Methodenartikel

Die orale Verabreichung von Rotenon mit einem Gavage und Bildanalyse von Alpha-Synuclein Einschlüsse in den enterischen Nervensystem

DOI:

10.3791/2123

26. Oktober 2010

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Parkinson-Krankheit ist die Exposition gegenüber Pestiziden in Zusammenhang gebracht. Hier zeigen wir eine Methode, um Pestizide mit einer Magensonde in der gewünschten Konzentration und eine Methode, um ihre Wirkung in alpha-Synuclein Anreicherung zu analysieren, die enterale Nervensystem liefern.

Zusammenfassung

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In der Parkinson-Krankheit (PD)-Patienten, folgt der damit verbundenen Pathologie ein charakteristisches Muster mit unter anderem die enterale Nervensystem (ENS) 1,2, der Riechkolben (OB), der Nucleus dorsalis des Vagus (DMV) 3, die intermediolateralen Kern des Rückenmarks 4 und der Substantia nigra, die die Grundlage für die neuropathologischen Inszenierung der Krankheit 4,5. Die ENS und der OB sind die am stärksten exponierten Nerven Strukturen und die ersten, die betroffen sein. Interessanterweise hat PD um Pestizidbelastung 6-8 in Verbindung gebracht. Hier zeigen wir im Detail zwei Methoden in unserer vorherigen Studie 9 verwendet. Um die Effekte von Rotenon lokal handeln auf der ENS zu analysieren, wir Rotenon mit einer Magensonde zur einjährigen C57/BL6-Mäusen verwaltet. Rotenon ist eine weit verbreitete Pestizid, das stark hemmt mitochondrialen Komplex I 10. Es ist sehr lipophilen und schlecht im Magen-Darm-Trakt 11 absorbiert. Unsere Ergebnisse zeigten, dass die Gabe von 5 mg / kg Rotenon nicht hemmen mitochondrialen Komplex I-Aktivität in den Muskeln oder dem Gehirn. So, was darauf hindeutet, dass die Verwendung unserer Verwaltung Methode Rotenon nicht über die hepatoportal und war ausschließlich auf die ENS tätig. Hier zeigen wir eine Methode, um Pestizide mit Hilfe eines Magensonde und die Bildanalyse-Protokoll verwendet, um die Auswirkungen des Pestizids in alpha-Synuclein Anreicherung in der ENS analysieren zu verwalten. Der erste Teil zeigt eine Methode, intragastrische Verabreichung von Pestiziden (Rotenon) ermöglicht bei einer gewünschten genaue Konzentration. Die zweite Methode ist eine semi-automatische Bildanalyse-Protokoll zu alpha-Synuclein Anreicherung in der ENS analysieren mit Hilfe eines Bildanalyse-Software.

Protokoll

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1) Intragastric Verwaltung von Rotenon

  1. Wiegen des Tieres.
  2. Berechnen Sie das Gesamtvolumen der Rotenon / Fahrzeug-Lösung benötigt. In diesem Fall 0,01 ml pro Gramm des Tieres Gewicht.
  3. Laden Sie eine 1 ml-Spritze mit den zuvor berechneten Volumen von Rotenon Lösung (0,625 mg / mL Rotenon, 4% Carboxymethylcellulose und 1,25% Chloroform) oder Vehikel-Lösung (4% Carboxymethylcellulose und 1,25% Chloroform). In diesem Fall entspricht es einem 5 mg / kg Rotenon Dosis.
  4. Pick-up mit der Maus und die Maus am Schwanz mit einer Hand, erstrecken sich die Haut des Halses, indem Sie es mit den ersten zwei Fingern der anderen Hand.
  5. S....

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Diskussion

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Intragastric Verwaltung wurde bereits 12 durchgeführt. Doch nach Inden Manuskript, Rotenon verabreicht wurde in 0,5% Carboxymethylcellulose-Natriumsalz (CMSS) allein aufgelöst. Rotenon ist ein High liphophylic Substanz. Daher kann Rotenon nicht in 0,5% CMSS aufgelöst allein sein und Niederschlag, wenn getan. Der Einsatz von Chloroform entsteht eine gleichmäßig verteilte Rotenon Federung vermeiden Niederschlag. Außerdem wird durch den höheren Konzentrationen des Pestizids in der CMSS ist das endgültige Volumen.......

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Offenlegungen

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Francisco Pan-Montojo hat ein Patent angemeldet für dieses Tiermodell (Anmeldenummer PCT / EP 2009/005688).

Danksagungen

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Die Pedro Barrie de la Maza-Stiftung unterstützt diese Arbeit.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
RotenonSigma-AldrichR8875Deutschland
ChloroformCarl Roth GmbH3313.1Deutschland
CarboxymethylcelluloseSigma-AldrichC5678Deutschland
Sonde 1,2 mm x 60 mmUnimedSchweiz
LSM 510Carl Zeiss, Inc.
Fidschihttp://pacific.mpi-cbg.de

Referenzen

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  1. Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner's and Auerbach's plexuses in cases staged for Parkinson's disease-related brain pathology. Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).
  2. Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F.

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Schlagwörter

Orale SondierungRotenon VerabreichungBildanalyseprotokollKonfokalmikroskopieFiji SoftwareSchwellenwertverfahrenPartikelanalyseGanglionoberfl che

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