Zebrafisch-Kardiomyopathie-Modell: Arzneimittelinduzierte Kardiotoxizität

Zusammenfassung

Quelle: Ma X., et. al. Ein Doxorubicin-induziertes Kardiomyopathie-Modell bei adulten Zebrafischen. J. Vis. Exp. (2018).

Dieses Video beschreibt die Technik zur Erstellung eines Zebrafisch-Kardiomyopathie-Modells mit minimalen Variationen zwischen den Versuchsgruppen und in der Stichprobe erstellen wir ein Zebrafisch-Kardiomyopathie-Modell mit dem Medikament Doxorubicin.

Protokoll

1. DOX-Injektion bei erwachsenen Fischen

1. Legen Sie eine saubere 100-mm-Petrischale mit einem Schwamm darin unter ein Seziermikroskop und stellen Sie dann den Fokus ein. Schneiden Sie den Schwamm so ab, dass ein Hohlraum von ca. 4 cm Länge entsteht, in dem ein Fisch gehalten werden kann. Machen Sie einen längeren Hohlraum für einen größeren Fisch.
2. Bereiten Sie eine 34-G-Nadel mit einer 10-μl-Mikrospritze vor. Spülen Sie die Nadel mit 1x HBSS-Puffer aus, um Blasen und Verstopfungen von der Spritze und dem Schlauch zu entfernen.
3. Betäuben Sie den erwachsenen Fisch in Embryowasser mit 0,16 mg/ml Tricain für 2 min.
   HINWEIS: Eine längere Anästhesie über 5 Minuten, gefolgt von einer DOX-Injektion, kann leicht zum Tod der Fische führen.
4. Weichen Sie den Schwamm in Embryowasser mit Tricain ein und geben Sie den Fisch zur Injektion auf den Schwamm.
5. Führen Sie die IP-DOX-Injektion mit einer der beiden unten beschriebenen Methoden durch.
   1. Klassische IP-Injektion
      1. Positionieren Sie den Fisch mit dem Bauch nach oben in der Höhle des Schwamms. Führen Sie die Nadel schnell mit einem Winkel von 45° zum Fischkörper in die Mittellinie zwischen den Bauchflossen ein und dringen Sie ca. 1-2 mm ein. Geben Sie die gesamte DOX-Lösung langsam frei. Warten Sie 5 Sekunden, bevor Sie die Nadel herausziehen. Überprüfen Sie die DOX-Abgabe durch eine sichtbare rote Farbe im Fischbauch.
   2. Alternative IP-Injektion
      1. Lege den Fisch seitlich mit dem vorderen nach rechts auf den Schwamm. Stabilisieren Sie den Fisch vorsichtig mit einer Zange mit stumpfem Ende mit der linken Hand und halten Sie die Mikrospritze mit der rechten Hand.
      2. Positionieren Sie die Nadel unterhalb der Seitenlinie oberhalb der Beckenflosse, wobei die Fase nach oben zeigt. Zeigen Sie in einem Winkel von 45° auf die 7-Uhr-Position, führen Sie die Nadel 3-4 mm in die Fischhöhle zwischen dem Becken und den Analflossen ein und drücken Sie dann langsam den Kolben nieder. Überprüfen Sie die DOX-Abgabe durch eine sichtbare rote Farbe im Fischbauch.
6. Bringen Sie den injizierten Fisch schnell in ein sauberes, mit frischem Systemwasser gefülltes Kreuzungsbecken, damit sich der Fisch erholen kann. Spülen Sie die Nadel zwischen den Injektionen einmal mit 1x HBSS-Puffer aus.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Überquerender Tank	Aquaneering	ZHCT100	Fischzucht
Doxorubicin-Hydrochlorid	Sigma	D1515-10MG
Hank's ausgewogene Salzlösung (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Fahrzeug für DOX
100 mm Petrischale	Falke	431741
10 μL NanoFil Mikrospritze	WPI	NANOFIL	Zur Injektion
34 Gauge Nadel	WPI	NF34BV-2	Zur Injektion
Tricain	Silber		Betäubung von Fischen