In vitro Phototoxizitäts-Assay: Eine PDT-basierte Methode zur Bewertung des phototoxischen Potenzials eines Photosensibilisators in Lungenkrebszellen

Zusammenfassung

Quelle: Chang, J. E., et al. Wirksamkeit der photodynamischen Therapie gegen Krebs mit Nanopartikeln, die auf Lungenkrebs abzielen.J. Vis. Exp.(2016).

Photodynamische Therapie (PDT) ist eine nicht-invasive und nicht-chirurgische Methode zur Behandlung von Lungenkrebs. Photosensibilisatoren reichern sich selektiv im Tumorgewebe an und führen in Gegenwart von Sauerstoff und der richtigen Wellenlänge des Lichts zum Absterben von Tumorzellen. In diesem Protokollvideo wird eine PDT-basierte Methode verwendet, um das phototoxische Potenzial eines potenziellen Photosensibilisators in Lungenkrebszellen zu bewerten.

Protokoll

1. Synthese von Hyaluronsäure-Ceramid (HACE)

1. Solubilizieren Sie 12,21 mmol Hyaluronsäure (HA)-Oligomer und 9,77 mmol Tetra-n-Butylammoniumhydroxid (TBA) in 60 ml doppelt destilliertem Wasser (DDW). 30 Min. rühren.
2. Um den DS-Y30-Linker zu synthetisieren, lösen Sie 8,59 mmol DS-Y30-Ceramid und 9,45 mmol Triethylamin in 25 ml Tetrahydrofuran (THF). Mit 8,59 mmol 4-Chlormethylbenzoylchlorid in THF mischen. 6 Std. bei 60 °C rühren.
3. Die synthetisierten 8,10 mmol HA-TBA und 0,41 mmol DS-Y30-Linker werden in einem Gemisch aus THF und Acetonitril (4:1, v/v) gelöst. 5 Std. bei 40 °C rühren.
4. Entfernen Sie Verunreinigungen durch ....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Oligo-Hyaluronsäure	Bioland Co., Ltd.
DS-Y30 (Ceramid 3B; hauptsächlich Noleoyl-Phytosphingosin)	Verifizierter Lieferant - Doosan Biotech Co., Ltd.
Adipinsäure-Dihydrazid	Sigma Aldrich	Nr. A0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimid	Sigma Aldrich	Artikel-Nr.: 39391
4-(Chlormethyl)benzoylchlorid	Sigma Aldrich	270784
Paclitaxel	Taihua Unternehmen
Spritzen-Vorsatz-Filter	Sartorius Stedim Biotech GmbH	Artikel-Nr.: 17762	15 mm, RC, PP, 0,45 μm
RPMI-1640	Gibco Life Technologies, Inc.	Nr. 11875
Penicillin–Streptomycin	Gibco Life Technologies, Inc.	Artikel-Nr.: 15070
Fötales Rinderserum	Gibco Life Technologies, Inc.	16140071
Celite (Filtermittel)	Sigma Aldrich	Artikel-Nr.: 6858	Siehe Schritt 1.4