Chronische Imaging of Mouse Visual Cortex Mit einem ausgedünnten Schädel Vorbereitung

Summary

In diesem Video-und ergänzendes Material zeigen wir ein Protokoll für die chronische In vivo Abbildung des intakten Gehirn mit einem ausgedünnten Schädel Vorbereitung.

Abstract

In-vivo-Bildgebung mittels Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskopie (2PLSM) ermöglicht die Untersuchung von lebenden Zellen und neuronalen Prozesse im intakten Gehirn. Die hier vorgestellte Technik ermöglicht die Abbildung des gleichen Bereich des Gehirns zu verschiedenen Zeitpunkten (chronische Imaging) mit mikroskopischer Auflösung ermöglicht die Verfolgung von dendritischen Dornen, die die kleinen Strukturen, die die Mehrheit der postsynaptischen exzitatorischen Seiten im ZNS darstellen. Die Fähigkeit, klar zu lösen feinen kortikalen Strukturen über mehrere Zeitpunkte hat viele Vorteile, insbesondere bei der Untersuchung der Plastizität des Gehirns, in denen morphologische Veränderungen an den Synapsen und Schaltung Umbau erklären helfen, zugrunde liegenden Mechanismen können. In diesem Video-und Zusatzmaterial, zeigen wir ein Protokoll für chronischen in vivo-Bildgebung des intakten Gehirn mit einem ausgedünnten Schädel Vorbereitung. Die ausgedünnten Schädel Präparat ist ein minimal-invasiven Ansatz, der mögliche Schäden an der Dura und / oder Cortex vermeidet, wodurch die Entstehung einer entzündlichen Reaktion. Wenn dieses Protokoll korrekt durchgeführt wird, ist es möglich, deutlich Überwachung von Änderungen in dendritischen Dorn Eigenschaften im intakten Gehirn über einen längeren Zeitraum.

Protocol

1. Zur Visualisierung Neuronen im intakten Gehirn über Zwei-Photonen-Mikroskopie, ein Präparat, wo Nervenzellen mit fluoreszierenden Markern versehen werden wird. In den Experimenten stellte hier benutzen wir die GFP-M transgenen Maus Linie, die Schicht Etiketten 5 Pyramidenzellen ^1. Layer 5 Pyramidenzellen Projekt dendritischen Prozesse in oberflächlichen Schichten, so dass die Visualisierung von Dendriten und dendritischen Dornen bis zu einer Tiefe von 300 um unter dem Niveau der Pia. Ein alternativer Ansatz besteht darin, Label-Zellen unter Verwendung von viralen Markern (siehe Lowery et al., Eingereicht JOVE).
2. Sterilisieren der Arbeitsbereich mit 70% E....

Discussion

Chronische Bildgebung mittels Zwei-Photonen-Mikroskopie ist ein zunehmend beliebtes Verfahren, um morphologische Veränderungen während der Plastizität ^2-5 ausgelöst studieren. Hier zeigen wir eine ausgedünnte Schädel Vorbereitung auf die identifizierten dendritischen Dornen im intakten Gehirn der Maus auf verschiedenen bildgebenden Tagen folgen. In diesem Protokoll wird der Schädel intakt gelassen, wodurch minimale Schäden an der Rinde und was zu einem sehr niedrigen Niveau von Neuroinflammation die Funktion .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fentanylcitrat		im Haus		Fentanyl Cocktail: Anästhesie-Cocktail; IP Dosis: 0,0125 ml/g Endcocktail conc.: 0,05 mg/kg
Medetomindinhydrochlorid		im Haus		Fentanyl Cocktail: Anästhesie-Cocktail; IP Dosis: 0,0125 ml/g Endcocktail conc.: 0,05 mg/kg
Midazolam HCL		In House		Fentanyl Cocktail: Anästhesie-Cocktail; IP Dosis: 0,0125 ml/g Endcocktail conc.: 0,05 mg/kg
2,2,2-Tribrom– thanol				Avertin Cocktail: Anästhetikum; IP Dosis: 0,0075 cc/ g End-Cocktail-Konzentration: 1%
2-Methyl-2-butanol (Endkonzentration: 0,775%)				Avertin Cocktail: Anästhetikum; IP Dosis: 0,0075 cc/ g End-Cocktail-Konzentration: .775%
TC-1000 Temp. Kontrollsystem für Mäuse		CWE, Inc.	TC-1000 Maus	Körpertemperaturregelung
Toberadex		Inhouse		Augensalbe
10% Eisenchlorid		Ricca Chemical Company	3120-32	Dünnschädelpräparat
Mikrochirurgische Klinge		Sable Industries	S-6400	Dünnschädelpräparat
Cyanacrylat 404.401		Loctite	P/N 46551	Präparation für dünne Schädel
Cyanoacrylat 401		Loctite	P/N 40140	Vorbereitung für dünne Schädel
Zip Kicker Glue Accelerator		Pacer Technology	PT-29	Vorbereitung für dünne Schädel
Micro Drill Stahlfräser 0,7 mm Spitzendurchmesser		Fine Science Tools	19008-07	Vorbereitung für dünne Schädel
Microtorque Control Box und Tech2000 Handstück		Ram Products, Inc.	TECH2000ON/AUS	Dünnschädelpräparation
#6-0 (0,7 metrisch) Seidennaht		Ethicon Inc.	K8894H	Taper C-1
Augenzange, 10cm, Spitzenbreite 0,5mm, gebogen	Chirurgische Instrumente	Fine Science Tools	11152-10
Extra feine Bonn Schere, 8,5cm, gerade Spitze, Schneide 13mm	Chirurgische Werkzeuge	Fine Science Tools	14084-08
Standard Pattern Pinzette, gerade, 2,5 mmx1,35 mmSpitze, 12 cm	Chirurgische Instrumente	Fine Science Tools	11000-12