenden Sie für dieses Experiment einen fünf bis acht Monate alten Fisch, wobei der eine ein Wildtyp-Fisch und der andere ein RAG-Mutantenfisch ist.
Positionieren Sie diese Fische mit der Bauchseite nach oben in den Schlitzen eines Stücks feuchtem Schaumstoff. Injizieren Sie die Insulinnadel in einem Winkel von 45 Grad zwischen die Beckenflossen. Halten Sie die Nadelöffnung nach oben, um sicherzustellen, dass sich die gesamte Öffnung in der Bauchhöhle befindet. Injizieren Sie dann langsam die Bakterienlösung. Entfernen Sie danach vorsichtig die Nadel und setzen Sie den Fisch sofort in einen mit frischem Aquarienwasser gefüllten Auffangbecken um.
Entnehmen Sie alle 15 Minuten Proben des in Gebrauch befindlichen bakteriellen Aliquots auf 7H10-Platten. Inkubieren Sie diese Proben fünf Tage lang bei 29 Grad Celsius, um die Infektionsdosis zu überprüfen. Überprüfen Sie regelmäßig das Wohlbefinden der Fische und stellen Sie sicher, dass Sie alle Fische mit Infektionssymptomen einschläfern, indem Sie sie in Wasser mit mehr als 0,02 % 3-Aminobenzoesäureethylester ausbrüten.

intraperitoneal-injection-method-solution-delivery-into-abdominal

Research

Forschung

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biologie

Danio rerio (zebrafish)

Danio rerio (Zebrabärbling)

Adult

Erwachsener

Intraperitoneal Injection: A Method of Solution Delivery into the Abdominal Cavity of an Adult Zebrafish

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Intraperitoneale Injektion: Eine Methode zur Verabreichung einer Lösung in die Bauchhöhle eines erwachsenen Zebrafisches

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Zusammenfassung

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Materialien

Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

Verwandte Artikel

Name	Unternehmen	Katalognummer
Mycobacterium marinum	Sammlung amerikanischer Schriftkultur	ATCC 927
Phenolrot	Sigma-Aldrich	Nr. P3532
Phosphatgepufferte Kochsalztabletten (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Middlebrock 7H10 Agar	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
3-Aminobenzoesäure-Ethylester (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	Nr. A5040
Omnican 100 30 G Insulinnadel	Braun	9151133
1 mL Spritze	Henke Sass Wolf	4010.200V0