Intraperitoneale Injektion: Eine Methode zur Verabreichung einer Lösung in die Bauchhöhle eines erwachsenen Zebrafisches

Abstract

Quelle: Luukinen, H., et al. Modellierung von Tuberkulose in Mycobacterium marinum-infizierten adulten Zebrafischen. J. Vis. Exp. (2018).

Dieses Video beschreibt eine Technik der intraperitonealen Injektion, eine Methode zur Verabreichung von Lösungen in die Bauchhöhle von erwachsenen Zebrafischen.

Protocol

1. Experimentelle M. marinum-Infektion mit intraperitonealer Injektion

1. Pipettieren Sie einen 5-μl-Tropfen der verdünnten Bakterienlösung auf ein Stück Parafilmfilm und ziehen Sie den Tropfen in eine 30-G-Insulinnadel.
2. Für das Experiment werden 5–8 Monate alte Wildtyp-Fische und rag1−/−hu1999-Mutantenfische verwendet. Betäuben Sie erwachsene Zebrafische im Aquarienwasser mit 0,02% 3-Aminobenzoesäureethylester (pH 7,0). Den Fisch mit der Bauchseite nach oben in einen Schlitz auf einem feuchten, geschäumten Kunststoff legen.
   HINWEIS: Rag-/- mutierte Fische sind nicht in der Lage, somatische Rekombination zu durchlaufen und funktionelle T- und B-Zellen zu produzieren.
3. Spritzen Sie die Nadel in einem Winkel von ca. 45° zwischen die Beckenflossen. Halten Sie die Nadelöffnung nach oben, um zu beobachten, dass sich die gesamte Öffnung in der Bauchhöhle befindet. Injizieren Sie die Bakteriensuspension langsam und entfernen Sie vorsichtig die Nadel.
   Anmerkung: Falls der rote Tracer bei der Injektion aus dem Fisch austritt, ist der Fisch vom Versuch auszuschließen.
4. Setzen Sie den Fisch sofort nach der Injektion in einen Auffangbehälter mit frischem Aquarienwasser um.
5. Entnehmen Sie alle 15 Minuten Proben der Bakteriensuspension auf 7H10-Platten von dem verwendeten Bakterienaliquot und inkubieren Sie die Bakterien 5 Tage lang bei 29 °C und überprüfen Sie die Infektionsdosis, indem Sie die Kolonien auf den Platten zählen.
6. Überprüfen Sie regelmäßig das Wohlbefinden der Fische und euthanasieren Sie alle Fische mit Symptomen der Infektion mit einer Konzentration von mehr als 0,02 % 3-Aminobenzoesäureethylester (pH 7,0).
   Anmerkung: Ungefähr 7 % der erwachsenen Zebrafische, die mit 34 ± 15 KBE infiziert sind, und 30 % der Zebrafische, die mit 2029 ± 709 KBE infiziert sind, haben nach 8 Wochen Symptome gezeigt. Zu den Symptomen können abnormales Schwimmen, mangelnde Reaktion auf Berührungen, Keuchen, Ödeme oder beobachtbare Auszehrung gehören.
7. Pflegen Sie den Zebrafisch nach den gängigen Normen.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mycobacterium marinum	Sammlung amerikanischer Schriftkultur	ATCC 927
Phenolrot	Sigma-Aldrich	Nr. P3532
Phosphatgepufferte Kochsalztabletten (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Middlebrock 7H10 Agar	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
3-Aminobenzoesäure-Ethylester (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	Nr. A5040
Omnican 100 30 G Insulinnadel	Braun	9151133
1 mL Spritze	Henke Sass Wolf	4010.200V0