3D-Co-Kultur mit direkter Interaktion: Co-Kultivierung von Krebszellen mit Monozyten, um deren Interaktion zu untersuchen

Zusammenfassung

Quelle: Espinoza-Sánchez, et al. Analyse der Kommunikation zwischen Monozyten und primären Brustkrebszellen in einem extrazellulären Matrixextrakt (ECME)-basierten dreidimensionalen System. J. Vis. (2018).

Dieses Video beschreibt die 3D-Co-Kultur von Brustkrebszellen mit Monozyten, um ihre Interaktion in einer auf extrazellulären Matrixextrakt (ECME) basierenden Umgebung zu untersuchen. Diese Methode hilft bei der Untersuchung spezifischer Merkmale wie Kollagenabbau, Rekrutierung von Immunzellen und Zellinvasion.

Protokoll

1. 3D Co-Kulturen mit direkter Interaktion

1. Markieren Sie BrC-Zellen und Monozyten vor der Zellkultur mit unterschiedlichen Fluoreszenzfarbstoffen, um eine unabhängige Sortierung jeder Zelllinie nach der Kultur für die Analyse der mRNA- und Proteinexpression zu ermöglichen. Verwenden Sie kommerziell erhältliche Derivate von Cumarin und Rhodamin, die die Zellmembran lebender Zellen ungehindert passieren. Ein allgemeines Protokoll für die Beschriftung lautet wie folgt:
   1. Bereiten Sie eine Monoschicht von BrC-Zellen von Interesse vor (2 × 10⁶ Zellen in einem 25 cm 2-Kulturkolben) und ersetzen Sie das Standardmedium durch e....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
U937	American Type Culture Collection ATCC	CRL-1593.2	Monozytäre Zelllinie/histiozytäres Lymphom
THP-1	American Type Culture Collection ATCC	TIB-202	Monozytäre Zelllinie/akute monozytäre Leukämie
MCF-10A	American Type Culture Collection ATCC	CRL-10317	Nicht transformierte Brustzelllinie
MCF-7	American Type Culture Collection ATCC	HTB-22	Brustkrebs-Zelllinie
MDA-MB-231	American Type Culture Collection ATCC	HTB-26	Brustkrebs-Zelllinie
RPMI 1640 mittel	GIBCO BRL Life Technologies	Artikel-Nr.: 11875-093
DMEM/F12	GIBCO BRL Life Technologies	Artikel-Nr.: 11039-021
Antibiotikum/Antimykotikum	GIBCO BRL Life Technologies	Artikel-Nr.: 15240-062	100 μg/ml Penicillin, 100 μg/ml Streptomycin und 0,25 μg/ml Fungizone
Fötales Rinderserum	GIBCO BRL Life Technologies	Artikel-Nr.: 16000-044
Pferde-Serum	GIBCO BRL Life Technologies	16050114
0,05 % Trypsin-EDTA 1X	GIBCO BRL Life Technologies	Artikel-Nr.: 25300-062
PBS 1X (phosphatgepufferte Kochsalzlösung	GIBCO BRL Life Technologies	20012-027
Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF)	PeproTech	AF-100-15 (1,00 mg)
Insulin	SIGMA-ALDRICH	I1882-100MG
Hydrocortison	SIGMA-ALDRICH	H088-5G
Choleratoxin Vibrio cholerae	SIGMA-ALDRICH	Nr. C8052-1MG
Matrigel	Corning Inc	356237	Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) Maussarkom, extrazellulärer Matrixextrakt, Lagerung bei -20°C bis zur Verwendung bei 4°C
Lab-Tek Kammerobjektträger mit Abdeckung (8 Vertiefungen)	Nalge Nunc International	177402