Intraduktale Injektion von Kaninchen: Lokalisierte Abgabe der interessierenden Lösung in die Brustdrüse des Kaninchens

1. Präoperative Vorbereitung

1. Notiere das Körpergewicht jedes Kaninchens. Wie bei allen präklinischen Studien sollte das Gewicht der Tiere regelmäßig überwacht werden, um die potenzielle Toxizität zu beurteilen.
2. Vor der Betäubung des Kaninchens ein konisches 50-ml-Röhrchen mit handelsüblichem Ultraschallgel füllen und 30 s lang bei 500 x g drehen; nach Abschluss der Zentrifugation sollten keine sichtbaren Blasen im Gel vorhanden sein.
3. Verabreichen Sie Glycopyrrolat subkutan in einer Dosis von 0,1 mg/kg und Acepromazin intramuskulär in einer Dosis von 0,75 mg/kg. Warten Sie 15-20 Minuten, bis das Beruhigungsmittel wirkt, während Sie die Vitalparameter und das Verhalten überwachen.
   Anmerkung: Glycopyrrolat ist ein Anticholinergikum, das Bradykardie verhindert und die Sekretion der Atemwege und des Magen-Darm-Trakts reduziert. Acepromazin ist ein Beruhigungsmittel, das als Prämedikation für die Anästhesie dient.
4. Verabreichen Sie 35 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazin subkutan als Anästhetikum. Wenn der Bediener jedoch erfahrener wird und die intraduktale Verabreichung schneller durchführen kann, verringern Sie die Arzneimitteldosen auf 15 mg/kg Ketamin und 3 mg/kg Xylazin subkutan. Dies verkürzt die Narkosezeit und die Zeit, die das Tier benötigt, um sich von der Narkose zu erholen.
5. Überprüfen und dokumentieren Sie alle 15 Minuten die Herzfrequenz, SPO_2, Temperatur, Atemfrequenz und Schleimhautfarbe. Tragen Sie Augenschmiermittel auf beide Augen auf.
   Anmerkung: Nur Personal, das eine entsprechende Schulung durchlaufen hat und von der IACUC ihrer Institution zugelassen wurde, sollte die Anästhesie verabreichen oder überwachen. Die Verwendung eines veterinärmedizinischen Anästhesiemonitors kann bei der Erfassung von Vitalparametern helfen und wird empfohlen. Der veterinärmedizinische Anästhesiemonitor ersetzt jedoch nicht die Notwendigkeit, das Tier alle 15 Minuten manuell zu kontrollieren. Beachten Sie die Anweisungen des Herstellers für die ordnungsgemäße Verwendung eines Veterinärmonitors.
6. Überprüfen Sie den Beginn der Anästhesie durch ein leichtes Kneifen der Zehen; das Kaninchen sollte nicht ansprechbar sein, bevor es fortfährt.
7. Rasieren Sie den Schwanzbauch des Kaninchens vorsichtig im Bereich um das dritte und vierte Leistensaugerpaar.
8. Nachdem der Großteil der Haare entfernt ist, tragen Sie eine rezeptfreie Haarentfernungscreme auf die rasierte Stelle auf. Entfernen Sie die Creme 10 Minuten nach dem Auftragen mit feuchten, mit warmem Wasser angefeuchteten Papiertüchern.
   Anmerkung: Kaninchenhaut ist sehr empfindlich. Die Haarentfernungscreme sollte nicht länger als 10 Minuten verwendet werden. Tatsächlich ist es sicherer, einen "Testspot" bei 5 Minuten auszuprobieren und nur dann länger eingeschaltet zu lassen, wenn der Testspot anzeigt, dass ein längerer Zeitraum erforderlich ist.
9. Wischen Sie den Bereich mit alkoholgetränkten Mullpads ab, um die Injektionsstelle zu reinigen.
10. Legen Sie das Kaninchen auf den Rücken in einen V-förmigen Trog, der mit einer zirkulierenden warmen Wasserdecke und einem saugfähigen Kissen ausgekleidet ist.

2. Vorbereitung des Kontrastmittels

1. Rekonstituieren Sie das nicht zielgerichtete Kontrastmittel gemäß den Anweisungen des Herstellers. Zum Mischen vorsichtig auf und ab pipettieren.
   Anmerkung: Das in diesem Protokoll verwendete Kontrastmittel ist nach der Rekonstitution 4 - 6 h bei Raumtemperatur stabil. Bewegen Sie das Fläschchen zwischen jeder Entnahme vorsichtig.
   HINWEIS: Das erforderliche Lösungsvolumen hängt von der Anzahl der zu injizierenden Kanäle ab. Das Kaninchen hat 4 Duktalöffnungen pro Sauger, und 0,2 ml Lösung reichen aus, um einen Duktalbaum eines erwachsenen neuseeländischen Weißen Kaninchens (Oryctolaguscuniculus) zu füllen. Somit kann ein Gesamtvolumen von 0,8 ml an eine Brustdrüse abgegeben werden.

3. Intraduktive Entbindung

1. Suchen Sie die geeigneten Sauger, die injiziert werden sollen; das 3^. und 4^. Paar Leistensauger werden empfohlen, da sie leicht sichtbar sind, wenn das Tier auf dem Rücken liegt.
2. 0,2 ml sterile 0,9%ige Kochsalzlösung in eine 1 ml-Luer-Lock-Tuberkulinspritze mit einer 22-g-Nadel füllen. Entsorgen Sie die 22-G-Nadel ordnungsgemäß, sobald sich die Kochsalzlösung in der Spritze befindet, und ersetzen Sie sie durch eine sterile 25-Gauge-Nadel. Wischen Sie die Stelle vorsichtig mit 85%igem Isopropylalkohol auf einem Mullpad ab.
3. Führen Sie mit der Fase der Nadel nach oben und der Spritze parallel zum Körper des Tieres die Fase der Nadel in die Seite des Saugers ein und injizieren Sie langsam 0,1-0,2 ml Kochsalzlösung; dies ermöglicht eine bessere Visualisierung der Kanalöffnungen.
4. Laden Sie 0,2 ml Injektionslösung in eine 1 ml Luer-Lock-Tuberkulinspritze.
5. Halten Sie den Sauger vorsichtig mit Daumen und Zeigefinger fest und heben Sie ihn leicht an, um ihn für die intraduktale Injektion zu positionieren. Eine tragbare Augenlupe kann bei der Visualisierung der Duktusöffnungen helfen.
6. Während Sie die angehobene Position des Saugers beibehalten, kanülieren Sie den Ductus of Interest vorsichtig mit einer 25-G-Nadel mit stumpfer Spitze.
7. Drehen Sie die Luer-Lock-Spritze nach der Kanülierung vorsichtig auf die Nabe der Infusionsnadel mit stumpfer Spitze, bis sie einrastet.
8. Heben Sie den Sauger an und injizieren Sie die Lösung langsam, um mögliche Schäden durch sich schnell bewegende Flüssigkeit im Kanal zu minimieren. Zu keinem Zeitpunkt sollte es beim Einspritzen der Lösung zu einem Widerstand kommen.