Agar-Block Mikrokosmen für Controlled Pflanzengewebekultur Zersetzung durch aerobe Pilze

Zusammenfassung

Dieses Video zeigt eine kontrollierte Umgebung Ansatz, um den Abbau von Lignocellulose Pflanzengewebe durch aerobe Pilze zu studieren. Die Fähigkeit, Nährstoffquellen und Feuchtigkeit Kontrolle ist ein wesentlicher Vorteil der Agar-Block Mikrokosmen, aber der Ansatz führt oft gemischtem Erfolg. Wir wenden uns an kritischen Fallstricke, die reproduzierbare, Low-Variabilität Ergebnisse zu erzielen.

Zusammenfassung

Die beiden wichtigsten Methoden zur Untersuchung von Pilz-biologischer Abbau von Lignocellulose pflanzlichen Geweben wurden für Holzschutzmittel-Tests (; Agar-Block Boden-Block) entwickelt. Es ist gut angenommen, dass der Boden-Block Mikrokosmen höhere Abbauraten, weniger Feuchtigkeit Probleme, geringere Variabilität unter Studien und höhere Schwellenwerte Konservierungsmittel Toxizität ergeben. Soil-Block-Test ist damit der mehr genutzt Technik und standardisiert wurde von American Society for Testing and Materials (ASTM) (Methode D 1413-07). Der Boden-Block-Design hat jedoch Nachteile, mit lokal variable Boden Quellen und bei der Begrenzung der Kontrolle von Nährstoffen externe (exogene), um die verfallende Gewebe. Diese Nachteile haben als ein Problem bei der Anwendung dieser Methode auf andere, immer beliebter Forschungsziele entwickelt. Diese modernen Zielen gehören erniedrigender Lignocellulose für Bioenergie Forschungs-, Versuchs Sanierung von co-metabolisiert Giftstoffe, die Bewertung oxidative Mechanismen und Tracking transloziert Elemente entlang Hyphen Netzwerke. Soil-Blöcke nicht geeignet genug Kontrolle in diesen Anwendungen. Ein raffiniertes Agar-Block-Ansatz notwendig ist.

Hier verwenden wir die Braunfäule Holz abbauenden Pilz Serpula lacrymans, um Holz in Agar-Block Mikrokosmen degradieren, mit tiefen Petrischalen mit Low-Calcium-Agar. Wir testen die Rolle von exogenen Gips am Zerfall in eine Zeitreihe, um den Nutzen und die erwarteten Schwankungen zeigen. Die Blöcke aus dem Single-Board-rip (Längsschnitt) bedingt sind, gewogen, autoklaviert und aseptisch eingeführt Spitze Kunststoffgitter. Fungal Impfungen sind bei jedem Block Gesicht, mit exogenen Gips added at Interfaces. Ernten sind bis zur endgültigen zerstörerischen Ernte steril. Diese Mikrokosmen sind so konzipiert, blockieren Kontakt mit Agar oder Petrischale Wände zu vermeiden. Kondenswasser wird während der Platte gießt und während der Inkubation minimiert. Schließlich ist Inokulum / Gips / Holz Abstand, aber ohne dass Kontakt minimiert. Diese weniger technische Aspekte der Agar-Block-Design sind auch die häufigsten Ursachen des Scheiterns und die wichtigste Quelle der Variabilität zwischen den Studien. Video Veröffentlichung ist daher in diesem Fall sinnvoll, und wir zeigen Low-Variabilität, qualitativ hochwertige Ergebnisse.

Protokoll

Dieses Protokoll gilt für holzig und nicht verholzte Substrate, wie skizziert, sowie im Ofen oder in der Luft-getrockneten Materials. Lesen Sie das Protokoll aber zunächst vor Set-up. Es gibt mehrere Punkte angehoben, die möglicherweise zu Ihrem Studienplatz bewerben, und diese Punkte (unterstrichen) Planung erfordern. Beachten Sie auch, dass es zwei veröffentlichte Agar-Block-Methoden, die gelegentlich benutzt werden, einer der British Standard 838 und eine andere nach einer International Research Group on Wood Protection (IRG-WP) Papier von Bravery (1978) vorgelegt. Unsere ähnelt Methode 838, mit Änderungen vor allem in den Mikrokosmos Design und die Kontrolle der ....

Diskussion

Mit unserem Agar-Block Set-up (Abbildung 1) Serpula lacrymans wuchs in direkten Kontakt mit dem Gips Oberflächen und in hölzernen Blöcken (Abbildung 2), was zu mehr als 60% Gewichtsverlust in der Kontrollgruppe braun-verrottete Kiefer-Blöcke (Abbildung 3 ). Diese leicht erfüllt die ASTM-Standard Ziel von> 50% Verfall, und die durchschnittliche Variationskoeffizient (C _V) in Verfall an war 0,055 16 Wochen. Diese Daten können in Schilling ⁷ veröffentlicht. Auch hier wird anderen Pilzen er.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Petrischalen	Nalge Nunc international	4014	25 x 150 mm
Agar, Typ A	Sigma-Aldrich	A4550
Ammoniumnitrat, NH4NO3	Millinckrodt	3436-12
Kaliumphosphat, KH2PO4	JT Baker	3246-01
Magnesiumsulfat 7-hydrat, MgSO4• 7H2O	Sigma-Aldrich	230391
D-(+)-Glukose	Sigma-Aldrich	G8270	Dextrose
, Borsäure, H3BO4	Mallinckrodt Baker Inc.	2549-04
Zinksulfat-7-hydrat, ZnSO4• 7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	8880-12
Manganchlorid-4-hydrat, MnCl2• 4H2O	JT Baker	2540-04
Kupfer(II)-sulfat-5-hydrat, CuSO4• 5H2O	Sigma-Aldrich	209198
Ammonium-Heptamolybdat-4-hydrat, (NH4)6Mo7O24• 4H2O	Sigma-Aldrich	431346
Calciumchlorid-Dihydrat, CaCl2• 2H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	4160-12
Natriumchlorid, NaCl	Mallinckrodt Baker Inc.	7581-12
Eisensulfat-7-hydrat, FeSO4• 7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	5056-12
Pipetenhilfe	Drummond Scientific	4-000-110	Cordless EtOH die Oberfläche
10 ml sterile Polystyrolpipette	BD Biosciences	357551
Dachrinnenschutz	Thermwell Products Co.	VX620	Vorgeschrubbt mit Seife Baumarkt
Calciumsulfat-Halbhydrat, CaSO4• 0.5H2O	Acros Organics	385355000
#4 Korkbohrer	Boekel Scientific	1601
Parafilm "M"	Pechiney Kunststoffverpackung	PM-996