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Methoden für die Patch-Clamp Kapazität Recordings aus dem Kelch

DOI:

10.3791/244

July 29th, 2007

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Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wir zeigen die grundlegenden Techniken für die präsynaptische Patch-Clamp-Aufzeichnung am Kelch der Held, ein zentralen Nervensystem von Säugetieren Nervenendigung. Elektrische Aufnahmen aus den präsynaptischen Terminal ermöglichen die Messung der Aktionspotentiale, Calcium-Kanal-Ströme, Vesikelfusion (Exozytose) und anschließende Membran-Aufnahme (Endozytose). Die Fusion von Vesikeln mit Neurotransmitter bewirkt, dass die Vesikelmembran an die Zellmembran der Kelch hinzugefügt werden. Dieser Anstieg in Höhe von Zellmembran ist eine Erhöhung der Kapazität gemessen. Die anschließende Reduktion der Kapazität zeigt Endozytose, den Prozess der Membran die Aufnahme oder Streichung aus dem Kelch Membran. Endozytose, ist notwendig, um die Struktur der Kelch zu halten und es ist auch notwendig, um Vesikel, die mit Neurotransmitter für zukünftige Exozytose Ereignisse gefüllt werden bilden. Kapazität Aufnahmen am Kelch von Held haben es möglich gemacht, um direkt und schnell messen vesikuläre Freisetzung und anschließende Endozytose in einem Säuger-ZNS Nervenendigung. Darüber hinaus können die entsprechenden postsynaptischen Aktivität gleichzeitig mit gepaart Aufnahmen gemessen werden. So ein vollständiges Bild von der präsynaptischen und postsynaptischen elektrische Aktivität an einem zentralen Nervensystems Synapse ist erreichbar mit diesem Präparat. Hier werden die Methoden zur Scheibe Vorbereitung, morphologische Merkmale zur Identifizierung von Kelchen der Held, grundlegende Patch-Clamp-Techniken und Beispiele der Kapazität Aufnahmen Exozytose und Endozytose Maßnahme.

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Patch-Clamp-Setup:

Optik: Die Optik ist sehr wichtig, eine gute Zelle zu finden, und um die Position der es zu etablieren.

Versuchen Sie, ein klares Bild von den Zellen zu erhalten: scharfe Kanten, weich aussehende Zelle.

Scan das gesamte Feld, für gute MNTB wichtigsten Zellen mit angeschlossenem Kelch zu suchen. Drehen Gericht für Kelche aus verschiedenen Blickwinkeln betrachten. Zunächst ist es OK, um auf Ballon-förmigen Klemme Praxis.

Pick-Zellen an der Oberfläche des Slice, oder in der 2. Zellschicht. Ziel der ersten 1 / 3 ....

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Calyx of HeldPatch Clamp RecordingCapacitance MeasurementsExocytosis EndocytosisBrain Slice PreparationPresynaptic TerminalMembrane TraffickingElectrophysiology TechniquesVibratome SectioningIntracellular Solution

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