Identifizierung von mikrobiellen Ziele der adaptiven Immunität bei idiopathischer Krankheiten können durch die Verwendung des enzyme-linked immunospot Test durchgeführt werden.
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Methodenartikel
Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT): Quantifizierung von Th-1 zelluläre Immunantworten gegen mikrobielle Antigene
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Adaptive Immunität ist ein wichtiger Bestandteil der Freigabe von intrazellulären Erregern. Die Fähigkeit zur Detektion und Quantifizierung dieser Reaktionen beim Menschen ist ein wichtiges diagnostisches Werkzeug. Die enzyme-linked immunospot Assay (ELISPOT) ist an Popularität gewinnt für seine Fähigkeit, zelluläre Immunantworten gegen mikrobielle Antigene, einschließlich immunsupprimierten Bevölkerungsgruppen wie Menschen mit einer HIV-Infektion, Transplantation und Verwendung von Steroiden zu identifizieren. Dieser Test hat die Fähigkeit, die Immunantwort gegen spezifische mikrobielle Antigene, sowie zu unterscheiden, ob diese Antworten Th1-oder Th2-Charakter sind zu quantifizieren. ELISPOT ist nicht auf den Ort der Entzündung begrenzt. Es ist in seiner Fähigkeit, für Immunreaktionen im peripheren Blut, sowie Stellen der aktiven Beteiligung wie BAL, Liquor, Aszites und bewerten vielseitig. Erkennung von Immunantworten gegen ein einzelnes oder mehrere Antigene möglich ist, sowie spezifische Epitope innerhalb mikrobieller Proteine. Dieser Test ermöglicht Nachweis von Immunreaktionen im Laufe der Zeit, als auch Unterschiede in Antigenen von Host-T-Zellen erkannt. Zweifarbige ELISPOT-Assays zur Verfügung für den Nachweis der gleichzeitigen Expression von zwei Zytokinen. Aktuelle Anwendungen für diese Technik sind Diagnose der extrapulmonalen Tuberkulose, sowie Untersuchung des Beitrags von infektiösen Antigenen zu Autoimmunerkrankungen.
Protokoll
Für das folgende Protokoll verwenden wir peripheren mononukleären Blutzellen (PBMC), wie die Zellen von Interesse. Allerdings kann dieses Protokoll mit anderen Zelltypen verwendet werden. Führen Sie den Test in einer Gewebekultur Kapuze mit steriler Technik.
Tag 1: Herstellung von Platten und Zellen
- Nehmen Sie eines ELISPOT Platte und öffnen Sie sie in der Motorhaube.
- Waschen Sie die Platte 3 mal mit 150 ul 1X PBS mit einem Mehrkanal-Pipette, falls vorhanden, sonst einzelne gut Pipettieren akzeptabel ist.
- Nehmen Sie ein Paket von Stauseen und öffnen Sie sie in der Motorhaube.
- Add 2....
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Diskussion
Der ELISPOT-Assay wurde als einer der wichtigsten und am häufigsten verwendeten Tests entstanden, um Immunantworten im Menschen zu überwachen und eine Vielzahl anderer Arten. Mit dem ELISPOT-Assay kann Immunzellen Frequenzen bei der einzelnen Zelle Ebene ohne Ausbau oder Manipulation von Zellpopulationen gemessen werden. ELISPOT-Assay wurde in großem Umfang angewendet, um Antigen-spezifische Immunantwort in verschiedenen Krankheiten, darunter Infektionen, Krebs, Allergien und Autoimmunerkrankungen untersuchen. Die Anwen.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Unterstützte teilweise durch Vanderbilt CTSA Grant 1 UL1 RR024975 vom National Center for Research Resources, National Institutes of Health. Diese Arbeit wurde vom NIH R01 HL 83839 finanziert werden; R01 AI 65744.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
A. Herstellung der Medien
B. Herstellung von Tris-Puffer
- Add 800 ml ddH 2 O auf 1 L Becherglas.
- Maßnahme 12 Gramm Tris und fügen in das Becherglas.
- Add 0,12 Gramm Magnesiumchlorid-Hexahydrat (MgCl 2: 6 H 2 O) in das Becherglas.
- Rühren Sie mit Magnetrührstab auf automatischen Rühren Platte.
- Nach der Auflösung, pH der Lösung auf 9,5.
- Add 200 ml ddH 2 O in das Becherglas, bringt es bis 1000ml.
- Die Lösung wird mit einem 0,22 um Filter.
C. Materialien, die für ELISPOT-Analyse:
Referenzen
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E.
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Nachdrucke und Genehmigungen
