Fluoreszierendes orthotopes Mausmodell: Implantation von GFP-exprimierenden Krebszellen in eine Maus zur Beurteilung der Tumorprogression in vivo

Zusammenfassung

Quelle: Moreno, J. A., et al. Fluoreszierendes orthotopes Mausmodell von Bauchspeicheldrüsenkrebs. J. Vis. Exp.(2016)

Dieses Video demonstriert das Protokoll für die orthotopische Implantation von grün fluoreszierenden Protein-exprimierenden Bauchspeicheldrüsenkrebszellen in die Bauchspeicheldrüse der Maus. Das orthotope Mausmodell hilft bei der Untersuchung der Wirksamkeit neuartiger Therapeutika bei primären und metastasierten Tumoren.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegekomitee und dem Jove Veterinary Review Board überprüft.

>1. Chirurgische Implantation

HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass alle chirurgischen Materialien und Instrumente steril sind. Üben Sie jederzeit aseptische Techniken.

1. Legen Sie ein Heizkissen auf den Tisch und decken Sie es mit einem sterilen Tuch ab. Richten Sie das Anästhesiegerät ein und stellen Sie sicher, dass alle Vorräte in Reichweite sind.
2. Legen Sie die Schnauze des Tieres in die Anästhesiemaske und stellen Sie die Anästhesie auf 1 l/min Sauerstoff und 2,5 % Isofluran ein.
3. Schrubben Sie die Flanke des Tieres vorsichtig mit Jod und spülen Sie es mit 70% Ethanol ab. Wiederholen Sie dies dreimal.
4. Vergewissern Sie sich, dass das Tier vollständig betäubt ist, indem Sie die Hinterpfote kneifen. Das Tier ist vollständig betäubt und bereit für die Operation, wenn keine Reaktion beobachtet wird. Wenn das Tier jedoch zusammenzuckt, stellen Sie sicher, dass der Verdampfer ausreichend betäubt ist, und geben Sie dem Tier mehr Zeit, vollständig unter Narkose zu gehen.
5. Laden Sie ca. 200 μl der Zellsuspension in eine 1,0 ml TB-Spritze mit einer 18 G-Nadel (zuvor gekühlt). Ersetzen Sie die Nadel durch eine 27 G Nadel und stellen Sie sie bis zur Verwendung wieder auf Eis.
6. Lokalisiere den allgemeinen Bereich der Milz (linker oberer Quadrant des Bauches) und drücke die Haut mit einer Pinzette auf diesen Bereich. Machen Sie mit einer chirurgischen Schere einen Schnitt von ca. 1,0 cm, um eine Tasche zu erstellen. Auf ähnliche Weise kneifen Sie den glatten Muskel auf die Milz und schneiden Sie ihn durch, um Zugang zur Bauchhöhle zu erhalten.
7. Fassen Sie vorsichtig das kaudale Ende der Milz und ziehen Sie es aus dem Körper. Die Bauchspeicheldrüse wird an der Milz befestigt. Spreizen Sie die Bauchspeicheldrüse mit einem feuchten, sterilen Wattestäbchen und lokalisieren Sie den Schwanz der Bauchspeicheldrüse.
8. Geben Sie die 50 μl Injektion in den Schwanz der Bauchspeicheldrüse, lassen Sie die Nadel 10 Sekunden lang im Inneren und drehen Sie die Nadel langsam aus der Bauchspeicheldrüse heraus. Eine erfolgreiche Implantation sieht aus wie eine oberflächliche Blase ohne Lecks.
9. Bringen Sie die Bauchspeicheldrüse und die Milz wieder in die Bauchhöhle zurück. Umschließen Sie zuerst den Muskel und dann die Haut separat. Verwenden Sie eine 6-0-Naht oder Klammer, um den Schnitt zu schließen. Um Schmerzen beim Tier zu vermeiden, verabreichen Sie Ketoprofen subkutan (SC) (5 mg/kg) über 24 Stunden. Alternativ können Sie Buprenorphin sc (0,05 - 0,1 mg/kg) alle 12 Stunden über einen Zeitraum von 36 Stunden verabreichen.
10. Befreien Sie das Tier aus der Narkose und bringen Sie es in seinen Käfig zurück. Überwachen Sie auch auf Schmerzen. Die Tiere müssen zum Zeitpunkt einer Operation (oder sogar vor einer vorbeugenden) Operation mit einer Schmerzlinderung versorgt werden. Zusätzliche Schmerzmittel müssen bei Tieren gewährt werden, die Schmerzen gemäß dem IACCUC-Protokoll haben oder wie vom behandelnden Tierarzt oder Beauftragten verschrieben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Alcare oder geschäumtes antiseptisches Handdesinfektionsmittel	Steris	Artikel-Nr.: 639680
TB Spritze 27 G 1/2	Becton Dickinson	Artikel-Nr.: 305620
Isofluran	Blutler Schein	Artikel-Nr.: 50562
Ketoprofen	Fort Dodge Tiergesundheit
Chirurgische Schere, 5,5" gerade Mayo	Henry Schein	Nr. 22-1600
PANC-1 GFP-Zelllinie	Antikrebs, Inc
Bildgebungssystem für Kleintiere: iBox Scientia	UVP, LLC. Upland, Kalifornien.		Kleintier-Bildgebungssystem zur Beobachtung des fluoreszierenden Tumors bei lebenden Tieren
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	Artikel-Nr.: 39010
PANC-1 GFP-Zelllinie	Antikrebs, Inc
DPBS (Dubelcco's Phosphatgepufferte Kochsalzlösung)	Thermo Ficher Sci	21300025