Methoden zur raschen Transfer und die Lokalisierung von Lyme-Borreliose Erreger innerhalb der Tick Gut

Zusammenfassung

Lyme-Borreliose Studien erfordern oft Generation von Zecken mit dem Erreger Borrelia burgdorferi, ein Prozess, der dauert in der Regel mehrere Wochen infiziert. Hier zeigen wir eine Mikroinjektion-basierte Zecken Infektion Verfahren, das innerhalb weniger Stunden erreicht werden kann. Wir zeigen auch einer Immunfluoreszenz-Methode zur in situ-Lokalisation von B. burgdorferi in Zecken.

Zusammenfassung

Lyme-Borreliose wird durch eine Infektion mit dem Erreger Borrelia burgdorferi Spirochäten, die in der Natur von einer Zecke-Nagetier Infektionszyklus ¹ beibehalten verursacht. Eine durch Zecken übertragene murine Modell ² wurde entwickelt, um Lyme-Borreliose im Labor zu untersuchen. Während naive Zecken mit B. infiziert sein burgdorferi, indem man sie auf infizierten Mäusen, so erfolgt die Häutung Prozess mehrere Wochen bis Monate in Anspruch nehmen. Daher ist die Entwicklung von schnelleren und effizienteren Zecken Infektion Techniken, wie eine Mikroinjektion-basiertes Verfahren, ein wichtiges Instrument für die Erforschung der Lyme-Borreliose ^3,4. Das Verfahren erfordert nur wenige Stunden, um infizierte Zecken zu generieren und ermöglicht die Kontrolle über die Lieferung von gleichen Mengen von Spirochäten in einer Kohorte von Zecken. Dies ist besonders wichtig, da die Erzeugung von B. burgdorferi infizierten Zecken durch die natürliche Fütterung Prozess mit Mäusen nicht zu 100% Infektionsrate und potenziell Ergebnisse in Variation der Erreger Belastung unter zugeführt Zecken zu gewährleisten. Darüber hinaus kann die Mikroinjektion verwendet werden, um Zecken mit B. zu infizieren burgdorferi-Isolate in Fällen, in denen eine abgeschwächte Stamm ist nicht auf eine Infektion in Mäusen zu etablieren und damit kann natürlich nicht durch Zecken ^{5 Erwerb} werden. Diese Technik kann auch verwendet werden, um eine Vielzahl von anderen biologischen Materialien in Zecken zu liefern, z. B. spezifische Antikörper oder Doppel-RNA ⁶ gestrandet. In diesem Artikel werden wir die Mikroinjektion von Nymphen mit in vitro-grown B. zeigen, burgdorferi. Wir werden auch eine Methode zur Lokalisierung von Lyme-Borreliose Erreger in der Zecke gut mit Hilfe der konfokalen Immunfluoreszenz-Mikroskopie.

Protokoll

1. Mikroinjektion von Nymphen Ixodes scapularis Ticks

1. Vorbereitung Nadeln

1. Fertigen Sie mehrere Mikroinjektion Nadeln durch Erhitzen und Ziehen 1 mm Glaskapillaren (World Precision Instruments) in einem Glasmikropipette Abziehvorrichtung (Narishige). Entfernen Sie vorsichtig das fragile Kapillaren.
2. Shop gezogen Nadeln (mit der Spitze nach oben) auf Klebeband in einer Petrischale.

2. Vorbereitung B. burgdorferi

1. Wachsen B. burgdorferi in BSK Kulturmedien ⁷ bis zu einer Konzentration von etwa 10 ⁷ Zellen pro mL. Spirochäten sind ....

Diskussion

Hier zeigen wir eine Mikroinjektion-basiertes Verfahren zur schnellen und effizienten Infektion nymphal Ixodes-Zecken mit dem bakteriellen Erreger B. burgdorferi. Wir beschreiben auch eine konfokale Immunfluoreszenz Verfahren für den Nachweis von B. burgdorferi in der Zecke gut in situ. Obwohl unsere Demonstration beinhaltet nymphal gut, sind ähnliche Verfahren auch für andere Entwicklungsstadien der Zecken, wie Larven oder Erwachsene ^8,9. Aufgrund ihrer geringen Größe kann die Tech.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Glas-Kapillarröhrchen	World Precision Instruments, Inc.	TW100F-4
Vertikaler Glaszieher	Narishige International	PC-10
Zählkammer nach Petroff-Hausser	Hausser Scientific	3900
Mikrolader-Pipettenspitzen	Eppendorf	930001007
Femtojet-Mikroinjektor	Eppendorf	920010504
Fußschalter für FemtoJet	Eppendorf	920005098
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung	Fisher Scientific	BP665-1	Filtersterilisiert