Maus Blasenwand Injektion ist ein nützlicher Ansatz zur orthotop Studie Blase Stammzell-und Tumorbiologie. Dieses zarte mikrochirurgische Methode kann bei sorgfältiger Technik und Praxis gemeistert werden.
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Methodenartikel
Maus Blasenwand Injection
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Maus Blasenwand Injektion ist eine nützliche Technik, um orthotop Studie Blase Phänomene, einschließlich Stammzellen, glatte Muskelzellen und Tumorbiologie. Vor Beginn der Injektionen, muss der OP-Bereich mit Wasser und Seife und Desinfektionsmittel gereinigt werden. Chirurgische Geräte müssen vor dem Gebrauch und zwischen jedem Tier sterilisiert werden. Jede Maus ist unter inhalativen Isofluran-Narkose gelegt (2-5% für die Induktion, 1-3% für die Wartung) und seine Blase, indem Sie eine Mittellinie Bauchschnitt mit einer Schere ausgesetzt. Wenn die Blase voll ist, ist es teilweise dekomprimiert durch sanftes Pressen zwischen zwei Fingern. Die Zellsuspension von Interesse ist intramural in die Wand der Blase Kuppel mit einem 29 oder 30 Gauge-Nadel und 1 cc oder kleineren Spritze injiziert. Die Wunde wird dann geschlossen mit Wundklammern und die Maus darf auf eine wärmende Unterlage zu erholen. Blasenwand Injektion ist eine heikle mikrochirurgische Technik, die mit der Praxis gemeistert werden können.
Protokoll
1. Maus Blasenwand Injection
Wahl der Maus-Stamm, Alter und Geschlecht wird durch experimentelle Bedürfnisse diktiert. Wir verwenden Mäusen zwischen 8 und 12 Wochen alt, da es sich um ein Fenster von immunologischen Reife vor Seneszenz. Als allgemeine Richtlinie sollten Mäuse kommen mindestens eine Woche vor der experimentellen Manipulation, um Stress-induzierten Störfaktoren zu vermeiden.
- Reinigen Sie den OP-Tisch Oberfläche mit Wasser und Seife.
- Wischen Sie die OP-Tisch Oberfläche mit Cide Swipes oder antiseptischen Tüchern.
- Autoclave saubere chirurgische Instrumente vor in der Chirurgie verwendet werden.
- Darüber hinaus sterilisieren Instrumente mit heißem bead Sterilisator unmittelbar vor der Verwendung, sowie zwischen Tieren während der Operation.
- Reinigen Sie 100 ul Hamilton Spritzen und 29 oder 30 Gauge (2.1 inch lang) Nadeln durch wiederholte Aspiration und Injektion mit absolutem Alkohol vor dem ersten Gebrauch und am Ende der letzten chirurgischen Eingriff.
- Waschen und spülen Hamilton Spritzen mit sterilen Phosphat-gepufferter Salzlösung zwischen den einzelnen Tieres.
- Anesthetize Mäusen, indem sie in einer Isofluran Induktion Kammer, mit der Isofluran-Wert zwischen 2-5%.
- Sobald Vollnarkose erreicht ist, entfernen Sie die Maus aus der Kammer und in der Rückenlage mit einem warmen Polster unter zur Aufrechterhaltung der normalen Körpertemperatur.
- Erzielen Aufrechterhaltung der Narkose, indem das Tier die Schnauze in eine Düse mit verdampfen Isofluran (titriert von 1-3% als notwendig entsprechende Anästhesie aufrecht zu erhalten).
- Shave der Bauchhaut mit Klipper.
- Verwenden Sie eine sterile Einmal-OP-Tuch um den Anus Abdeckung, um fäkale Kontamination während der Operation zu verhindern.
- Verwenden Sie eine zweite sterile Einmal-OP-Tuch, um das OP-Feld (Unterbauch) zu decken.
- Prep den Bauch mit drei Stücken von Betadine-getränkte Gaze. Wiederholen Sie diesen Schritt dreimal.
- Mit einem Binokular für Vergrößerung, eine untere Mittellinie Bauchschnitt mit einer Schere.
- Expose der Blase.
- Wenn die Blase voll ist, teilweise dekomprimieren von sanften Druck auf die Kuppel.
- Die Probe-Lösung (bis zu 50 ul), mit einem 29 oder 30 Gauge-Nadel und Spritze in die Wand der Blase Kuppel (intramurale Injektion) mit der Abschrägung der Nadel nach oben zeigt.
- Drücken Sie den Kolben der Spritze, um die Probe-Lösung in die Blasenwand injiziert. Ein gut lokalisiert bleb ist ein Indiz für eine erfolgreiche Injektion der Zellen in die Blasenwand.
- Entfernen Sie die Spritze, in der Nähe der Einschnitt mit Wundklammern und lassen Sie die Maus auf eine wärmende Unterlage zu erholen.
2. Repräsentative Ergebnisse:
Ein gut lokalisiert bleb, das nicht leckt Flüssigkeit und bleibt in der Größe stabil ist ein Indiz für eine erfolgreiche Injektion der Zellen in die Blasenwand (Abb. 1). Histologische Analyse durchgeführt werden, um die Anwesenheit der injizierten Zellen in der Blasenwand zu bestätigen.
Abbildung 1. Beispiel für erfolgreiche Blasenwand Injektion mit Tusche zur Illustration.
Abbildung 2. Schematische Darstellung des experimentellen Verfahren.
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Diskussion
Maus Blasenwand Injektion ermöglicht die Implantation von speziellen Zellen in definierten Bereichen der Blasenwand. Diese Technik hat große Anwendungen für Mausmodelle von Blasenkrebs, glatte Muskelzellen und Stammzellbiologie. Per Definition erleichtert Maus Blasenwand Injektion Einführung von Blasenkrebs oder Stammzellen in einem orthotopen Lage, so dass deren Wachstum und Differenzierung in einem physiologisch relevanten anatomischen Kontext untersucht werden können. In der Tat, Dinney et al. zum ersten Mal beschrie...
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Wir danken für die Unterstützung eines Pilot Zuschuss von der Stanford Pediatric Research Fund und K08DK087895-01 aus dem NIDDK.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog-Nummer | |
| Isofluran (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | |
| 29 oder 30 Gauge-Nadeln | Hamilton | 7803-06 oder 7803-07 | |
| 100 Mikroliter Spritze | Hamilton | 7656-01 |
Referenzen
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Nachdrucke und Genehmigungen
